1. 1T NG QUA NV AFLATOXIN
1.3.2Bin pháp sau thu ho ch
Ngay sau khi thu ho ch nên làm khô nông s n càng s m càng t t. c bi t ph i d i ánh n ng m t tr i c ng làm h n ch s phát tri n c a m c và gi m ph n nào c t aflatoxin. B o qu n nông s n n i khô ráo, thoáng mát, h n ch t i a hi n t ng nhi m m
i b t th ng hay s t n th ng h t [3].
Bi n pháp v t lý: n phòng ng a s nhi m aflatoxin b ng ph ng pháp v t lý có th a ra nh ng bi n pháp kìm ch có l i và hi u qu nh t. Làm khô t nhiên (ph i d i ánh n ng m t tr i), s y khô (than, n) làm cho c ch t t hàm m cho phép. Ph n l n các lo i n m m c phát tri n t t ho t n c t do trong c ch t aw= 0,8-0,85 [2].
Tác nhân v t lý quan tr ng n a c s d ng phòng ch ng n m m c là s d ng ng l ng chi u x . Vi c chi u x c ti n hành b ng tia n ng l ng cao, tia X...Tác ng di t m c c a chi u x do các tia này làm bi n i các c u trúc ch y u c a các axit amin, axit nucleotit, protein c a vi sinh v t, nh h ng n s phân chia chuy n hoá t bào. Ph n l n các loài n m m c u b di t li u 4,5 kgy (1kgy =100 krad = 1kj/kg).
Bi n pháp s d ng hóa ch t: c ng d ng và nghiên c u do tính ch t an toàn c a t s hoá ch t, c bi t là axit h u c : axit sorbic, axit propionic, axit acetic, axit benzoic, các mu i natri và canxi c a chúng nh canxi propionat hay natriropi. li u 1-3% các axit ho c mu i c a axit trên có th c ch s phát tri n c a n m m c trong th i gian dài. M t s h p ch t h u c khác nh thiosulfit, thiabendazon diphing và tinh d u th c v t nh : tinh d u h i, tinh d u c chi t t cây t i, tinh d u cam li u 0,2%, mentho li u 1,1% có th c ch c nhi u loài n m m c.
t s ch t ki m nh NaOH, Ca(OH)2, NH3… c ng có tác d ng làm gi m l ng aflatoxin ã nhi m trên nông s n [2]. Các h p ch t oxy hoá kh Na2SO4, NaHSO3 1% ho c 2% có tác d ng vô ho t aflatoxin. Hi n nay, ng i ta s d ng NH3 d ng khí nén c b m tu n hoàn vào các thùng ch a ngô b ng thép ho c trong các túi PE (có th ch a i 2030 t n ngô). Ngô ban u ã b nhi m aflatoxin v i hàm l ng 75ppb sau 13 ngày x lý v i 1,5% NH3 nhi t 32oC ã làm gi m xu ng còn 7ppb [11].
Có th b o qu n nông s n trong khí tr nh N2, CO2… tránh côn trùng xâm nh p, hay xông h i oxit etylen, metyl bromit… di t n m m c. Methylbromid li u 129 mg/l/h ho c 40 mg/l/h có th di t c nhi u loài n m m c. Khí ozon li u 10mg/m3 không khí c ti p xúc liên t c trong nhi u ngày có th ng n c n s phát tri n c a n m m c.
1.3.3 Bi n pháp sinh h c
1.3.3.1 Bi n pháp u khi n sinh h c
t s gi ng l c, ngô thu ho ch s m có th tránh c tình tr ng khô h n cu i v , n n gi m thi u nhi m aflatoxin [131]. T o gi ng cây tr ng có kh n ng kháng n m ng ph ng pháp bi n i gen. Ph ng pháp này có hi u qu cao nh ng l i gây ra nhi u ý ki n tranh cãi v tính an toàn sinh h c nên ch a c s d ng nhi u. M t s lo i d u chi t xu t t kinh gi i, húng qu , b c hà, inh l ng, qu … có th c ch s phát tri n c a
A. flavus vàA. parasiticus, ng n ch n s hình thành aflatoxin. Dùng lá cây xoan ho c lá hoa cúc vàng xông vì c hai lo i lá cây này u có tinh d u ch a axit formic. ó là nh ng ch t sát khu n, kháng khu n. Nh ng cách làm này không kinh t và ít nhi u nh hu ng t i mùi v s n ph m [21].
1.3.3.2 Bi n pháp s d ng vi sinh v t i kháng
Nhi u nghiên c u ã ch ra r ng, quá trình hình thành aflatoxin t A. flavus b c ch i các vi khu nLactic, Bacillus subtilis và m t s loài n m m c khác. Khi nuôi các ch ng vi sinh v t này v iA. flavus sinh c t s x y ra hi n t ng c nh tranh sinh h c, d n n t qu là hàm l ng aflatoxin b gi m m t cách áng k . S c ng sinh c a các loài n m khác không sinh c t nh A. flavus, A. niger, Trichoderma, Rhizoctonia,… c ng kìm hãm s phát tri n và kh n ng t o c t c aA. flavus[110]. Vì v y, có th s d ng nh ng vi sinh v t này làm tác nhân i kháng ch ng l i s nhi m n m m c sinh c t và aflatoxin trên nông s n.
Vi c s d ng các ch ng vi sinh v t i kháng trên nông s n th c ph m không có h i cho con ng i mà l i có kh n ng gi m s t o c t ho c c ch hoàn toàn vi c t o c t
a các loài n m m c là bi n pháp lý t ng. Theo nghiên c u c a Dorner, l c th ng b nhi mA. flavus và aflatoxin t giai n tr c thu ho ch [58]. Vì v y, nhi u Qu c gia nh
, n , Thái Lan, Nigeria ã có chi n l c phòng ch ng nh m gi m t n th t do aflatoxin gây nên trên l c giai n tr c và sau thu ho ch. Vi c s d ng ch ngA. flavus
không sinh c t c ch các ch ngA. flavus sinh c t nhi m trong t tr ng l c theo ch lo i tr c nh tranh ã c th c hi n các n c này [58]. C quan b o v môi tr ng c a M ã cho phép a vào danh m c ch ngA. flavus AF36 nh là tác nhân sinh c an toàn phòng ch ng aflatoxin trên ngô, l c và bông. Ch ph m AF36 s n xu t t ch ng A. flavus AF36 c công nh n là thu c b o v th c v t tích c c gi m các aflatoxin trên ngô, l c và bông b ng vi c c nh tranh và thay th ch ng A. flavus sinh
aflatoxin v n nhi m t nhiên trên t tr ng ngô, l c và bông. Ch ngA. flavus AF36 ch a các gen mã hoá cho s t o aflatoxin b t bi n và không th hi n s trao i v t ch t di truy n v i các ch ng sinh aflatoxin [127]. S d ng ch ng n mA. flavus không sinh c t phân l p c ki m soát aflatoxin là d án quan tr ng c a B Nông nghi p M . Cách ti p c n này ã c ch p nh n Châu Phi và tr thành m t h p ph n c a d án “ ánh giá c nhi m aflatoxin và can thi p b ng cách s d ng các bi n pháp ki m soát sinh h c”
c tài tr b i c quan phát tri n c (BMZ).
Vi t Nam, Nguy n Thùy Châu và c ng s ã nghiên c u kh n ng t o Iturin A t ch ngB. subtilis61s có ho t tính kháng các loài n mA. flavus, A. parasiticus sinh c t aflatoxin b o qu n m t s nông s n chính nh thóc, g o, ngô, khoai, s n, u , l c.
t qu nghiên c u cho th y li u x lý 0,05% Iturin A cho hi u qu c ch 100% các loàiA. flavus và A. parasiticus sinh c t aflatoxin trên ngô, l c [12]. ng Th Thanh Nhàn ã nghiên c u s d ng ch ngB. subtilis SVN i kháng phòng ch ngA.flavus và aflatoxin trên ngô b o qu n có hàm m 17% [5]. Nguy n Th Xuân Sâm và c ng s ã nghiên c u kh n ng i kháng c a ch ngA.flavus TH97 không sinh aflatoxin trong phòng ch ng n m m c và ki m soát aflatoxin trên thóc, g o. Ch ng A.flavus TH97 không sinh aflatoxin khi nuôi chung v i các ch ng A.flavus sinh c t trong u ki n phòng thí nghi m hay c bón vào t canh tác u làm gi m 100% hàm l ng aflatoxin trên thóc [13]. ây là k t qu vô cùng quan tr ng trong vi c nghiên c u ng d ng ch ngA. flavus
không sinh aflatoxin phòng tr các n mA. flavus sinh c t và aflatoxin nhi m trên nông s n. Tuy nhiên, theo các thông tin có c cho n nay Vi t Nam ch a có công b nào v nghiên c u ng d ng các ch ngA. flavuskhông sinh aflatoxin trong phòng ch ng
A. flavussinh c t và aflatoxin trên ngô và l c.
1.4 PHÒNG CH NG AFLATOXIN B NG CH NG A.FLAVUS
KHÔNG SINH AFLATOXIN
1.4.1 C ch ki m soát n m m c và aflatoxin b ng các ch ngA.flavus khôngsinh aflatoxin sinh aflatoxin
Nghiên c u a Wicklow và c ng s cho th y, s c ch sinh t ng h p aflatoxin x y ra khi nuôi c y h n h p bào t gi a các ch ng n m m c, trong ó c 2 ch ng u t o aflatoxin B1 ho c ch có m t ch ng t o aflatoxin B1. Ngh a là, s sinh t ng h p aflatoxin b c ch khi có s c nh tranh t n t i, cho dù ó là gi a các ch ng không sinh c t v i các ch ng sinh c t , ho c gi a các ch ng sinh c t v i nhau. Các tác gi ng cho
ng, các ch ngA. flavus không sinh c t c ch s sinh t ng h p aflatoxin b ng c ch nh tranh cùng loài [130].
Horn và c ng s ã s d ng m t ch ngA. flavus t bi n không sinh c t có bào t ính tr ng v i m t ch ngA. flavus t bi n sinh c t có bào t ính màu vàng, cùng thu c nhóm t ng ng dinh d ng ho c các nhóm t ng ng dinh d ng khác nhau nghiên u vai trò c a s t ng ng dinh d ng trong c ch s sinh t ng h p c t hay không. t qu thí nghi m cho th y, các ch ng không sinh c t phân l p t cùng nhóm hay khác nhóm t ng ng dinh d ng u có s c ch sinh aflatoxin B1 [79].
ng ph ng pháp “ a huy n phù”, Jha và c ng s ã cho th y, s t o c t c a nh ng ch ng sinh c t có th hoàn toàn b c ch b i các ch ng không sinh c t khác nhau n u nh chúng i t cùng nhóm hay khác nhóm t ng ng dinh d ng. Nh v y, có th lo i tr vai trò c a các nhóm t ng ng dinh d ng trong vi c c ch sinh t ng h p aflatoxin c a các ch ngA. flavus sinh c t [79, 89].
t gi thuy t liên quan n c ch phòng ch ng sinh h c là “s lo i tr c nh tranh” a các ch ng không sinh c t lên các ch ng sinh c t , do ó làm gi m m t các ch ng sinh c t trong t [46]. Wicklow và c ng s ã ch ng minh r ng, n ng c t (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
a các ch ng sinh c ph thu c vào t l các ch ngA. flavus không sinh c t có m t trong h n d ch nuôi c y, t l các ch ngA. flavus không sinh c t càng cao thì s tích t
c t càng gi m và ng c l i. Tác gi nh n th y, hàm l ng c t tích t ph thu c vào l s d ng dinh d ng c a các ch ng không sinh c t và sinh c t trong môi tr ng [130]. Các nghiên c u c a Cotty & Bayman c ng ch ra, m c c ch t ng t x y ra khi t l c a ch ng sinh và không sinh c t là 1:1 ho c 1:0,5 [44]. S khác bi t gi a lý thuy t và th c t cho th y còn có m t c ch sinh h c ch a bi t tham gia vào quá trình.
Theo nghiên c u c a Huang, aflatoxin v n c sinh t ng h p khi nuôi c y ch ng sinh c 53 và và không sinh c 51 c ng n cách b i m t màng 0,4 micromet mà không có s khác bi t nh nuôi c y ch ng 53 m t mình, trong khi h u nh không có c t
c s n xu t khi hai ch ng này c nuôi c y cùng nhau. K t qu này c khái quát ng cách ghép ôi ch ng 53 v i b n ch ng không sinh c khác và xu h ng t ng t
c quan sát th y. B i vì màng l c 0,4 micromet cho phép ch t dinh d ng hay các phân tín hi u ti m n ng i qua nh ng không cho phép s i n m i qua. u này cho th y r ng không ch có c nh tranh dinh d ng mà c n có t ng tác v t lý c n thi t [81].
Các công trình nghiên c u c a Chang và c ng s l i cho th y, m t s ch ng không sinh c t có th phát tri n t t trong môi tr ng nuôi c y v i các ch ng sinh c t mà không có tác d ng làm gi m s t o aflatoxin. Nh v y, s c nh tranh dinh d ng không
óng m t vai trò quan tr ng [100].
t qu nghiên c u c a Cotty & Bayman cho th y, ch ng AF13 kích thích s n sinh aflatoxin khi nuôi c y trong môi tr ng ch a ch t chi t t s i n m AF36, và không quan sát th y s c ch khu n l c trên b m t th ch [44]. Thí nghi m c a Wicklow và c ng s
ng ch ra r ng, s t ng tr ng c a n m t t h n khi nuôi c y ch ng không c và ch ng gây c cùng nhau [130]. Vì v y, gi thuy t kháng sinh có th c lo i tr .
m 2007, Huang và c ng s ã ti n hành nuôi h n h p 2 ch ngA. flavus Af70s- GFP sinh c t và ch ngA. flavus K49 không sinh c t , k t qu cho th y ch ng không sinh c t ã c ch s sinh tr ng, phát tri n c ng nh s sinh t ng h p aflatoxin c a ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t . B ng k thu t quan sát kính hi n vi n t c u trúc d i t bào ông ã làm sáng t c c ch này là do không bào trong t bào c a ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t không c hình thành khi cùng nuôi nó v i ch ng
A. flavus K49 không sinh c t , ây là m t m khác bi t khi ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t c nuôi c y n c. u này có ngh a là khi nuôi h n h p 2 ch ng A. flavus Af70s-GFP và K49 thì không bào c a ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t không c s n sinh, protein c a ch ng sinh c t có th b khu ch tán vào trong không bào c a ch ngA. flavus K49 ho c màng không bào ã b phân ly, mà không bào ch u trách nhi m trong s sinh tr ng và phát tri n c a n m m c. Vì v y, Huang k t lu n r ng khi nuôi h n p 2 ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t và ch ngA. flavus K49 không sinh c t thì có m t c a ch ngA. flavus K49 ã phá v không bào c a ch ngA. flavus Af70s-GFP t qu ã c ch s sinh tr ng, phát tri n c ng nh s sinh t ng h p aflatoxin [80].
1.4.2 Tuy n ch n các ch ng A. flavus không sinh aflatoxin làm tác nhân ikháng kháng
tuy n ch n các ch ngA. flavus không sinh aflatoxin bên c nh các ph ng pháp phân l p, phân lo i truy n th ng d a trên các c m sinh lý, sinh hóa các nhà khoa h c ã phát tri n m t ph ng pháp m i d a trên k thu t PCR h tr cho công vi c sàng l c và tuy n ch n này. Nh ng n m g n ây, h u h t các gen trong c m gen tham gia vào quá trình sinh t ng h p aflatoxin ã c làm sáng t và trình t ADN c a chúng c ng ã c xác nh làm c s khoa h c thu n l i cho vi c sàng l c các ch ng m c tiêu. Geisen ã s
ch ngA. parasiticus vàA. flavus sinh aflatoxin [71]. K t qu ki m tra cho th y s t ng ng cao gi a hai loàiA. parasiticus vàA. flavus. Tuy nhiên, theo các tài li u thì h u h t các ch ng A. parasiticus phân l p c u có kh n ng sinh aflatoxin và cho k t qu
ng tính i v i các ph n ng PCR nh ng l i ch có 40-50%A. flavusphân l p là có kh ng sinh aflatoxin. Các ch ng không có kh n ng sinh aflatoxin có th do m t ho c có các t bi n khác nhau trong các gen sinh t ng h p aflatoxin. Geisen ã th nghi m khi s ng ba ch ng A. flavus không sinh aflatoxin và các k t qu PCR ch ra r ng ch ng A. flavus BFE310 không mang c 3 gennor1, ver1 vàomtA, ch ngA. flvus BFE311 ã không có gen omtA. Trong khi ó, ch ngA.flavus BFE301 có c 3 gen nor1, ver1 và omtA.