4. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
2.4.3. Phương pháp nghiên cứu trứng và ấu trùng sán lá ga nở ngoại cảnh và
và trong ký chủ trung gian
2.4.3.1. Phương pháp nghiên cứu sự ô nhiễm trứng sán lá gan ở nền chuồng
và khu vực xung quanh chuồng nuôi trâu, bò.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
+ Mẫu đất hoặc cặn nền chuồng trâu, bò: Tại mỗi ô chuồng, lấy mẫu đất (cặn) ở 4 góc chuồng và ở giữa chuồng, trộn đều đƣợc một mẫu xét nghiệm (khoảng 80 Ờ 100 g/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riêng trong túi nilon có nhãn ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu.
+ Mẫu đất bề mặt xung quanh chuồng nuôi: Lấy mẫu đất bề mặt tƣơng tự nhƣ cách lấy mẫu cặn nền chuồng.
- Phƣơng pháp xét nghiệm mẫu
Xét nghiệm bằng phƣơng pháp lắng cặn Benedek để phát hiện trứng sán lá gan.
2.4.3.2. Phương pháp nghiên cứu sự ô nhiễm trứng sán lá gan trên đất ở khu vực bãi chăn thả.
- Phƣơng pháp thu thập mẫu đất bề mặt ở khu vực bãi chăn thả trâu, bò. Mẫu đất bề mặt ở khu vực bãi chăn thả trâu, bò: Tại mỗi khu vực chăn thả, cứ khoảng 20 Ờ 30 m2 lấy ngẫu nhiên ở vị trắ 4 góc và ở giữa, trộn đều đƣợc một mẫu xét nghiệm, khối lƣợng khoảng 80 Ờ 100 g/mẫu. Mỗi mẫu đƣợc để riêng trong túi nilon có nhãn ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu.
- Xét nghiệm mẫu bằng phƣơng pháp lắng cặn Benedek.
2.4.3.3. Phương pháp xác định tỷ lệ mẫu cỏ thủy sinh nhiễm Adolescaria
- Phƣơng pháp lấy mẫu
Lấy mẫu cỏ thủy sinh ở rìa bờ ao, kênh, mƣơng, rãnh nƣớc gần chuồng hoặc trên bãi chăn thả trâu, bò. Lấy ở các vị trắ khác nhau, mỗi mẫu lấy khoảng 30 - 40 cây cỏ. Đựng mẫu trong túi nilon sạch có nhãn ghi thời gian và địa điểm lấy mẫu.
- Phƣơng pháp xét nghiệm
Dùng Adolescaria trong các mẫu cỏ thủy sinh bằng các phƣơng pháp sau: + Dùng kắnh lúp soi kĩ từng cây cỏ trong một mẫu để tìm kén Adolescaria
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
phóng đại 4 x 10 lần, phân biệt Adolescaria của sán Fasiola với kén của các loài sán khác, từ đó xác định sự phát tán ấu trùng sán lá Fasciola ở cỏ thủy sinh.
+ Rửa mẫu cỏ thủy sinh trong cốc thủy tinh dung tắch 500ml có chứa nƣớc sạch, rửa kỹ từng cây cỏ, sau đó vớt cây cỏ ra, để yên 20 Ờ 30 phút cho
Adolescaria lắng xuống, rồi gạn phần nƣớc ở trên đi, giữ lại cặn. Dùng công
tơ gút hút cặn nhỏ lên phiến kắnh, đậy lamen và soi dƣới kắnh hiển vi độ phóng đại 100 lần để tìm Adolescaria.
+ Dùng dao nhỏ nhẹ nhàng nạo lấy lớp ngoài của cỏ thủy sinh, cho vào cốc thủy tinh có nƣớc, khuấy kỹ rồi để yên 20 - 30 phút cho cặn láng xuống, gạn từ từ nƣớc ở trên đi, dùng công tơ gút hút cặn nhỏ lên phiến kắnh, đậy lamen và soi dƣới kắnh hiển vi độ phóng đại 100 lần để tìm Adolescaria.
2.4.3.4. Phương pháp xác định tỷ lệ mẫu nước ở khu vực chăn thả trâu, bò nhiễm trứng sán lá gan
* Phƣơng pháp thu thập mẫu
Dùng que khuấy đều các vũng nƣớc trên bãi chăn thả, lấy cốc thủy tinh múc khoảng 400 Ờ 500 ml/vũng, mỗi mẫu để riêng trong một túi nilon có nhãn ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu.
* Phƣơng pháp xét nghiệm mẫu
Xét nghiệm mẫu bằng phƣơng pháp lắng cặn Benedek để phát hiện trứng sán lá gan.
2.4.3.5. Phương pháp xác định loài ốc nước ngọt Ờ ký chủ trung gian của sán lá gan Fasciola spp.
Thu thập mẫu ốc (ốc không có nắp miệng) ở các rãnh nƣớc, ruộng lúa, mƣơng nƣớc, Ầ trong khu vực nuôi và chăn thả trâu, bò. Định loại theo khóa định loại của Đặng Ngọc Thanh và cs (1980) [29].
2.4.3.6. Phương pháp xác định ấu trùng sán lá gan trong ốc nước ngọt
Ép vỡ ốc Lymnaeaspp. giữa hai lam kắnh, nhỏ 1-2 giọt nƣớc sạch, gạt cặn bã sang đầu lam kắnh, kiểm tra dƣới kắnh hiển vi độ phóng đsị 100 lần để
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
tìm ấu trùng sán lá gan và xác định dạng ấu trùng theo khóa định loại ấu trùng của Ghinhecinskaja (1986).