4. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
2.4.4. Nghiên cứu thời gian sống của trứng sán lá ga nở ngoại cảnh (kh
không rơi vào môi trường nước)
2.4.4.1. Nghiên cứu thời gian sống của trứng sán lá gan trong phân trâu, bò * Thắ nghiệm 1: Theo dõi thời gian sống của trứng sán lá gan trong phân trâu, bò (trường hợp trứng sán lưu cữu trong phân)
- Lô I: gồm 5 mẫu, các mẫu là hỗn hợp phân của một số trâu, bò bị nhiễm sán lá gan nặng. Mỗi mẫu đƣợc đặt vào một chậu thủy tinh tròn có đƣờng kắnh 30 cm, cao 20 cm, dán nhãn ghi ngày, tháng bắt đầu thắ nghiệm, để mẫu ở điều kiện nhiệt độ và ẩm độ không khắ bình thƣờng.
- Lô II: bố trắ nhƣ lô 1, chỉ khác là các mẫu phân luôn đƣợc duy trì trong trạng thái ẩm ƣớt.
Hàng ngày kiểm tra trạng thái ẩm ƣớt của các mẫu phân ở lô II bằng phƣơng pháp cảm quan, dùng bình phun sƣơng bổ sung nƣớc để duy trì độ ẩm cần thiết.
Mỗi ngày lấy 4 - 5 gam phân từ mỗi mẫu ở cả 2 lô, xét nghiệm phân bằng phƣơng pháp lắng cặn Benedek để tìm trứng sán lá gan.
Xác định thời gian tồn tại của trứng trong phân bằng cách kiểm tra hình thái, cấu tạo của trứng (màu sắc vỏ trứng, phôi bào bên trongẦ) xem có biến đổi gì khác so với trứng sán lá gan bình thƣờng hay không? Những trứng có biến đổi màu sắc, phôi bào bị phân hủy đƣợc tiếp tục theo dõi trong cốc thuỷ tinh chứa nƣớc để xem trứng phát triển đƣợc hay không? Nếu trứng có biến đổi khi quan sát dƣới kắnh hiển vi: phôi bào dung giải, vỏ trứng nhăn nheo, hoặc phôi bào đen lạiẦ, đồng thời khi cho vào môi trƣờng nƣớc trứng không nở đƣợc thành mao
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
ấu thì những trứng này đã bị chết. Từ đó có thể xác định đƣợc thời gian tồn tại của trứng trong phân trâu, bò.
Thắ nghiệm đƣợc bố trắ trong 2 mùa: Mùa Thu và mùa Đông năm 2012.
2.4.4.2.Nghiên cứu thời gian sống của trứng sán lá gan trong đất
Phƣơng pháp xác định và duy trì độ ẩm đất: Xác định độ ẩm của đất trƣớc khi thắ nghiệm theo tài liệu của Lê Văn Khoa và cs (1996) [3]. Độ ẩm của đất trƣớc khi thắ nghiệm đƣợc xác định bằng cách: Lấy 100 gam đất, sấy ở 105ồC cho đến khi khối lƣợng giữa các lần cân không đổi thì dừng lại và tắnh ẩm độ theo công thức:
Wt (%) = (a/b) x 100 Trong đó:
a: Lƣợng nƣớc mất sau khi sấy b: Khối lƣợng đất trƣớc khi sấy Wt: Độ ẩm của đất (%)
Hàng ngày, kiểm tra độ ẩm đất của mỗi lô thắ nghiệm bằng phƣơng pháp cảm quan. Duy trì độ ẩm cần thiết trong suốt thời gian thắ nghiệm (dùng bình phun sƣơng bổ sung nƣớc để duy trì độ ẩm).
* Thắ nghiệm 2: Theo dõi thời gian sống của trứng sán lá gan trong lớp đất bề mặt (trường hợp trứng sán lá gan phát tán ra đất, chưa rơi vào môi trường nước)
Cho đất ở 4 độ ẩm (< 10%; 10 - 20%; 20 - 30%; 30 - 40%) vào 8 khay (đất ở mỗi độ ẩm đƣợc bố trắ trong 2 khay, kắch thƣớc 30 x 20 x 5 cm). Lớp đất dày khoảng 3 - 4 cm. Trộn đều một số lƣợng lớn trứng sán lá gan với lớp đất bề mặt ở mỗi khay. Duy trì độ ẩm đất cần thiết theo từng lô thắ nghiệm:
Lô I: Đất có ẩm độ < 10%. Lô II: Đất có ẩm độ 10% - 20%. Lô III: Đất có ẩm độ 20% - 30%. Lô IV: Đất có ẩm độ 30% - 40%.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Mỗi ngày lấy 4 - 5 gam đất bề mặt trong mỗi lô, xét nghiệm bằng phƣơng pháp lắng cặn 2 bƣớc/lần để tìm trứng sán lá gan:
Bƣớc 1: cho đất vào cốc thủy tinh, đổ nƣớc vào khuấy tan đất. Sau 5 phút gạn sang cốc khác, bỏ cặn.
Bƣớc 2: để nƣớc lọc lắng trong 20 - 30 phút, gạn bỏ nƣớc trên, giữ lại cặn, tiếp tục nhƣ vậy vài lần. Khi nƣớc đã trong thì gạn bỏ nƣớc, giữ lại cặn để kiểm tra dƣới kắnh hiển vi. Từ đó tìm đƣợc trứng sán lá gan trong các mẫu đất.
Xác định thời gian tồn tại của trứng sán lá gan trong đất ở các độ ẩm khác nhau bằng cách: kiểm tra hình thái của trứng, vỏ trứng, phôi bào bên trong trứng. Sau đó, số trứng này đƣợc cho vào cốc thuỷ tinh chứa nƣớc để theo dõi xem trứng đó khi rơi vào môi trƣờng nƣớc có phát triển đƣợc hay không? Nếu trứng bị biến đổi khi quan sát dƣới kắnh hiển vi: phôi bào dung giải, vỏ trứng nhăn nheo, hoặc phôi bào đen lạiẦ, đồng thời khi cho vào môi trƣờng nƣớc trứng không nở đƣợc thành mao ấu thì những trứng này đã bị chết. Từ đó xác định đƣợc thời gian tồn tại của trứng sán lá gan trong đất.
Thắ nghiệm đƣợc bố trắ trong 2 mùa: mùa Thu và mùa Đông năm 2012.