Phân tích phần chiết n-butanol (MTB)

3.4. PHÂN TÍCH CÁC PHẦN CHIẾT BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG

3.4.3. Phân tích các phần chiết từ cây mễ tử liễu

3.4.3.3. Phân tích phần chiết n-butanol (MTB)

Hệ dung môi triển khai sắc ký lớp mỏng cho phần chiết MTB là

CH2Cl2/CH3OH/H2O với tỷ lệ 9/1/0,1 và 3/1/0,1 (v/v); EtOAc/CH3OH/H2O 8/1/0,1.

Quá trình khảo sát TLC cho thấy hệ dung môi thích hợp để triển khai sắc ký cột cho phần chiết MTB là hệ EtOAc/CH3OH/H2O theo chương trình gradient

3.5. PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT TỪ CÁC PHẦN CHIẾT 3.5.1. Phân lập các hợp chất từ cây thồm lồm gai 3.5.1.1. Phân tách phần chiết n-hexan (TLH)

Phần chiết n-hexan (15 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu trên silica gel. Rửa giải sắc ký với n-hexan và hệ dung môi gradient n-hexan/axeton với các tỷ lệ 100/1, 20/1, 10/1, 9/1, 4/1, 3/1 và 2/1 (v/v) được 650 phân đoạn, mỗi phân đoạn 15 ml. Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 30 nhóm phân đoạn TLH1 (các phân đoạn 1- 20), TLH2 (21-34), TLH3 (35-40), TLH4 (41-80), TLH5 (81-90), TLH6 (91- 100), TLH7 (101-112), TLH8 (113-140), TLH9 (141-147), TLH10 (148-155), TLH11 (156-172), TLH12 (173-233), TLH13 (234-250), TLH14 (251-263), TLH15 (264-324), TLH16 (325-364), TLH17 (365-384), TLH18 (385-411), TLH19 (412-465), TLH20 (466-500), TLH21 (501-525), TLH22 (525-537), TLH23 (538-550), TLH24 (551-562), TLH25 (563-575), TLH26 (576-584), TLH27 (585-598), TLH28 (599-612), TLH29 (613-635), TLH30 (636-650).

Nhóm phân đoạn TLH4 (1,02 g) được rửa bằng n-hexan sau đó rửa với hệ dung môi n-hexan/axeton 20/1, sau đó kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim màu trắng TLH4 (chất 1T, 30 mg).

Nhóm phân đoạn TLH5 (1,12 g) được rửa bằng n-hexan sau đó tinh chế trên silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi n-hexan/axeton 15/1, kết tinh lại trong n- hexan cho các tinh thể hình kim màu vàng nhạt TLH5 (chất 2T, 15 mg).

Nhóm phân đoạn TLH7 (0,87 g) được rửa bằng n-hexan sau đó tinh chế trên silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi CH2Cl2/axeton 10/1, kết tinh lại trong CH2Cl2/MeOH cho bột vô định hình màu trắng TLH7 (12 mg).

Nhóm phân đoạn TLH9 (1,11 g) cô cho bay hơi hết dung môi rồi tiếp tục được

phân tách bằng sắc ký cột silica gel với dung môi rửa giải n-hexan/EtOAc 3/1 cho tinh thể hình kim màu trắng TLH9 (chất 3T, 15 mg).

Nhúm phõn đoạn TLH23 (1,21 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH 10/1. Qua phân tích TLC các phân đoạn được gộp thành 3 nhóm phân đoạn từ TLH23.1 đến TLH23.3. Nhóm phân đoạn TLH23.2 được rửa với dung môi axeton, sau đó kết tinh lại trong hỗn hợp dung môi CH2Cl2/MeOH cho chất rắn màu trắng TLH23.2 (chất 4T, 15 mg). Nhóm phân đoạn TLH23.3 được rửa với dung môi axeton, sau đó kết tinh lại trong hệ dung môi CH2Cl2/MeOH cho tinh chất rắn màu trắng TLH23.3 (21 mg)

Nhúm phõn đoạn TLH24 (2,11 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH 6/1, sau khi loại màu và kết tinh lại thu được chất rắn màu trắng TLH24 (27 mg).

Nhúm phõn đoạn TLH29 (1,16 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) với hệ dung môi n-hexan/axeton 2/1, sau khi loại màu và kết tinh lại thu được tinh thể hình kim màu vàng TLH29 (chất 5T, 13 mg).

3.5.1.2. Phân tách phần chiết etyl axetat (TLE)

Phần chiết etyl axetat (TLE) (70 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trờn silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với EtOAc và hệ dung môi gradient EtOAc/MeOH 100/1, 20/1, 15/1, 10/1, 4/1 và 2/1 (v/v) cho 500 phân đoạn, mỗi phân đoạn 250 ml.

Các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 9 nhóm phân đoạn TLE1 (các phân đoạn 1-100), TLE2 (101-143), TLE3 (144-163), TLE4 (164-273), TLE5 (274-298), TLE6 (299-348), TLE7 (349-368), TLE8 (369-468), TLE9 (469-500)

Nhúm phõn đoạn TLE1 (25,50 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải với hệ dung môi gradient CH2Cl2/CH3OH 100/1, 50/1, 20/1, 10/1 thu được 10 nhóm phân đoạn TLE1.1-TLE1.10. Nhóm phân đoạn TLE1.1 tiếp tục được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) và hệ dung mụi rửa giải CH2Cl2/CH3OH 20/1 thu được chất TLE 1.1 (chất 6T, 8 mg), TLE1.1.2 (chất 7T, 12 mg), TLE1.1.3 (14 mg),

TLE 1.1.4 (chất 8T, 11 mg). Nhóm phân đoạn TLE 1.2 được rửa với axeton và kết tinh lại trong hệ dung môi CH2Cl2/CH3OH thu được chất rắn màu trắng TLE1.2 (chất 9T, 20 mg). Nhóm phân đoạn TLE 1.3 được tinh chế trên silica gel (40-63 àm) và hệ dung mụi rửa giải CH2Cl2/CH3OH 8/1 thu được tinh thể hỡnh kim màu vàng TLE1.3 (chất 10T, 8 mg). Nhóm phân đoạn TLE 1.4 được tinh chế trên silica gel (40-63 àm) và hệ dung mụi rửa giải CH2Cl2/CH3OH 6/1 thu được chất rắn không màu TLE1.4 (chất 11T, 11 mg). Nhóm phân đoạn TLE 1.5 được xử lý kết tinh và loại màu thu được chất rắn màu vàng TLE1.5 (chất 12T, 13 mg). Nhóm phõn đoạn TLE 1.7 tiếp tục được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) với hệ dung môi rửa giải CHCl3/MeOH/H2O 65/45/12 thu được chất bột màu trắng TLE1.7 (chất 13T, 21 mg). Nhóm phân đoạn TLE 1.8 tiếp tục được tinh chế trên silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi rửa giải EtOAc/MeOH/H2O 4/2/0,1 thu được chất rắn màu vàng TLE1.8 (chất 14T, 13 mg). Nhóm phân đoạn TLE 1.9 được tinh chế silica gel (40-63 àm) và hệ dung mụi rửa giải CH2Cl2/CH3OH 3/1 thu được bột vụ định hình màu vàng TLE1.9 (chất 15T, 11 mg).

Nhúm phõn đoạn TLE2 (15,86 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải với hệ dung môi EtOAc/CH3OH 4/1 thu được 266 phân đoạn, mỗi phân đoạn 15 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 15 nhóm phân đoạn từ TLE2.1 đến TLE2.15. Nhóm phân đoạn TLE 2.1 (1,2 g) được tiến hành sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi CH3OH/H2O 30/1 cho các chất TLE 2.1.1 (chất 16T, 13 mg), TLE 2.1.2 (9 mg), TLE 2.1.3 (chất 17T, 23 mg), TLE 2.1.4 (chất 18T, 30 mg). Nhóm phân đoạn TLE 2.2 (89 mg) được tiến hành sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi CH3OH/H2O 50/1 cho chất TLE2.2 (12 mg). Nhóm phân đoạn TLE 2.6 (36 mg) được tiến hành sắc ký cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2/CH3OH 2/1 cho chất rắn màu trắng TLE2.6 (chất 19T, 13 mg).

Nhóm phân đoạn TLE 3 (1,76 g) được xử lý kết tinh và loại màu thu được chất vô định hình màu vàng TLE3 (chất 20T, 16 mg).

Nhóm phân đoạn TLE 5 (2,98 g) được xử lý kết tinh và loại màu thu được chất rắn màu trắng TLE5 (chất 21T, 17 mg).

3.5.1.3. Phân tách phần chiết n-butanol (TLB)

Phần chiết n-butanol (50 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với điclometan và hệ dung môi gradient CH2Cl2/MeOH/H2O với tỷ lệ 9/1/0,1 và 3/1/0,1 (v/v) được 390 phân đoạn, mỗi phân đoạn 100 ml. Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 15 nhóm phân đoạn TLB1 (các phân đoạn 1-15), TLB2 (16-35), TLB3 (36-45), TLB4 (46-83), TLB5 (84-97), TLB6 (98-105), TLB7 (105-131), TLB8 (132-147), TLB9 (148-191), TLB10 (191-235), TLB11 (236-272), TLB12 (273-293), TLB13 (294-320), TLB14 (321-350), TLB15 (351-390).

Nhúm phõn đoạn TLB1 (2,13 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), hệ dung môi rửa giải EtOAc/MeOH 2/1 thu được chất rắn không màu TLB1 (11 mg).

Nhóm phân đoạn TLB4 (6,87 g) được tinh chế trên silica gel RP-18, hệ dung môi rửa giải H2O/MeOH 30/1 thu được chất rắn màu vàng TLB4 (chất 22T, 23 mg).

Nhúm phõn đoạn TLB7 (5,11 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), hệ dung môi rửa giải EtOAc/MeOH 3/1 thu được chất dẻo màu vàng TLB7 (34 mg).

Nhóm phân đoạn TLB11 (5,22 g) được tinh chế trên silica gel RP-18, hệ dung môi rửa giải H2O/MeOH 1/1 thu được chất rắn màu vàng TLB11 (chất 23T, 37 mg).

Nhúm phõn đoạn TLB13 (3,34 g) được tinh chế silica gel (40-63 àm) và hệ dung môi rửa giải EtOAc/MeOH/H2O (5/1/0,2) thu được chất rắn không màu TLB13 (chất 24T, 13 mg).

3.5.2. Phân lập các hợp chất từ cây nghể trắng 3.5.2.1. Phân tách phần chiết n-hexan (NTH)

Phần chiết n-hexan (30 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với n-hexan và hệ dung môi gradient n-hexan/axeton với các tỷ lệ 20/1, 10/1, 8/1, 5/1, 3/1 và 1/1 (v/v) được 650 phân đoạn, mỗi phân đoạn 20 ml.

Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 31 nhóm phân đoạn NTH1 (các phân đoạn 1-7), NTH2 (8- 37), NTH3 (38-46), NTH4 (47-59), NTH5 (60-64), NTH6 (65-73), NTH7 (74-90), NTH8 (91-115), NTH9 (116-125), NTH10 (126-157), NTH11 (158-183), NTH12 (184-213), NTH13 (214-245), NTH14 (246-269), NTH15 (270-287), NTH16 (288-307), NTH17 (308-334), NTH18 (335-360), NTH19 (361-381), NTH20 (382-410), NTH21 (411-454), NTH22 (455-462), NTH23 (463-475), NTH24 (476-482), NTH25 (483-520), NTH26 (521-550), NTH27 (551-570), NTH28 (571-590), NTH29 (591-615), NTH30 (616-635), NTH31 (636-650).

Phân đoạn NTH1 (1,55 g) cô cho bay hơi hết dung môi, xử lí loại màu rồi kết tinh lại trong hỗn hợp dung môi n-hexan/EtOAc 8/2,v/v thu được hợp chất NTH1 (chất 25N, 50 mg).

Phân đoạn NTH2 (3,12 g) cô cho bay hơi hết dung môi, xử lý loại màu rồi kết tinh lại trong hỗn hợp dung môi n-hexan/ EtOAc 8/2, v/v thu được hợp chất NTH2 (chất 1T, 140 mg).

Phân đoạn NTH6 (2,01 g) cô cho bay hơi hết dung môi, xử lý loại màu rồi tiếp tục được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi CH2Cl2/axeton 9/1, v/v thu được hợp chất NTH6 (chất 26N, 14 mg).

Phân đoạn NTH24 (4,21 g) được rửa với dung môi axeton thu được tinh thể hình kim màu trắng NTH24.1 (chất 27N, 13 mg). Phần không tan trong axeton được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi gradient CH2Cl2/CH3OH 9/1 thu được chất NTH24.2 (chất 28N, 21 mg)

Phân đoạn NTH26 cô cho bay hơi hết dung môi rồi tiếp tục được tinh chế trên silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi CH2Cl2/axeton 6/1. Qua phõn tớch TLC cỏc phân đoạn được gộp thành 4 nhóm phân đoạn từ NTH26.1 đến NTH26.4. Nhóm phân đoạn NTH26.2 (45 mg) được rửa với dung môi n-hexan, sau đó kết tinh lại trong hệ dung môi CH2Cl2/CH3OH cho bột vô định hình màu trắng ngà NTH26.2 (chất 29N, 15 mg). Nhóm phân đoạn NTH26.3 (55 mg) được rửa với dung môi n-

hexan, sau đó kết tinh lại trong hệ dung môi CH2Cl2/CH3OH cho tinh thể hình kim màu trắng NTH26.3 (chất 30N, 35 mg).

Phân đoạn NTH30 cô cho bay hơi hết dung môi, sau đi loại bỏ chất màu, rửa với dung môi n-hexan và kết tinh lại trong hỗn hợp dung môi CH2Cl2/CH3OH 9/1 thu được chất vô định hình màu trắng ký hiệu là NTH30 (chất 9T, 30 mg).

3.5.2.2. Phân tách phần chiết etyl axetat (NTE)

Phần chiết etyl axetat (NTE) (50 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trờn silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với etyl axetat và hệ dung môi gradient EtOAc/CH3OH 20/1, 9/1, 8/1, 5/1, (v/v) cho 200 phân đoạn, mỗi phân đoạn 500 ml.

Các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 27 nhóm phân đoạn NTE1 (các phân đoạn 1-3), NTE2 (4-6), NTE3 (7- 14), NTE4 (15-18), NTE5 (19-22), NTE6 (23-30), NTE7 (31-39), NTE8 (40-49), NTE9 (50-58), NTE10 (59-67), NTE11 (68-75), NTE12 (76-82), NTE13 (83-99), NTE14 (100-114), NTE15 (115-122), NTE16 (123-125), NTE17 (126-130), NTE18 (131-140), NTE19 (141-145), NTE20 (146-147), NTE21 (148-150), NTE22 (151-153), NTE23 (154-158), NTE24 (159-163), NTE25 (164-169), NTE26 (170-180), NTE27 (181-200).

Nhúm phõn đoạn NTE1 (5,39 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với điclometan và và hệ dung môi gradient điclometan/axeton 100/1, 50/1, 10/1, 5/1, 2/1, thu được 90 phân đoạn, mỗi phân đoạn 15 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 7 nhóm phân đoạn từ NTE1.1 đến NTE1.7. Nhóm phân đoạn NTE1.1 được tiếp tục tinh chế trên silica gel (40-63 àm), rửa giải với hệ dung mụi điclometan/axeton 7/1 thu được chất bột màu vàng nhạt NTE1.1 (9 mg). Nhóm phân đoạn NTE1.6 được tinh chế trên silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với hệ dung mụi CH2Cl2/CH3OH 15/1 cho chất dầu màu vàng NTE1.6 (chất 31N, 14 mg).

Nhúm phõn đoạn NTE2 (3,86 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với điclometan và và hệ dung môi gradient CH2Cl2/CH3OH 99/1, 80/1,

20/1, 10/1, 7/1, thu được 210 phân đoạn, mỗi phân đoạn 15 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 10 nhóm phân đoạn từ NTE2.1 đến NTE2.10. Nhóm phân đoạn NTE2.4 được rửa với dung môi axeton cho tinh thể màu vàng ký hiệu NTE2.4.2 (chất 32N, 8mg). Nhóm phân đoạn NTE2.6 (6,50 g) được tiếp tục tinh chế bằng sắc ký cột mini trên silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với hệ dung mụi CH2Cl2/CH3OH 6/1 cho chất NTE 2.6.1 (chất 33N, 13 mg) và tinh thể hình kim màu trắng NTE2.6.2 (chất 34N, 40 mg). Nhóm phân đoạn NTE2.7 được rửa với dung môi axeton cho chất rắn màu trắng ngà NTE2.7.1 (15mg).

Nhóm phân đoạn NTE3 (3,12 g) được rửa với axeton sau đó kết tinh lại với hỗn hợp dung môi CH2Cl2/CH3OH cho chất rắn màu trắng NTE3 (chất 35N, 15mg).

Nhúm phõn đoạn NTE5 (4,42 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với etyl axetat và và hệ dung môi gradient EtOAc/CH3OH 7/1, 3/1, 1/1 thu được 11 phân đoạn, mỗi phân đoạn 15 ml (NTE5.1 đến NTE5.7). Nhóm phân đoạn NTE5.7 được rửa với dung môi axeton rồi tiếp tục được tinh chế trên silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với etyl axetat và hệ dung mụi gradient EtOAc/CH3OH 3/1 thu được chất NTE 5.7 (11 mg).

Nhóm phân đoạn NTE8 (1,1 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường với hệ dung môi EtOAc/CH3OH 5/1 thu được 5 nhóm phân đoạn từ NTE.8.1 đến NTE.8.5.

Nhóm phân đoạn NTE.8.4 được kết tinh lại cho tinh thể hình kim màu trắng ngà NTE8 (22 mg).

Nhóm phân đoạn NTE12 (0,36 g) được rửa với axeton sau đó được kết tinh lại với hệ dung môi CH2Cl2/CH3OH cho chất rắn màu trắng NTE12 (14 mg).

3.5.2.3. Phân tách phần chiết n-butanol (NTB)

Phần chiết n-butanol (30 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với hệ dung môi gradient CH2Cl2/CH3OH/H2O với các tỷ lệ 9/1/0,1; 6/1/0,1; 3/1/0,1; v/v; 1/1/0,1 thu được 123 phân đoạn, mỗi phân đoạn 20 ml. Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi

dưới áp suất giảm cho 12 nhóm phân đoạn NTB1 (các phân đoạn 1-19), NTB2 (20- 30), NTB3 (31-40), NTB4 (41-49), NTB5 (50-61), NTB6 (62-72), NTB7 (73-94), NTB8 (95-102), NTB9 (103-106), NTB10 (107-111), NTB11 (112-119), NTB12 (120-125).

Nhóm phân đoạn NTB3 (0,93 g) được loại màu bằng dung môi axeton sau đó tiếp tục được tinh chế trên silica gel với hệ dung môi rửa giải toluene/axeton 7/1, v/v thu được hợp chất NTB3 (chất 36N, 17 mg).

Nhóm phân đoạn NTB4 (1,31 g) tiếp tục được tinh chế trên silica gel (40-63 àm) với hệ dung mụi CH2Cl2/MeOH 10/1, v/v thu được hợp chất NTB4 (chất 37N, 20 mg).

Nhóm phân đoạn NTB8 (1,13 g) được loại màu bằng dung môi axeton sau đó tiếp tục được tinh chế trên silica gel RP-18 với hệ dung môi MeOH/H2O 3/10, v/v thu được hợp chất NTB8 (chất 38N, 13 mg).

Nhóm phân đoạn NTB11 (0,74 g) được loại màu bằng dung môi metanol, phần cặn thu được (0,3 g) được kết tinh lại trong etyl axetat thu được hợp chất NTB11 (chất 39N, 38 mg).

3.5.3. Phân lập các hợp chất từ cây mễ tử liễu 3.5.3.1. Phân tách phần chiết n-hexan (MTH)

Phần chiết n-hexan (70 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với n-hexan và hệ dung môi gradient n-hexan/axeton với các tỷ lệ 99/1, 20/1, 9/1, 7/1, 5/1, 3/1 và 2/1 (v/v) được 250 phân đoạn, mỗi phân đoạn 100 ml. Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 21 nhóm phân đoạn MTH1 (các phân đoạn 1-20), MTH2 (21-33), MTH3 (34-40), MTH4 (41-48), MTH5 (49-62), MTH6 (63-72), MTH7 (73-90), MTH8 (91-100), MTH9 (101-104), MTH10 (105-107), MTH11 (108- 109), MTH12 (110-118), MTH13 (119-137), MTH14 (138-149), MTH15 (150- 157), MTH16 (158-165), MTH17 (166-174), MTH18 (175-201), MTH19 (202- 212), MTH20 (213-230), MTH21 (231-250)

Nhóm phân đoạn MTH2 (1,05 g) được rửa bằng axeton thu được chất bột màu trắng MTH2.1 (10 mg).

Nhóm phân đoạn MTH8 (1,13 g) được rửa bằng axeton thu được chất bột màu trắng MTH8.1 (chất 40M, 31 mg).

Nhóm phân đoạn MTH10 (2,08 g) được rửa bằng n-hexan, sau đó kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim màu trắng MTH10 (chất 1T, 35 mg).

Nhóm phân đoạn MTH11 (3,78 g) cô cho bay hơi hết dung môi, xử lý loại màu, kết tinh lại trong hệ dung môi n-hexan/etyl axetat 2/1,v/v thu được hợp chất MTH11 (chất 41M, 15 mg).

Nhóm phân đoạn MTH12 (2,02 g) được rửa bằng n-hexan, tiếp đó rửa với hệ dung môi n-hexan/axeton 5/1, kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim màu trắng MTH 12.1 (10 mg).

Nhóm phân đoạn MTH13 (4,01 g) cô cho bay hơi hết dung môi, sau đó tiếp tục phõn tỏch bằng sắc ký cột silica gel (40-63 àm) với dung mụi giải hấp điclometan/axeton 10/1 thu được chất MTH13 (chất 42M, 12 mg).

Nhóm phân đoạn MTH16 (4,51 g) cô cho bay hơi hết dung môi, sau đó tiếp tục phõn tỏch bằng sắc ký cột silica gel (40-63 àm) với dung mụi rửa giải CH2Cl2/MeOH 10/1 thu được chất MTH16 (chất 43M, 17 mg).

Nhóm phân đoạn MTH18 (10,02 g) được rửa bằng axeton sau đó kết tinh lại trong với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH 9/1, thu được chất rắn màu trắng MTH18 (chất 9T, 205 mg).

3.5.3.2. Phân tách phần chiết etyl axetat (MTE)

Phần chiết etyl axetat (MTE) (70 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trờn silica gel (Merck, 63-200 àm). Mẫu được đưa lờn cột theo phương phỏp tẩm mẫu khô. Rửa giải sắc ký với etyl axetat và hệ dung môi gradient etyl axetat/metanol 99/1, 9/1, 8/1, 5/1, 1/1 (v/v) cho 125 phân đoạn, mỗi phân đoạn 250 ml. Các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 11 nhóm phân đoạn MTE1 (các phân đoạn 1-10), MTE2 (11-32),

MTE3 (33-52), MTE4 (53-67), MTE5 (68-78), MTE6 (79-92), MTE7(93-100), MTE8 (101-109), MTE9 (110-115), MTE10 (116-120), MTE11 (121-125).

Nhúm phõn đoạn MTE2 (17,11 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với điclometan và hệ dung môi gradient CH2Cl2/MeOH 9/1, 8/1, 4/1, 2/1 (v/v) thu được 236 phân đoạn, mỗi phân đoạn 30 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 13 nhóm phân đoạn từ MTE2.1 đến MTE2.13. Nhóm phân đoạn MTE2.1 được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung mụi điclometan/axeton 100/1 thu được hợp chất màu vàng MTE2.1.1 và hợp chất MTE2.1.2. Nhóm phân đoạn MTE2.4 tiếp tục được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi điclometan/axeton 50/1 thu được chất MTE2.4 (chất 44M, 17 mg). Nhóm phân đoạn MTE2.5 tiếp tục được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi điclometan/axeton 20/1 thu được chất MTE2.5 (chất 10T, 10 mg).

Nhúm phõn đoạn MTE2.9 được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi điclometan/axeton 7/1 thu được hợp chất MTE2.9 (chất 45M, 17 mg) và MTE2.9.9 (chất 46M, 14 mg). Nhóm phân đoạn MTE2.10 tiếp tục được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung mụi điclometan/axeton 6/4 thu được 2 chất MTE2.10.1 (chất 47M, 13 mg), MTE2.10.3 (chất 48M, 20 mg).

Nhúm phõn đoạn MTE3 (4.13 g) được tinh chế với cột silica gel (40-63 àm) và rửa giải sắc ký với hệ dung môi CH2Cl2/EtOAc/MeOH 5/4/1 thu được hợp chất MTE3.4 (chất 49M, 11 mg) và chất MTE3.8 (chất 50M, 16 mg).

Nhóm phân đoạn MTE4 (1,50 g) được rửa bằng etyl axetat sau đó kết tinh lại trong metanol cho tinh thể hình kim màu vàng nhạt MTE4 (chất 20T, 30 mg).

Nhóm phân đoạn MTE5 (0,50 g) được rửa bằng metanol sau đó kết tinh lại trong metanol nóng cho tinh thể hình kim màu vàng nhạt MTE5 (chất 51M, 15 mg).

Nhúm phõn đoạn MTE8 (9,34 g) được tinh chế trờn silica gel (40-63 àm), rửa giải sắc ký với EtOAc và gradient EtOAc/MeOH 9/1, 8/1, 5/1 thu được 80 phân đoạn, mỗi phân đoạn 10 ml. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ