1. 1T NG QUA NV AFLATOXIN
1.4.2 Tuy nc hn các ch ng A.flavus không sinh aflatoxin làm tác nhâ ni kháng
m 2007, Huang và c ng s ã ti n hành nuôi h n h p 2 ch ngA. flavus Af70s- GFP sinh c t và ch ngA. flavus K49 không sinh c t , k t qu cho th y ch ng không sinh c t ã c ch s sinh tr ng, phát tri n c ng nh s sinh t ng h p aflatoxin c a ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t . B ng k thu t quan sát kính hi n vi n t c u trúc d i t bào ông ã làm sáng t c c ch này là do không bào trong t bào c a ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t không c hình thành khi cùng nuôi nó v i ch ng
A. flavus K49 không sinh c t , ây là m t m khác bi t khi ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t c nuôi c y n c. u này có ngh a là khi nuôi h n h p 2 ch ng A. flavus Af70s-GFP và K49 thì không bào c a ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t không c s n sinh, protein c a ch ng sinh c t có th b khu ch tán vào trong không bào c a ch ngA. flavus K49 ho c màng không bào ã b phân ly, mà không bào ch u trách nhi m trong s sinh tr ng và phát tri n c a n m m c. Vì v y, Huang k t lu n r ng khi nuôi h n p 2 ch ngA. flavus Af70s-GFP sinh c t và ch ngA. flavus K49 không sinh c t thì có m t c a ch ngA. flavus K49 ã phá v không bào c a ch ngA. flavus Af70s-GFP t qu ã c ch s sinh tr ng, phát tri n c ng nh s sinh t ng h p aflatoxin [80].
1.4.2 Tuy n ch n các ch ng A. flavus không sinh aflatoxin làm tác nhân ikháng kháng
tuy n ch n các ch ngA. flavus không sinh aflatoxin bên c nh các ph ng pháp phân l p, phân lo i truy n th ng d a trên các c m sinh lý, sinh hóa các nhà khoa h c ã phát tri n m t ph ng pháp m i d a trên k thu t PCR h tr cho công vi c sàng l c và tuy n ch n này. Nh ng n m g n ây, h u h t các gen trong c m gen tham gia vào quá trình sinh t ng h p aflatoxin ã c làm sáng t và trình t ADN c a chúng c ng ã c xác nh làm c s khoa h c thu n l i cho vi c sàng l c các ch ng m c tiêu. Geisen ã s
ch ngA. parasiticus vàA. flavus sinh aflatoxin [71]. K t qu ki m tra cho th y s t ng ng cao gi a hai loàiA. parasiticus vàA. flavus. Tuy nhiên, theo các tài li u thì h u h t các ch ng A. parasiticus phân l p c u có kh n ng sinh aflatoxin và cho k t qu
ng tính i v i các ph n ng PCR nh ng l i ch có 40-50%A. flavusphân l p là có kh ng sinh aflatoxin. Các ch ng không có kh n ng sinh aflatoxin có th do m t ho c có các t bi n khác nhau trong các gen sinh t ng h p aflatoxin. Geisen ã th nghi m khi s ng ba ch ng A. flavus không sinh aflatoxin và các k t qu PCR ch ra r ng ch ng A. flavus BFE310 không mang c 3 gennor1, ver1 vàomtA, ch ngA. flvus BFE311 ã không có gen omtA. Trong khi ó, ch ngA.flavus BFE301 có c 3 gen nor1, ver1 và omtA.
t qu này cho th y có nhi u d ng t bi n và có th là gen u khi n [71].
Nghiên c u c a Geisen trên hai ch ng n m m cA. oryzae vàA. sojaecó m i liên h n g i v iA. parasiticus, A. flavus. Chúng không có kh n ng sinh t ng h p aflatoxin,
c s d ng nhi u trong s n xu t các s n ph m lên men truy n th ng và trong công ngh enzym. Nghiên c u cho th y, hai loài này có hai gen ver1 vàomtA nh ng không có gen
nor1. S không có m t gennor1 làm kìm hãm quá trình sinh t ng h p aflatoxin [103, 71, 139].
Chen và c ng s ã s d ng k thu t multiplex PCR ki m tra s có m t c a b n gen nor1, ver1, omtA và aflR trên 15 ch ng thu c nhóm Aspergillus m A. flavus, A. parasiticus, A. sojae, A. oryzae vàA. niger. K t qu cho th y, 7 ch ng sinh aflatoxin có t c b n gen, 5 ch ng không sinh aflatoxin ã không có b n gen. M t khác, nghiên u c ng ch ra r ng c 4 gen u có m t trong các ch ng A. parasiticus nh ng có hai ch ng trong ó không sinh aflatoxin. Các ch ngA. oryzae vàA. sojae không sinh aflatoxin nh ng trong ó có 3 ch ng có m t c b n gen nor1, ver1, omtA và aflR [86]. Criseo và ng s ã s d ng k thu t PCR th ng và multiplex PCR c ng cho k t qu t ng t , c n gennor1, ver1,omtAvàaflR u có m t t t c các ch ng sinh aflatoxin. Tuy nhiên, các ch ng không sinh aflatoxin nghiên c u l i a ra nhi u k t qu khác nhau, các ch ng này có th mang m t, hai, ba ho c c b n gen trên [48]. Kim và c ng s ã kh ng nh k thu t multiplex PCR là ph ng pháp chính xác xác nh các ch ngAspergillus sinh c
khi ki m tra s có m t c a b n gennor1, ver1,omtA và aflRtrên các ch ngAspergillus
phân l p t u t ng lên men [91].
Ph ng pháp PCR là ph ng pháp hi n i s d ng sàng l c các ch ng n m m c không sinh c t . Tuy nhiên, ki m tra s có m t c a các gen mã hóa cho quá trình sinh ng h p aflatoxin là ch a k t lu n các ch ngAspergillus flavussinh hay không sinh
aflatoxin vì m t s ch ngA.flavus v n có y các gen mã hóa cho quá trình sinh t ng p aflatoxin mà không sinh aflatoxin do chúng b t bi n gen. Vì v y, ph ng pháp nuôi y trên môi tr ng c hi u, sau ó chi t xu t và xác nh afatoxin b ng s c ký b n m ng, c ký l ng cao áp là y u t tiên quy t có c ch ng n m m c không sinh aflatoxin ng d ng trong phòng ch ng n m m c và aflatoxin trên ngô, l c.