1. 1T NG QUA NV AFLATOXIN
3.2.3 Nghiên cu hoàn thin ch p hm AFt ch ng A.flavus DA2
3.2.3.1 Nghiên c u l a ch n ch t mang
Ch ph m bào t c a ch ngA. flavusDA2 c t o ra b ng các ch t mang khác nhau: canxi alginate, than bùn, cám g o b o qu n và thu n l i cho quá trình óng gói, s
ng. Tính n nh c a ch ph m trong các ch t mang khác nhau c trình bày trong ng 3.17
ng 3.17 M t bào t A. flavus DA2 trong ch t mang các th i gian o qu n khác nhau
l ng bào t n m m c sau các th i gian o qu n (CFU/g) Lo i ch t mang 10 ngày 6 tháng 12 tháng Than bùn 1 x 109 1 x 109 7 x 108 Canxi alginate 1 x 109 1 x 109 8x 108 Cám g o 1 x 109 1 x 107 1x 105
t qu b ng 3.17 cho th y, m t bào t c a ch ngA. flavus DA2 h u nh không gi m sau 6 tháng b o qu n và ch gi m nh i v i các ch t b o qu n là canxi alginate và than bùn, t 1x109CFU/g xu ng còn 7x108CFU/g và t 1x109CFU/g xu ng còn 8x108CFU/g, theo th t sau 12 tháng b o qu n. M t bào t gi m m nh ch t mang là cám g o, t 1x109CFU/g, xu ng còn 1x107CFU/g sau 6 tháng b o qu n và còn 1x 105 CFU/g sau 12 tháng b o qu n. M t bào t DA2 gi m m nh trên n n ch t mang cám o, có th do trong quá trình b o qu n, cám g o hút m làm cho bào t n y m m làm gi m m t bào t . Do giá thành ch t mang canxi alginat t h n than bùn nên chúng tôi ch n than bùn làm ch t b o qu n bào t ch ngA. flavusDA2. Nh v y, có th nói r ng ch ph m AF trong công th c o ch ph m b ng than bùn và canxi alginate có tính n nh cao, s l ng bào t trong 1 gam ch ph m sau 12 tháng o qu n gi m không áng k .
Daigle và c ng s ã c ng ã s d ng cao lanh, t sét và alginat t o ch ph m bào t ch ngAspergillus flavus AF36. Lõi ngô c ng là v t li u thay th t t cho cao lanh. Vi c b sung gluten lúa m có tác d ng c i thi n vi c t o h t c a ch ph m. K t qu nghiên c u c ng cho th y khi s d ng 1% natri alginate; 5% lõi ngô nghi n; 5% gluten lúa
3.2.3.2 Quy trình công ngh s n xu t ch ph m A.flavus DA2 quy mô pilot
các k t qu nghiên c u thu nh n c, quy trình công ngh nhân nuôi, thu h i t o ch ph mA.flavus DA2 quy mô pilot c trình bày theo s sau:
Ch ngA.flavusDA2
Trong ng nghi m
môi tr ng th ch nghiêng PDA
Nuôi c y b t
Nhân gi ng c p 1 trên bình tam giác 500ml
Nhân gi ng c p 2 trên h th ng t ng lên men
chìm s c khí 100 lít/m
Thu h i sinh kh i bào t m
Ph i tr n ch t mang
óng gói
Ch ph m AF
Ch ngA.flavusDA2
Trong ng nghi m
môi tr ng th ch nghiêng PDA
Nuôi c y b t
Nhân gi ng c p 1 trên bình tam giác 500ml
Nhân gi ng c p 2 trên h th ng t ng lên men
chìm s c khí 100 lít/m
Thu h i sinh kh i bào t m
Ph i tr n ch t mang
óng gói
Thuy t minh quy trình:
+ Gi gi ng
Ch ngA.flavus DA2 không sinh aflatoxin c gi gi ng ng th ch nghiêng có môi tr ng PDA sau ó c c y sang môi tr ng khoai tây l ng trong bình tam giác 500ml. Thành ph n môi tr ng khoai tây l ng: Glucoza 20g/l, d ch chi t khoai tây 1000ml, pH u ch nh n 5,5.
+ Nhân gi ng c p 1
Nuôi c y l c ch ngA.flavus DA2 bình tam giác có môi tr ng PDA l ng trên máy c u ch nh nhi t Sanyo (Nh t B n), v n t c 200 v/ph, nhi t 30oC trong th i gian 48 gi .
+ Nhân gi ng c p 2
Sinh kh i ch ngA.flavus DA2 c chuy n sang h th ng t ng lên men chìm s c khí 100 lít/m ch a môi tr ng PDA (pH 5,5) ã c kh trùng và làm ngu i n nhi t 30oC ( u ki n kh trùng 1atm, trong th i gian 30 phút). T l ti p gi ng 10%, nuôi c y trong th i gian 48 gi , v n t c khu y 200 v/ph, nhi t nuôi c y 30oC.
+ Nuôi c y b m t
Chu n b môi tr ng cám tr u: cám tr u c tr n u theo t l 4:1. B sung 1 ng n c t c m 65% là m thích h p nuôi c y ch ng A.flavus DA2 không sinh aflatoxin. Cho nguyên li u cám tr u vào túi nilong ho c bao PP d t, m i túi ch a 5kg cám tr u, h p kh trùng nhi t 1210C trong 1 gi . nguyên li u cám tr u ngu i n 30oC r i vào các khay có kích th c 80cmx50cmx15cm, dày cám tr u 6cm/khay, m i khay có 5kg môi tr ng. Ti p gi ng v i t l 10% vào môi tr ng cám tr u, tr n th t u h n d ch ch ng gi ngA.flavus DA2 không sinh aflatoxin và cám tr u. Nuôi c y ch ngA.flavus DA2 không sinh aflatoxin nhi t 30oC trong 9 ngày. Các khay nuôi c y c t trên các dàn s t có kích th c dài 1,2m, r ng 0,6m, cao 1,5m.
+ Thu h i các bào t t o ch ph m AF t ch ngA.flavus DA2
Sau khi k t thúc nuôi c y, s y khô sinh kh i nhi t 450C trong 48gi . Ph i tr n ng sinh kh i thu c sau khi s y v i than bùn, t l sinh kh i ch ng A. flavus DA2 không sinh aflatoxin và than bùn là 1:1. óng gói ch ph m AF vào túi polyetylen và b o qu n ch ph m n i khô mát.
3.3 NGHIÊN C U NG D NG CH PH M AF3.3.1 Nghiên c u quy mô phòng thí nghi m