3.5. PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT TỪ CÁC PHẦN CHIẾT
3.5.3. Phân lập các hợp chất từ cây mễ tử liễu
Phần chiết n-hexan (70 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với n-hexan và hệ dung môi gradient n-hexan/axeton với các tỷ lệ 99/1, 20/1, 9/1, 7/1, 5/1, 3/1 và 2/1 (v/v) được 250 phân đoạn, mỗi phân đoạn 100 ml. Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 21 nhóm phân đoạn MTH1 (các phân đoạn 1-20), MTH2 (21-33), MTH3 (34-40), MTH4 (41-48), MTH5 (49-62), MTH6 (63-72), MTH7 (73-90), MTH8 (91-100), MTH9 (101-104), MTH10 (105-107), MTH11 (108- 109), MTH12 (110-118), MTH13 (119-137), MTH14 (138-149), MTH15 (150- 157), MTH16 (158-165), MTH17 (166-174), MTH18 (175-201), MTH19 (202- 212), MTH20 (213-230), MTH21 (231-250)
Nhóm phân đoạn MTH2 (1,05 g) được rửa bằng axeton thu được chất bột màu trắng MTH2.1 (10 mg).
Nhóm phân đoạn MTH8 (1,13 g) được rửa bằng axeton thu được chất bột màu trắng MTH8.1 (chất 40M, 31 mg).
Nhóm phân đoạn MTH10 (2,08 g) được rửa bằng n-hexan, sau đó kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim màu trắng MTH10 (chất 1T, 35 mg).
Nhóm phân đoạn MTH11 (3,78 g) cô cho bay hơi hết dung môi, xử lý loại màu, kết tinh lại trong hệ dung môi n-hexan/etyl axetat 2/1,v/v thu được hợp chất MTH11 (chất 41M, 15 mg).
Nhóm phân đoạn MTH12 (2,02 g) được rửa bằng n-hexan, tiếp đó rửa với hệ dung môi n-hexan/axeton 5/1, kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim màu trắng MTH 12.1 (10 mg).
Nhóm phân đoạn MTH13 (4,01 g) cô cho bay hơi hết dung môi, sau đó tiếp tục phõn tỏch bằng sắc ký cột silica gel (40-63 àm) với dung mụi giải hấp điclometan/axeton 10/1 thu được chất MTH13 (chất 42M, 12 mg).
Nhóm phân đoạn MTH16 (4,51 g) cô cho bay hơi hết dung môi, sau đó tiếp tục phõn tỏch bằng sắc ký cột silica gel (40-63 àm) với dung mụi rửa giải CH2Cl2/MeOH 10/1 thu được chất MTH16 (chất 43M, 17 mg).
Nhóm phân đoạn MTH18 (10,02 g) được rửa bằng axeton sau đó kết tinh lại trong với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH 9/1, thu được chất rắn màu trắng MTH18 (chất 9T, 205 mg).
3.5.3.2. Phân tách phần chiết etyl axetat (MTE)
Phần chiết etyl axetat (MTE) (70 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trờn silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với etyl axetat và hệ dung môi gradient etyl axetat/metanol 99/1, 9/1, 8/1, 5/1, 1/1 (v/v) cho 125 phân đoạn, mỗi phân đoạn 250 ml. Các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 11 nhóm phân đoạn MTE1 (các phân đoạn 1-10), MTE2 (11-32),
MTE3 (33-52), MTE4 (53-67), MTE5 (68-78), MTE6 (79-92), MTE7(93-100), MTE8 (101-109), MTE9 (110-115), MTE10 (116-120), MTE11 (121-125).
Nhúm phõn đoạn MTE2 (17,11 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với điclometan và hệ dung môi gradient CH2Cl2/MeOH 9/1, 8/1, 4/1, 2/1 (v/v) thu được 236 phân đoạn, mỗi phân đoạn 30 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 13 nhóm phân đoạn từ MTE2.1 đến MTE2.13. Nhóm phân đoạn MTE2.1 được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung mụi điclometan/axeton 100/1 thu được hợp chất màu vàng MTE2.1.1 và hợp chất MTE2.1.2. Nhóm phân đoạn MTE2.4 tiếp tục được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi điclometan/axeton 50/1 thu được chất MTE2.4 (chất 44M, 17 mg). Nhóm phân đoạn MTE2.5 tiếp tục được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi điclometan/axeton 20/1 thu được chất MTE2.5 (chất 10T, 10 mg).
Nhúm phõn đoạn MTE2.9 được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi điclometan/axeton 7/1 thu được hợp chất MTE2.9 (chất 45M, 17 mg) và MTE2.9.9 (chất 46M, 14 mg). Nhóm phân đoạn MTE2.10 tiếp tục được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung mụi điclometan/axeton 6/4 thu được 2 chất MTE2.10.1 (chất 47M, 13 mg), MTE2.10.3 (chất 48M, 20 mg).
Nhúm phõn đoạn MTE3 (4.13 g) được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi CH2Cl2/EtOAc/MeOH 5/4/1 thu được hợp chất MTE3.4 (chất 49M, 11 mg) và chất MTE3.8 (chất 50M, 16 mg).
Nhóm phân đoạn MTE4 (1,50 g) được rửa bằng etyl axetat sau đó kết tinh lại trong metanol cho tinh thể hình kim màu vàng nhạt MTE4 (chất 20T, 30 mg).
Nhóm phân đoạn MTE5 (0,50 g) được rửa bằng metanol sau đó kết tinh lại trong metanol nóng cho tinh thể hình kim màu vàng nhạt MTE5 (chất 51M, 15 mg).
Nhúm phõn đoạn MTE8 (9,34 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với EtOAc và gradient EtOAc/MeOH 9/1, 8/1, 5/1 thu được 80 phân đoạn, mỗi phân đoạn 10 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ
giống nhau được gộp lại cho 5 nhóm phân đoạn từ MTE8.1 đến MTE8.5. Nhóm phân đoạn MTE8.1 tiếp tục được tinh chế trên silica gel RP-18 rửa, giải sắc ký với hệ dung môi MeOH/H2O 1/5 thu được chất MTE8.1 (chất 52M, 7 mg).
3.5.3.3. Phân tách phần chiết n-butanol (MTB)
Phần chiết n- butanol (MTB) (40 g) được phân tách bằng sắc ký cột (CC) trờn silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với etyl axetat và hệ dung môi gradient EtOAc/MeOH/H2O 99/1/0,11, 9/1/0,1, 8/1/0,1, 5/1/0,1, 1/1/0,1 (v/v) cho 230 phân đoạn, mỗi phân đoạn 250 ml. Các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 12 nhóm phân đoạn MTB1 (các phân đoạn 1-4 ), MTB2 (5-8), MTB3 (9-22), MTB4 (23-35), MTB5 (36-50), MTB6 (51-65), MTB7 (66-95), MTB8 (96-140), MTB9 (141-171), MTB10 (172-190), MTB11 (191-210), MTB12 (211-230).
Nhóm phân đoạn MTB4 (5,86 g) được rửa bằng axeton sau đó được kết tinh lại trong hệ CH2Cl2/MeOH thu được chất rắn màu vàng MTB4 (chất 53M, 35 mg).
Nhóm phân đoạn MTB6 (4,50 g) được tiếp tục sắc ký với silica gel. Rửa giải sắc ký với hệ dung môi gradient CH2Cl2/MeOH 10/1, 4/1 thu được chất rắn màu vàng MTB6 (chất 54M, 32 mg)
Nhóm phân đoạn MTB10 (5,95 g) được tiếp tục sắc ký với silica gel. Rửa giải sắc ký với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH/H2O 4/1/0,1 thu được chất rắn màu vàng, ký hiệu MTB 10.2 (chất 55M, 56 mg)