3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1.5. Các loại môi trường nhân tạo ựể nuôi cấy và phân lập nấm
Pyricularia oryzae Cav.
* Môi trường WA (Nước - Aga): dùng ựể lấy ựơn bào tử nấm Pyricularia
oryzae
Thành phần: + Aga: 20gam
+ Nước cất: 1000ml
Cách làm: Cho 1000ml nước vào xoong, hoà agar vào 1000ml nước, dùng ựũa quấy cho agar tan ựều, cho lên bếp ựiện ựun, vừa ựun vừa quấy ựều tay sau khi sôi 2 phút, cho xoong ra khỏi bếp, ựổ môi trường vào chai McCartney, vặn nắp vừa phải (không ựược vặn chặt quá), cho vào nồi hấp, hấp khử trùng 15 phút. hấp xong, lấy lọ môi trường ra khỏi nồi hấp, ựổ môi trường vào các hộp lồng, ựổ ắt rồi lắc cho môi trường loang thành lớp rất mỏng trong hộp lồng, ựậy nắp lại, khi môi trường nguội, cho các hộp này vào túi nilon trắng sạch buộc lại bằng dây chun, ựể vào khay nhựa, cất vào tủ ựể sử dụng dần.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 37
* Môi trường PSA (Khoai tây - ựường saccarose - aga): dùng ựể giữ nấm
Pyricularia oryzae
Thành phần: +Khoai tây: 200gam
+Saccarose (ựường ăn): 20gam +Aga: 20gam
+Nước cất: 1000ml
Cách làm: 200g khoai tây gọt sạch vỏ, cắt lát mỏng luộc nhừ với 1ắt nước sau ựó lọc qua 4 lớp vải màn lấy nước trong. Cho nước khoai tây, ựường ăn, agar vào xoong rồi quấy ựều, cho xoong lên bếp vừa ựun vừa quấy ựều tay cho sôi ựều rồi ựổ vào lọ McCartney hấp khử trùng ở 121oC trong 15 phút, hấp xong cho môi trường vào hộp lồng ựậy nắp lại, khi môi trường nguội, cho các hộp này vào túi nilon trắng sạch buộc lại bằng dây chun, ựể vào khay nhựa, cất vào tủ. Sau 1-2 ngày ựưa ra cấy nấm.
*Môi trường OMA: Dùng ựể nuôi cấy nấm
- Thành phần: 50g OMA + 20g agar + 20g ựường + 1 lit nước cất
*Môi trường PSA nghiêng trong ống nghiệm: dùng ựể giữ nấm
Thành phần ( Xem thành phần môi trường PSA)
Cách làm: Cách chuẩn bị nấu môi trường PSA như trên nhưng không cho vào lọ McCartney mà dùng bơm ựể bơm môi trường vào ống nghiệm, mỗi ống 10 ml, ựậy nút cao su vừa phải, cho vào già ống nghiệm, hấp khử trùng ở 121oC trong 15 phút, hấp xong, lấy giá ống nghiệm ra ựể nằm nghiêng trên thanh ựồng ựể tạo mặt phẳng nghiêng của môi trường trong ống nghiệm, khi nguội cất giá ống nghiệm và tủ. Sau 1-2 ngày ựưa ra cấy nấm.