4. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
2.4.6. Nghiên cứu về thời gian phát triển của ấu trùng sán lá gan trong ố c ký
ký chủ trung gian
* Phương pháp tạo ra Ộốc sạchỢ để bố trắ thắ nghiệm
Thu thập ốc L. viridis và L. swinhoei từ các ruộng lúa, ao, suối, bãi chăn thả trâu, bò ở một số địa phƣơng của tỉnh Tuyên Quang, đƣa về phòng thắ nghiệm để nuôi.
Ốc đƣợc nuôi ở điều kiện nhiệt độ và độ ẩm không khắ bình thƣờng, trong 1 bể thuỷ tinh (kắch thƣớc 60 x 30 x 30 cm) chứa nƣớc và các cây cỏ thuỷ sinh.
Lưu ý: Các cây cỏ thuỷ sinh phải thả sao cho một phần ngập trong nước, một phần nổi trên mặt nước trong các bể để cho ốc bám vào và có thể bò lên khỏi mặt nước theo cây cỏ.
Dùng rau xà lách sạch làm thức ăn cho ốc hàng ngày, cho ốc ăn thêm thức ăn viên của cá (theo kinh nghiệm của chúng tôi khi nuôi ốc, dùng thức ăn viên của cá cho ốc ăn thì ốc phát triển rất tốt và có sức sống cao).
Thay nƣớc cho ốc thƣờng xuyên (2 - 3 ngày/lần, dùng nƣớc ao hoặc nƣớc giếng khoan).
Ốc trƣởng thành nuôi 3 - 8 ngày là bắt đầu đẻ trứng. Ốc đẻ nhiều trứng và đẻ thành ổ. Khi quan sát bằng mắt thƣờng có thể thấy trứng ốc tập trung thành những dải màu trắng hơi đục và nhầy. Khi gặp nhiệt độ thắch hợp (30 - 370C) trứng sẽ nở thành ốc con sau 2 - 3 tuần. Nuôi ốc con tới khi đạt kắch thƣớc 10 - 20 mm thì tiến hành gây nhiễm ấu trùng sán lá gan (nếu gây nhiễm quá sớm khi ốc chƣa phát triển thì tỷ lệ nhiễm rất thấp). Thời gian phát triển từ ốc con đến khi gây nhiễm khoảng 1,5 tháng tùy mùa.
* Thắ nghiệm 5: Theo dõi thời gian phát triển của ấu trùng sán lá gan trong các loài ốc đã xác định là ký chủ trung gian
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Thắ nghiệm gồm 5 lô, mỗi lô có 100 ốc L. viridis. Gây nhiễm ấu trùng
Miracidium cho ốc để theo dõi thời gian phát triển của ấu trùng sán lá gan trong ốc. Sau khi gây nhiễm 3 - 5 ngày thì thay nƣớc cho ốc thƣờng xuyên cho tới khi Cercaria ra khỏi ốc, hình thành Adolescaria.
Sau khi gây nhiễm, mỗi ngày lấy 5 ốc ở 5 lô, ép ốc và kiểm tra dƣới kắnh hiển vi để tìm ấu trùng sán lá gan. Kiểm tra dƣới kắnh hiển vi hàng ngày để theo dõi thời gian Miracidium phát triển thành Sporocyst, thời gian từ
Sporocyst thành Redia, thời gian từ Redia thành Cercaria và thời gian từ
Cercaria thành Adolescaria. Chụp ảnh, quay video các dạng ấu trùng và sự vận động của chúng.
Xác định thời gian từ khi trứng rơi vào nƣớc đến khi phát triển thành
Adolescaria: sau khi cho trứng sán lá gan vào môi trƣờng nƣớc, theo dõi cho
đến khi ấu trùng Cercaria ra khỏi ốc và tạo thành Adolescaria. Từ đó tắnh đƣợc thời gian từ trứng phát triển thành Adolescaria.
Khi Cercaria ra khỏi ốc hình thành Adolescaria, Adolescaria bám vào phần cây thủy sinh chìm trong nƣớc, có nhiều Adolescaria vẫn lơ lửng trong nƣớc, không bám vào cây cỏ thủy sinh. Chúng tôi dùng phƣơng pháp lắng cặn để tìm Adolescaria trong môi trƣờng nuôi ốc. Tìm Adolescaria bám vào cây cỏ thủy sinh bằng cách rửa kỹ từng cọng cỏ vào cốc thủy tinh chứa nƣớc sạch, rửa 4 - 5 lần. Để lắng cặn, gạn bỏ phần nƣớc trong bên trên, lấy phần cặn ở đáy kiểm tra dƣới kắnh hiển vi tìm Adolescaria của sán lá gan. Kiểm tra bằng mắt thƣờng hoặc kắnh lúp thấy Adolescaria là những kén tròn nhỏ, màu nâu.
2.4.7. Phương pháp xác định hiệu lực tẩy sán lá gan của thuốc Han - Dertil B và Bio - Alben