1.1. Tính chất: bột màu vàng nhạt, dễ tan trong nước và ethanol, khó tan trong aceton.
1.2. Định tính: chế phẩm phải có phổ IR, 1H-NMR đặc trưng của phức rutin-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (R-HPβCD). hydroxypropyl-β-cyclodextrin (R-HPβCD).
1.3. Giảm khối lƣợng do làm khô: không quá 5%.
1.4. Kim loại nặng: không quá 20 ppm.
1.5. Cắn sau khi nung: không quá 0,1%.
1.6. Độ tinh khiết: ≥ 95% tính theo chế phẩm hiện trạng.
1.7. Giới hạn nhiễm khuẩn: đạt theo tiêu chuẩn qui định của DĐVN IV (phụ lục 13.6)
II. PHƢƠNG PHÁP THỬ 2.1. Tính chất 2.1. Tính chất
Bằng cảm quan chế phẩm phải đạt yêu cầu qui định.
Đánh giá độ tan của chất thử theo qui định chung của DĐVN IV.
2.2. Định tính
Phổ IR: áp dụng kỹ thuật viên KBr.
Chuẩn bị mẫu thử: nghiền 1 - 2 mg phức R-HPβCD với 100 - 200 mg bột mịn KBr (dùng cho IR) đã được sấy khô, đủ để tạo thành 1 viên nén có đường kính 13 mm và cho phổ có cường độ phù hợp. Hỗn hợp được nghiền cẩn thận và rải đều trên một khuôn thích hợp. Nén khuôn có hỗn hợp chất thử tới áp suất khoảng 800 Mpa trong điều kiện chân không. Tiến hành đo phổ IR
Yêu cầu: phổ IR của mẫu thử phải có các đỉnh hấp thụ đặc trưng của các nhóm chức: O-H (3385 cm-1), C-H (2930 cm-1), C-O (1032 cm-1), C=O (1655 cm-1), vòng phenyl
(1605, 1508 và 1458 cm-1), =C-O-C (1296 cm-1).
Phổ 1H-NMR: đo phổ 1H-NMR trong dung môi DMSO trên máy NMR Bruker AC 500 MHz. T = 300 K.
Yêu cầu: phổ 1
H-NMR của mẫu thử phải có các tín hiệu tương ứng với độ dịch chuyển hóa học đặc trưng của phức R-HPβCD.
2.3. Giảm khối lƣợng do làm khô: xác định trên 1,0 g chế phẩm. Dùng chén cân có nắp mài làm bì đựng mẫu, sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút mài làm bì đựng mẫu, sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng bì (a g). Cân mẫu thử (m g) cho vào chén cân đã cân bì, đem sấy ở nhiệt độ 120 oC trong 2 giờ, để nguội trong bình hút ẩm, cân xác định khối lượng (b g).
Hàm lượng nước bị mất x (%) sau khi sấy được tính theo công thức:
( ) ( )
2.4. Kim loại nặng: hòa tan 5,0 g chế phẩm trong 50 ml nước không có carbon dioxyd (dung dịch S): tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, phương pháp 1. (dung dịch S): tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.4.8, phương pháp 1.
2.5. Cắn sau khi nung: xác định trên 1,0 g chế phẩm: tiến hành theo DĐVN IV, phụ lục 9.8, phương pháp 2. 9.8, phương pháp 2.
2.6. Độ tinh khiết: áp dụng phương pháp đo phổ UV ở bước sóng 362,5 và 375 nm.
2.6.1. Chất chuẩn, trang thiết bị, máy móc, dung môi
Chất chuẩn: rutin (Sigma R 5143), công thức: C27H30O16.1H2O, hàm lượng 94% tính theo chế phẩm hiện trạng.
Trang thiết bị
- Máy quang phổ UV-Vis Shimadzu UV-1800. - Bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, 5 ml. - Pipet chính xác 10 ml, 5 ml, 2 ml, 1 ml.
- Micropipet 0,1 - 1 ml.
- Phễu thủy tinh.
Hóa chất, dung môi: nước cất 2 lần, ethanol 96o, acid acetic 0,02 N.
2.6.2. Chuẩn bị mẫu
Mẫu chuẩn: cân chính xác khoảng 5 mg rutin chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm
35 ml ethanol 96o, lắc đều đến khi tan hoàn toàn, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ khoảng 100 μg/ml).
Mẫu thử: cân chính xác một lượng phức R-HPβCD tương ứng với khoảng 50 mg rutin, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi phức tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml ethanol 96o, lắc đều, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ qui về rutin khoảng 100 μg/ml).
Dung dịch HPβCD: cân chính xác khoảng 110,0 mg HPβCD (tương ứng với lượng phức R-HPβCD chứa khoảng 50 mg rutin), cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều đến khi HPβCD tan hết, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml ethanol 96o, lắc đều, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều.
Mẫu kiểm tra: cân chính xác khoảng 50 mg rutin chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nước cất nóng, lắc đều, để nguội, thêm nước cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml ethanol 96o, lắc đều, thêm 0,5 ml dung dịch acid acetic 0,02 N; thêm ethanol 96o đến vạch, lắc đều.
2.6.3. Tiến hành định lƣợng
Đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra tại bước sóng 362,5 nm và 375 nm, dùng ethanol 96o chứa 1% dung dịch acid acetic 0,02 N làm mẫu trắng. Phép thử chỉ có giá trị khi mẫu chuẩn và mẫu thử phải có tỷ số A375/A362,5 nhỏ
hơn 0,879 và độ hấp thụ của mẫu kiểm tra và dung dịch HPβCD tại bước sóng 362,5 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Tính kết quả
Độ tinh khiết của phức R-HPβCD tính theo chế phẩm hiện trạng được tính theo công thức: ( ) Trong đó:
- X%: độ tinh khiết của phức R-HPβCD.
- At: độ hấp thụ của mẫu thử tại bước sóng 362,5 nm. - Ac: độ hấp thụ của mẫu chuẩn tại bước sóng 362,5 nm.