VI SINH VẬT
2.2.10. Phương pháp xác định hoạt độ glucoamylase
Ø Định nghĩa đơn vị hoạt độ [17]
Đơn vị hoạt độ của enzyme được tính theo đơn vị quốc tế UI (International Unit). Mỗi UI là hoạt động của enzyme xúc tác chỉ thị sự chuyển hóa 1 mmol cơ chất sau 1 phút ở điều kiện thích hợp nhất.
Ø Hoạt độ của enzyme glucoamylase
Một đơn vị hoạt độ (UI) của glucoamylase là lượng enzyme xúc tác thủy phân tinh bột để giải phóng ra 1mg glucose trong 1 phút ở điều kiện nhiệt độ và pH thích hợp.
Xác định hoạt độ enzyme glucoamylase theo phương pháp so màu với DNS.
Cách tiến hành:
Mẫu thử không: Hút 0,5ml chế phẩm enzyme glucoamylase pha loãng ở nồng độ thích hợp cho vào một ống nghiệm sạch và khô. Thêm 0,5ml hồ tinh bột 2%. Thêm 1ml thuốc thử DNS, đun sôi 15 phút, làm nguội rồi đem xác định mật độ quang.
Mẫu thử thật: Hút 0,5ml chế phẩm enzyme glucoamylase pha loãng ở nồng độ thích hợp cho vào một ống nghiệm sạch và khô. Thêm 0,5ml hồ tinh bột 2%, thực hiện phản ứng ở 450C, pH 5.0 trong 10 phút. Thêm 1ml thuốc thử DNS, đun sôi 15 phút, làm nguội rồi đem xác định mật độ quang.
Các dung dịch sau phản ứng này được xác định mật độ quang ở bước sóng 540nm. Dựa vào đường chuẩn glucose xác định được lượng đường khử tạo thành sau khi thủy phân bởi enzyme glucoamylase.
Trong đó:
- X: lượng glucose giải phóng được xác định dựa vào đường chuẩn (mg/ml)
- n: hệ số pha loãng - t: thời gian phản ứng
- a: lượng enzyme tham gia phản ứng
Ø Hoạt độglucoamylase tính trên 1g canh trường
Trong đó:
- Hđ(UI/ml): đơn vị hoạt độ enzyme trong 1ml dịch lọc - V: thể tích dịch enzyme thu được sau khi lọc (ml) - m: khối lượng canh trường ban đầu đem trích ly (g)