II. PHƢƠNG PHÁP THỬ
2.6. tinh khiết: áp dụng phương pháp đo phổ UV ở bước sóng 254 nm.
2.6.1. Chất chuẩn, trang thiết bị, máy móc, dung môi
Chất chuẩn: itraconazol 99,9% tính theo chế phẩm hiện trạng (chuẩn USP).
Trang thiết bị
- Máy quang phổ UV-Vis Shimadzu UV-1800. - Bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, 5 ml. - Pipet chính xác 10 ml, 5 ml, 2 ml, 1 ml.
- Micropipet 0,1 - 1 ml.
- Màng lọc Sartorius 0,45 µm; giấy lọc cellulose. - Phễu thủy tinh.
Hóa chất, dung môi: dimethylformamid, nước cất 2 lần, dung dịch HCl 0,1 N.
2.6.2. Chuẩn bị mẫu
Mẫu chuẩn:cân chính xác khoảng 5 mg itraconazol chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 0,5 ml dimethylformamid, lắc đều, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N, lắc đều đến khi tan hoàn toàn, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ khoảng 100 μg/ml).
Mẫu thử: cân chính xác một lượng phức itz-HPβCD tương ứng với khoảng 50 mg itz cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi phức tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ qui về itraconazol khoảng 100 μg/ml).
Dung dịch HPβCD: cân chính xác khoảng 209,4 mg HPβCD (tương ứng với lượng phức itz-HPβCD chứa khoảng 50 mg itraconazol), cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều.
Mẫu kiểm tra: cân chính xác khoảng 50 mg itraconazol chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N, lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều.
2.6.3. Tiến hành định lƣợng
Đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng 254 nm, dùng dung dịch HCl 0,1 N có chứa 1% dimethylformamid làm mẫu trắng. Phép thử chỉ có giá trị khi độ hấp thụ của mẫu kiểm tra và dung dịch HPβCD tại bước sóng 254 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Tính kết quả
Độ tinh khiết của phức itz-HPβCD tính theo chế phẩm hiện trạng được tính theo công thức: ( ) Trong đó:
- X%: độ tinh khiết của phức itz-HPβCD.
- At: độ hấp thụ của mẫu thử tại bước sóng 254 nm. - Ac: độ hấp thụ của mẫu chuẩn tại bước sóng 254 nm. - Cc: nồng độ của mẫu chuẩn (µg/ml)
- 3662,49: phân tử lượng trung bình của phức itz-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 2. - 635,40: khối lượng trung bình của itraconazol có trong một phân tử lượng
trung bình của phức itz-HPβCD. - P: lượng phức cân (mg).
Thẩm định qui trình
Tính chọn lọc
Quét phổ tử ngoại (200 – 400 nm) của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra.
Yêu cầu:
- Mẫu thử phải có phổ hấp thụ tử ngoại và bước sóng hấp thụ cực đại (254 ± 1 nm) giống mẫu chuẩn.
- Dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra không có bước sóng hấp thụ cực đại tại 254 ± 1 nm. Độ hấp thụ của dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng hấp thụ cực đại 254 ± 1 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Khoảng tuyến tính
Chuẩn bị một dãy dung dịch itraconazol chuẩn có nồng độ khác nhau. Tiến hành đo độ hấp thụ các dung dịch chuẩn ở bước sóng 254 nm. Mỗi dung dịch đo 3 lần, lấy giá trị trung bình. Tính hệ số tương quan R và thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ. Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá tính tương thích của phương trình hồi quy. Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa của các hệ số trong phương trình hồi quy.
Yêu cầu: Hệ số tương quan R giữa nồng độ và độ hấp thụ phải lớn hơn 0,990.
Độ chính xác
Chuẩn bị 6 dung dịch mẫu thử và đo độ hấp thụ tại bước sóng 254 nm. Tính độ tinh khiết của phức itz-HPβCD.
Yêu cầu: độ lệch chuẩn tương đối của 6 lần thử ≤ 2%.
2.7. Giới hạn nhiễm khuẩn: thử theo qui định của DĐVN IV, phụ lục 13.6.
III. ĐÓNG GÓI-BẢO QUẢN
Đóng trong bao bì kín, tránh ẩm, có nhãn theo qui định. Bảo quản nơi khô mát
TP. Hồ Chí Minh, ngày 24 tháng 6 năm 2014
Trung tâm KHCN Dƣợc Sài gòn
Phụ lục 20
TIÊU CHUẨN CƠ SỞ
ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP. HỒ CHÍ MINH
TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƢỢC SÀI GÒN NGHỆ DƢỢC SÀI GÒN PHỨC ITRACONAZOL- HYDROXYBUTYL-β- CYCLODEXTRIN Số TC: 06 TCCS Có hiệu lực từ ngày:
I. YÊU CẦU KỸ THUẬT
1.1. Tính chất: bột màu trắng hoặc trắng ngà, dễ tan trong nước và ethanol, khó tan trong aceton, không tan trong cyclohexan. aceton, không tan trong cyclohexan.
1.2. Định tính: chế phẩm phải có phổ IR, 1
H-NMR đặc trưng của phức itraconazol- hydroxybutyl-β-cyclodextrin (itz-HBβCD).
1.3. Giảm khối lƣợng do làm khô: không quá 5%.
1.4. Kim loại nặng: không quá 20 ppm.
1.5. Cắn sau khi nung: không quá 0,1%.
1.6. Độ tinh khiết: ≥ 90% tính theo chế phẩm hiện trạng.
1.7. Giới hạn nhiễm khuẩn: đạt theo tiêu chuẩn qui định của DĐVN IV (phụ lục 13.6).
II. PHƢƠNG PHÁP THỬ 2.1. Tính chất 2.1. Tính chất
Bằng cảm quan chế phẩm phải đạt yêu cầu qui định.
Đánh giá độ tan của chất thử theo qui định chung của DĐVN IV.
2.2. Định tính
Phổ IR: áp dụng kỹ thuật viên KBr.
Chuẩn bị mẫu thử: nghiền 1 - 2 mg phức itz-HBβCD với 100 - 200 mg bột mịn KBr (dùng cho IR) đã được sấy khô, đủ để tạo thành 1 viên nén có đường kính 13 mm và cho phổ có cường độ phù hợp. Hỗn hợp được nghiền cẩn thận và rải đều trên một khuôn thích
hợp. Nén khuôn có hỗn hợp chất thử tới áp suất khoảng 800 Mpa trong điều kiện chân không.
Tiến hành đo phổ IR.
Yêu cầu: phổ IR của mẫu thử phải có các đỉnh hấp thụ đặc trưng của các nhóm chức: O-H (3406 cm-1), C-H (2934 cm-1), C-O (1030 cm-1), C=O (1692 cm-1), C=N và C-N (1460 cm-1), vòng thơm (1518 cm-1
).
Phổ 1H-NMR: đo phổ 1H-NMR trong dung môi DMSO trên máy NMR Bruker AC 500 MHz, T = 300 K.
Yêu cầu: phổ 1H-NMR của mẫu thử phải có các tín hiệu tương ứng với độ dịch chuyển hóa học đặc trưng của phức itz-HBβCD.
2.3. Giảm khối lƣợng do làm khô: xác định trên 1,0 g chế phẩm. Dùng chén cân có nắp mài làm bì đựng mẫu, sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút mài làm bì đựng mẫu, sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng bì (a g). Cân mẫu thử (m g) cho vào chén cân đã cân bì, đem sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, để nguội trong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng (b g).
Hàm lượng nước bị mất x (%) sau khi sấy được tính theo công thức:
( ) ( )
2.4. Kim loại nặng: hòa tan 5,0 g chế phẩm trong 50 ml nước không có carbon dioxyd (dung dịch S): tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, phương pháp 1. (dung dịch S): tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, phương pháp 1.
2.5. Cắn sau khi nung: xác định trên 1,0 g chế phẩm: tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.8, phương pháp 2. 9.8, phương pháp 2.
2.6. Độ tinh khiết: áp dụng phương pháp đo phổ UV ở bước sóng 254 nm.
2.6.1. Chất chuẩn, trang thiết bị, máy móc, dung môi
Chất chuẩn: itraconazol 99,9% tính theo chế phẩm hiện trạng (chuẩn USP).
Trang thiết bị
- Máy quang phổ UV-Vis Shimadzu UV-1800. - Bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, 5 ml. - Pipet chính xác 10 ml, 5 ml, 2 ml, 1 ml.
- Micropipet 0,1 - 1 ml.
- Màng lọc Sartorius 0,45 µm; giấy lọc cellulose. - Phễu thủy tinh.
Hóa chất, dung môi: dimethylformamid, nước cất 2 lần, dung dịch HCl 0,1 N.
2.6.2. Chuẩn bị mẫu
Mẫu chuẩn:cân chính xác khoảng 5 mg itraconazol chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 0,5 ml dimethylformamid, lắc đều, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N, lắc đều đến khi tan hoàn toàn, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ khoảng 100 μg/ml).
Mẫu thử: cân chính xác một lượng phức itz-HBβCD tương ứng với khoảng 50 mg itz, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi phức tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ qui về itraconazol khoảng 100 μg/ml).
Dung dịch HBβCD: cân chính xác khoảng 217,35 mg HBβCD (tương ứng với lượng phức itz-HBβCD chứa khoảng 50 mg itraconazol), cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều,
lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm
dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều.
Mẫu kiểm tra: cân chính xác khoảng 50 mg itraconazol chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều.
2.6.3. Tiến hành định lƣợng
Đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng 254 nm dùng dung dịch HCl 0,1 N có chứa 1% dimethylformamid làm mẫu trắng. Phép thử chỉ có giá trị khi độ hấp thụ của mẫu kiểm tra và dung dịch HBβCD tại bước sóng 254 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Tính kết quả
Độ tinh khiết của phức itz-HBβCD tính theo chế phẩm hiện trạng được tính theo công thức: ( ) Trong đó:
- X%: độ tinh khiết của phức itz-HBβCD.
- At: độ hấp thụ của mẫu thử tại bước sóng 254 nm. - Ac: độ hấp thụ của mẫu chuẩn tại bước sóng 254 nm. - Cc: nồng độ của mẫu chuẩn (µg/ml)
- 3774,97: phân tử lượng trung bình của phức itz-HBβCD tỷ lệ mol 1 : 2. - 635,40: khối lượng trung bình của itraconazol có trong một phân tử lượng
trung bình của phức itz-HBβCD. - P: lượng phức cân (mg).
Thẩm định qui trình
Tính chọn lọc
Quét phổ tử ngoại (200 – 400 nm) của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra.
Yêu cầu:
- Mẫu thử phải có phổ hấp thụ tử ngoại và bước sóng hấp thụ cực đại (254 ± 1 nm) giống mẫu chuẩn.
- Dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra không có bước sóng hấp thụ cực đại tại 254 ± 1 nm. Độ hấp thụ của dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng hấp thụ cực đại 254 ± 1 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Khoảng tuyến tính
Chuẩn bị một dãy dung dịch itraconazol chuẩn có nồng độ khác nhau. Tiến hành đo độ hấp thụ các dung dịch chuẩn ở bước sóng 254 nm. Mỗi dung dịch đo 3 lần, lấy giá trị trung bình. Tính hệ số tương quan R và thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính giữa nồng độ và độ hấp thụ. Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá tính tương thích của phương trình hồi quy. Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa của các hệ số trong phương trình hồi quy.
Yêu cầu: hệ số tương quan R giữa nồng độ và độ hấp thụ phải lớn hơn 0,990.
Độ chính xác
Chuẩn bị 6 dung dịch mẫu thử và đo độ hấp thụ tại bước sóng 254 nm. Tính độ tinh khiết của phức itz-HBβCD.
Yêu cầu: độ lệch chuẩn tương đối của 6 lần thử ≤ 2%.
2.7. Giới hạn nhiễm khuẩn: thử theo qui định của DĐVN IV, phụ lục 13.6.
III. ĐÓNG GÓI-BẢO QUẢN
Đóng trong bao bì kín, tránh ẩm, có nhãn theo qui định. Bảo quản nơi khô mát
TP. Hồ Chí Minh, ngày 24 tháng 6 năm 2014
Trung tâm KHCN Dƣợc Sài gòn
Phụ lục 21
TIÊU CHUẨN CƠ SỞ
ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP. HỒ CHÍ MINH
TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƢỢC SÀI GÒN CÔNG NGHỆ DƢỢC SÀI GÒN PHỨC MELOXICAM- HYDROXYPROPYL-β- CYCLODEXTRIN Số TC: 07 TCCS Có hiệu lực từ ngày:
I. YÊU CẦU KỸ THUẬT
1.1. Tính chất: bột màu vàng nhạt, dễ tan trong nước và ethanol, khó tan trong aceton.
1.2. Định tính: chế phẩm phải có phổ IR, 1H-NMR đặc trưng của phức meloxicam-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (ME-HPβCD). hydroxypropyl-β-cyclodextrin (ME-HPβCD).