Đếm số lượng tế bào TCD4 làm tại Khoa Xét nghiệm Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới Trung ương, được thực hiện bằng máy BD FACSCount.
Kỹ thuật:
Mẫu máu toàn phần được chuẩn bị bằng thuốc thử BD FACSCount (mẫu máu phải được chứa trong ống K2 hoặc K3 EDTA và không quá 48 giờ ở nhiệt độ phòng 20-25o
C).
Đặt mẫu máu vào trong giá thao tác. Lấy 1 cặp ống thuốc thử cho mỗi bệnh nhân.
Bước 1: ghi lên nắp của ống thuốc thử mã số phòng xét nghiệm hoặc mã bệnh nhân hoặc số để xác định các ống máu
Bước 2: úp ngược ống, vortex trong 5 giây Bước 3: để ống đứng, vortex trong 5 giây Bước 4: mở nắp ống bằng máy mở nắp
Chú ý: phải bảo đảm mẫu máu được trộn đều
Bước 5: hút 50 ml mẫu máu vào mẫu ống toàn phần vào mỗi ống thuốc thử. Bước 6: đóng nắp ống, để ống đứng, vortex trong 5 giây
Bước 7: ủ các ống trong 60 đến 120 phút ở nhiệt độ phòng. Đặt cặp ống vào giá thao tác và đóng nắp giá thao tác để bảo vệ thuốc thử khỏi ánh sáng
Bước 8: mở các nắp ống và hút 50 ml dung dịch cố định vào trong mỗi ống Bước 9: Đóng nắp các ống bằng các nắp mới và để ống thẳng đứng rồi vortex trong 5 giây. Phân tích các ống bằng máy BD FACSCount trong vòng 48 tiếng sau khi chuẩn bị.
50
2.4.2. Xét nghiệm đo tải lƣợng vi rút
Tải lượng vi rút làm tại khoa Xét nghiệm Bệnh viện Nhiệt đới Trung ương, bằng máy COBAS Taq Man của hãng Roche.
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test là xét nghiệm khuếch đại axít nucleic dùng để định lượng RNA của virút gây suy giảm miễn dịch týp 1 (HIV-1) trong huyết tương người. Thiết bị COBAS AmpliPrep tự động xử lý mẫu và COBAS TaqMan hoặc COBAS TaqMan 48 tự động khuếch đại và phát hiện
Xét nghiệm COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test gồm 3 quá trình chính:
(1) Chuẩn bị mẫu để tinh chiết được RNA của HIV-1 ;
(2) Sao mã ngược RNA đích để tạo ra DNA bổ trợ (cDNA), và
(3) Đồng thời khuếch đại cDNA đích và phát hiện quá trình bị cắt của mẫu dò gắn 2 màu huỳnh quang đặc hiệu với tác nhân đích .
Xét nghiệm sử dụng HIV-1 QS để định lượng RNA virút HIV-1. HIV-1 QS cho phép bù trừ ảnh hưởng của những ức chế trong phản ứng PCR và kiểm soát quá trình chuẩn bị và khuếch đại, cho phép định lượng chính xác hơn lượng HIV-1 RNA trong mỗi mẫu. HIV-1 QS là một cấu trúc Armored RNA không lây nhiễm chứa những chuỗi HIV với những vị trí gắn mồi giống hệt như RNA đích HIV-1 và một vùng gắn mẫu dò duy nhất cho phép sản phẩm khuếch đại của HIV-1 QS có thể phân biệt được với sản phẩm khuếch đại của tác nhân đích đích .
HIV-1 QS được thêm vào mỗi mẫu với số lượng xác định và trải qua toàn bộ quá trình chuẩn bị mẫu, sao mã ngược, khuếch đại PCR và phát hiện mẫu dò đánh dấu. Thiết bị phân tích COBAS TaqMan hoặc thiết bị phân tích COBAS TaqMan 48 tính nồng độ HIV-1 RNA trong mẫu xét nghiệm bằng cách so sánh tín hiệu HIV-1 với tín hiệu HIV-1 QS cho mỗi mẫu thử và mẫu chứng.
51
2.4.3. Các xét nghiệm khác về sinh hoá, huyết học:
Được thực hiện tại khoa Xét nghiệm Bệnh viện Nhiệt đới Trung ương.
2.5. Hạn chế của đề tài:
Đối tượng nghiên cứu chỉ khu trú tại 1 phòng khám, nên kết quả nghiên cứu không có tính chất đại diện cho cả vùng, miền hay toàn quốc.
2.6. Xử lý số liệu:
Số liệu nghiên cứu được xử lý theo thống kê y học thường quy và chương trình SPSS 16.0
52
Chƣơng 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Đặc điểm chung của nhóm:
Số bệnh nhân đủ tiêu chuẩn nghiên cứu, bắt đầu điều trị với phác đồ có AZT từ tháng 10/2007 đến tháng 12/2010 là 153.
Các bệnh nhân trong nghiên cứu bắt đầu điều trị tại các thời điểm khác nhau trong khoảng thời gian từ tháng 10/2007 đến tháng 12/2010, nhưng cùng được đánh giá tại các thời điểm bắt đầu điều trị với phác đồ có AZT (T0), sau điều trị với phác đồ có AZT 1 tháng (T1), 6 tháng (T6), 12 tháng (T12), … điều này khiến số lượng bệnh nhân tại các thời điểm giảm dần theo thời gian.
3.1.1. Tỷ lệ về giới của nhóm nghiên cứu (n = 153) :
Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ giới của nhóm nghiên cứu.
53
3.1.1.2. Tuổi của nhóm nghiên cứu:
Bảng 3.1 Phân bố bệnh nhân theo nhóm tuổi (n = 153).
Nhóm tuổi Số bệnh nhân % < 30 20 13,07 30 – 40 99 64,71 > 40 34 22,22 Tuổi trung bình 34,93 ± 7,51 Tuổi nhỏ nhất 22 Tuổi lớn nhất 67 Bảng 3.1 cho thấy:
- Những bệnh nhân ở nhóm tuổi 30 đến 40 tuổi là nhiều nhất với tỷ lệ là 64,71%.
- Tuổi trung bình của bệnh nhân là 34.93 ± 7,51
- Tuổi nhỏ nhất của bệnh nhân là 22, tuổi lớn nhất là 67.
3.1.1.3. Nơi sinh sống:
Bảng 3.2 Tỷ lệ bệnh nhân theo nơi sinh sống.
Nơi sinh sống Số bệnh nhân
n = 153 %
Thành thị 90 58,82
Nông thôn 39 25,49
Miền núi 24 15,69
- Kết quả nghiên cứu cho thấy: Những bệnh nhân sinh sống ở thành thị chiếm số đông nhất với 58,82%
54
3.1.1.4. Nghề nghiệp:
Bảng 3.3 Tỷ lệ nghề nghiệp của bệnh nhân.
Nghề nghiệp Số bệnh nhân n = 153 % Không nghề nghiệp 78 50,98 Tri thức 33 21,57 Lái xe 11 7,19 Khác 31 20,26 Bảng 3.3 cho thấy:
- Nhóm bệnh nhân thất nghiệp chiếm tỷ lệ cao nhất là 50,98%
- Nhóm trí thức (với nhiều ngành nghề khác nhau như kế toán, nhân viên văn phòng, kỹ sư, bác sỹ…) có tỷ lệ cao thứ 2 là 21,57%.
3.1.1.5. Yếu tố nguy cơ nhiễm HIV:
Bảng 3.4 Yếu tố nguy cơ lây nhiễm HIV.
Yếu tố nguy cơ Số bệnh nhân
n = 153 %
QHTD 88 57,52
TCMT 39 25,49
TCMT và QHTD 18 11,76
Không rõ đường lây 8 5,23
Nghiên cứu về yếu tố nguy cơ chúng tôi thấy:
- Nhóm bệnh nhân có nguy cơ lây nhiễm qua đường tình dục không an toàn chiếm tỷ lệ cao nhất là 57,52%.
55
3.1.1.6. Đồng nhiễm HBV và HCV:
Bảng 3.5 Tỷ lệ đồng nhiễm viêm gan B, C của nhóm nghiên cứu.
Đồng nhiễm Số bệnh nhân n = 153 % HCV 58 37,91 HBV 13 8,50 Đồng nhiễm cả B và C 6 3,92 Không đồng nhiễm 76 49,67
Trong nghiên cứu chúng tôi thấy:
- Tỷ lệ đồng nhiễm viêm gan C là 37,91%, cao hơn hẳn so với đồng nhiễm viêm gan B, chỉ chiếm 8,50%.
3.2. Đánh giá hiệu quả điều trị của phác đồ HAART có AZT (n=153)
Nghiên cứu có 153 bệnh nhân đủ tiêu chuẩn để đánh giá hiệu quả điều trị của phác đồ HAART có AZT.
Bảng 3.6 Tỷ lệ các phác đồ HAART tại thời điểm bắt đầu điều trị.
Các phác đồ n = 153 %
AZT/3TC/NVP 82 53,59
AZT/3TC/EFV 71 46,41
Bảng 3.7 Khả năng tuân thủ của bệnh nhân.
Khả năng tuân thủ Số bệnh nhân
n = 153 %
Tốt 142 92,81
Trung bình 8 5,23
56
Trong nghiên cứu của chúng tôi:
- Những bệnh nhân tuân thủ tốt chiếm tỷ lệ cao nhất là 92,81%. - Chỉ có 3 (1,96%) bệnh nhân tuân thủ kém.
3.2.1 Đánh giá hiệu quả điều trị của phác đồ có AZT về lâm sàng:
3.2.1.1 Thay đổi về cân nặng:
Bảng 3.8 Cân nặng trung bình (kg) của các BN tại các thời điểm:
Thời điểm T0 T6 T12 T24 T36
Cân nặng
trung bình 49,7 ±7,8 52,6 ± 8,4 55,2 ± 8,8 55,2 ± 9,3 55,4 ± 9,3
Kết quả nghiên cứu cho thấy:
- Cân nặng trung bình của bệnh nhân tại tháng thứ 6 và tại tháng 12 sau điều trị với AZT lần lượt là 52,6 ± 8,4 và 55,2 ± 8,8, tăng có ý nghĩa so với tại thời điểm trước điều trị (49,7 ±7,8) đều với p < 0,05, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.
- Từ 24 tháng sau điều trị trở đi, cân nặng trung bình hầu như không tăng thêm.
57
Biểu đồ 3.2 cho thấy:
- So với trước điều trị, tại các thời điểm sau 6 tháng và sau 12 tháng điều trị, nhóm bệnh nhân có cân nặng > 50 kg đều tăng lên, lần lượt là 58,2% và 71,1% so với ban đầu là 45,1%
- Nhóm bệnh nhân có cân nặng 40 kg cũng giảm mạnh ở cả 2 thời điểm T6 và T12, lần lượt là 6,5% và 3,5% so với ban đầu là 19%.
3.2.1.2.Thay đổi về các NTCH:
Bảng 3.9 Tỷ lệ các NTCH tại các thời điểm
Các NTCH
T0 T6 T12 T24 T36
n % n % n % n % n %
thuộc giai đoạn 2 28 18,3 35 26,7 10 8,8 5 8,5 2 8,0 thuộc giai đoạn 3,4 43 28,1 13 9,9 5 4,4 2 3,4 2 8,0 Không NTCH 82 53,6 83 63,4 99 86,8 52 88,1 21 84,0 Tổng 153 100 131 100 114 100 59 100 25 100
Nghiên cứu về các bệnh nhiễm trùng chúng tôi nhận thấy:
- Tỷ lệ mắc các bệnh NTCH thuộc giai đoạn lâm sàng 3,4 trước điều trị là 28,1%, tỷ lệ này giảm mạnh sau 6 tháng điều trị và tiếp tục giảm sau đó; các bệnh NTCH thuộc giai đoạn 3,4 hay gặp là viêm não do Toxoplasma, PCP, CMV, nhiễm nấm Candida miệng, thực quản, viêm màng não do C.neoformans, tiêu chảy > 1 tháng,…
- Tỷ lệ mắc các bệnh NTCH thuộc giai đoạn 2 trước điều trị là 18,3%, tỷ lệ này tăng sau 6 tháng điều trị (26,7%), sau đó thì lại giảm mạnh; các NTCH thuộc giai đoạn 2 hay gặp là Zonna, viêm da tuyến bã, sẩn ngứa,…
58
3.2.2 Đánh giá hiệu quả điều trị của phác đồ có AZT về cận lâm sàng
3.2.2.1 Xét nghiệm miễn dịch:
Bảng 3.10 Số lƣợng trung bình tế bào TCD4 ở các thời điểm.
Chỉ số T0 T6 T12 T24 T36 số lượng trung bình tế bào TCD4 (TB/mm3) 109 ±73 207 ±131 262 ±165 328 ±171 349 ±189 p p < 0.01
- Kết quả nghiên cứu cho thấy: số lượng trung bình tế bào CD4 tăng tại các thời điểm so với thời điểm trước điều trị, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01.
Bảng 3.11 Số lƣợng tế bào TCD4 tăng thêm trung bình/1 bệnh nhân ở các thời điểm, so với thời điểm T0
Chỉ số T6 T12 T24 T36
Tế bào TCD4 tăng thêm
trung bình (TB/mm3)
100 152 215 229
- Trong nghiên cứu này số lượng tế bào CD4 tăng thêm trung bình là 100 tế bào/mm3/1 bệnh nhân ở thời điểm 6 tháng sau điều trị, con số này tại thời điểm 12, 24 và 36 tháng sau điều trị là 152, 216 và 229. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01.
59
Bảng 3.12 Thay đổi về số lƣợng TCD4 tại các thời điểm.
Số lượng TCD4 T0 T6 T12 T24 T36 n % n % n % n % n % TCD4 > 350 0 0 18 13,8 31 27,2 22 37,3 10 40,0 250 < TCD4 350 2 1,3 21 16,0 19 16,7 14 23,7 8 32,0 100 TCD4 250 79 51,6 60 45,8 52 45,6 20 33,9 6 24,0 TCD4 < 100 72 47,1 32 24,4 12 10,5 3 5,1 1 4,0 Tổng: 153 100 131 100 114 100 59 100 25 100 Bảng 3.12 cho thấy:
- Tỷ lệ bệnh nhân có CD4 < 100 giảm dần tại các thời điểm theo dõi - Tỷ lệ bệnh nhân có CD4 > 350 tăng dần tại các thời điểm theo dõi - Tuy nhiên vẫn có bệnh nhân có CD4 thấp < 100 tế bào/mm3 sau 2 năm
hay 3 năm điều trị.
Bảng 3.13 Liên quan giữa số lƣợng tế bào TCD4 ở thời điểm trƣớc điều trị (T0) với sự tăng hoặc không tăng cân sau khi điều trị tại các thời điểm T6 và T12
Số lƣợng CD4 trƣớc điều trị (TB/mm3) T6 T12 Tăng Không tăng Tăng không tăng 100 TCD4 250 48,2 59,4 53,4 53,7 TCD4 < 100 51,8 40,6 46,7 46,3 p p > 0,5 p > 0,5
Trong nghiên cứu này, chúng tôi không thấy có sự khác biệt về số lượng tế bào TCD4 tại thời điểm bắt đầu điều trị giữa nhóm có tăng cân và nhóm không tăng cân tại các thời điểm 6 tháng và 12 tháng sau điều trị, với p > 0,5
60
3.2.2.2. Thay đổi về tải lượng vi rút HIV
Biểu đồ 3.3 Đồ thị biểu diễn sự thay đổi CD4 và VL trong quá trình điều trị với phác đồ có AZT
Biểu đồ 3.3 cho thấy:
- Số lượng tế bào TCD4 tăng nhanh trong 18 tháng đầu sau điều trị, sau đó tiếp tục tăng và có xu hướng ổn định.
- Tải lượng vi rút (VL) giảm nhanh trong 6 tháng đầu, tỷ lệ bệnh nhân có VL giảm xuống mức < 400 copies/ml là 92,6 % với p < 0,001, và tỷ lệ bệnh nhân có VL giảm xuống dưới ngưỡng phát hiện được (< 40 copies/ml) là 72,3% với p < 0,001. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê.
61
Bảng 3.14 Liên quan giữa đáp ứng về miễn dịch và đáp ứng về vi rút học trong nhóm có VL < 40 copies/ml tại các thời điểm.
Số lƣợng TCD4 (TB/mm3) T6 T12 T24 T36 n % n % n % n % TCD4 > 350 15 16,0 32 29,6 18 34,6 8 40,0 250 < TCD4 350 18 19,1 20 18,5 12 23,1 6 30,0 100 TCD4 250 42 44,7 47 43,5 19 36,5 4 20,0 TCD4 < 100 19 20,2 9 8,4 3 5,8 2 10,0 Tổng: 94 100 108 100 52 100 20 100
Kết quả nghiên cứu cho thấy:
- Trong nhóm bệnh nhân đáp ứng miễn dịch tốt (VL<40 copies/ml) tại các thời điểm theo dõi thì tỷ lệ đạt TCD4 > 350 tế bào/mm3 tăng dần, tỷ lệ bệnh nhân có TCD4 < 100 tế bào/mm3 giảm dần.
- Tuy nhiên vẫn có bệnh nhân có TCD4 ở mức thấp < 100 tế bào/mm3
Bảng 3.15 Liên quan giữa đáp ứng vi rút học và đáp ứng miễn dịch trong nhóm bệnh nhân có TCD4 > 350 TB/mm3. VL (copies/ml) T6 T12 T24 T36 VL > 5000 2 2 1 1 40 VL 5000 3 2 3 1 VL 40 17 27 18 9 Tổng: 22 31 22 11
Kết quả nghiên cứu cho thấy:
- Trong số những bệnh nhân có đáp ứng miễn dịch tốt (TCD4 > 350 tế bào/ mm3) thì hầu hết cũng đều có đáp ứng tốt về vi rút học (VL < 40 copies/ ml)
- Tuy nhiên vẫn có bệnh nhân có VL trên ngưỡng phát hiện, cá biệt còn có bệnh nhân có VL > 5000 copies/ml.
62
3.2.3. Kết quả điều trị với phác đồ có AZT
Bảng 3.16 Tình trạng bệnh nhân tại thời điểm theo dõi cuối cùng.
Bệnh nhân T6 T12 T24 T36 n % n % n % n % Tử vong 0 0 4 3,5 5 8,5 3 12,0 bỏ trị, chuyển 0 0 9 7,9 4 6,8 1 4,0 Tiếp tục ARV 131 100 101 88,6 50 84,7 21 84,0
- Trong nghiên cứu này, sau 6 tháng đầu điều trị, không có bệnh nhân tử vong. Các thời điểm T12, T24 và T36 có bệnh nhân tử vong với tỷ lệ lần lượt là 3,5%, 8,5% và 12,0%, nguyên nhân tử vong là do bệnh nhân nhiễm một số bệnh nhiễm trùng cơ hội nặng như lao kháng thuốc, viêm màng não do C. neoformans, PCP, suy kiệt nặng,... và có bệnh nhân tử vong do sốc ma túy.
Bảng 3.17 Tỷ lệ các phác đồ bậc 1 và bậc 2 đƣợc sử dụng tại thời điểm theo dõi cuối cùng Phác đồ T6 T12 T24 T36 n % n % n % n % Bậc 1 131 100 109 95,6 53 89,8 22 88,0 Bậc 2 0 0 5 4,4 6 10,2 3 12,0
- Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ duy trì phác đồ bậc 1 sau 6 tháng điều trị là 100%, sau 24 tháng là 89,8%, sau 36 tháng là 88%.
63
3.3. Đánh giá tác dụng phụ thƣờng gặp của phác đồ có AZT (n = 153)
3.3.1. Tỷ lệ các tác dụng phụ thƣờng gặp của phác đồ có AZT
Bảng 3.18 Tỷ lệ các tác dụng phụ thƣờng gặp của phác đồ có AZT
Chỉ số N %
Buồn nôn, nôn 61 40,0
Thiếu máu 40 26,1
Chán ăn 24 15,7
Khó chịu 20 13,1
Đau đầu 10 6,5
Tăng men gan* 9 5,9
Rối loạn vị giác 8 5,2
Đau bụng 6 3,9
Phát ban 6 3,9
Sắc tố niêm mạc 5 3,3
Ỉa chảy 0 0
Hội chứng toan lac tic 0 0