2.2.4.5. Phương pháp xác định thành phần hóa học trong cao trích vỏ chuối bằng kỹ thuật HPLC thuật HPLC
Trong nghiên cứu này thành phần hóa học của cao trích vỏ chuối được xác định bằng kỹ thuật HPLC-ESI-MS
Quy trình sắc ký lỏng (Quy trình LC)
Pha tĩnh: ct ACE3- C18 (4,6 ì150mm; 3,5 àm), c n nhit ở 40°C. Pha động: chương trình pha động được thực hiện theo bảng 2.2 với tốc độ dòng 0,5 mL/phút. Trong đó, pha A là dung dịch nước cất chứa 0,1% acid formic và pha B là ACN chứa 0,1% acid formic. Thể tích mẫu tiêm là 20 µL.
Bảng 2.3. Chương trình pha động trên cột C18
Thời gian (phút) % Pha A* % Pha B*
0 95 5
2 95 5
25 0 100
30 0 100
(∗): tính theo % về thể tích
Đầu dị khối phổ (MS) với giao diện phun ion (ESI-MS)
Trước khi vào pha động của máy khối phổ, pha động giải ly ra từ cột sắc ký được cho hòa tan vào một hệ mạng chất lỏng (liquid matrix): có thể là nước hoặc nước-hữu cơ, bấy giờ xem như là có dung dịch chất điện ly. Pha động này được cho đi vào ống mao quản làm bằng thép khơng gỉ, đường kính 0,1 – 0,5 mm và được phun sương ra khỏi ống vi quản với vận tốc phun sương chậm 10 – 20 µL/phút. Độ đúng ion m/z được hiệu chỉnh trên dung dịch hiệu chỉnh ESI – L tuning mix bằng bộ bơm mẫu trực tiếp Syringe tại tốc độ 200 μL/giờ.
2.2.5. Phương pháp chuẩn bị tôm thẻ chân trắng 2.2.5.1. Phương pháp xử lý tôm 2.2.5.1. Phương pháp xử lý tôm
Sử dụng tôm thẻ chân trắng với số lượng từ 30 – 35 con/kg được cung cấp từ chợ địa phương Thủ Đức, thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam với cùng một tiểu thương để thực hiện thí nghiệm. Tơm cịn sống và tươi, được vận chuyển đến Khoa Cơng nghệ Thực phẩm, Đại học Sư phạm Kỹ thuật Thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam trong vịng 15 phút. Khi đến nơi, đưa tôm vào tủ lạnh ở nhiệt độ 1-3oC cho đến khi sử dụng (giữ tối đa 1 giờ).
2.2.5.2. Phương pháp xử lý tơm bằng cao trích vỏ chuối
Dung dịch BPE được chuẩn bị bằng cách hịa cao trích vỏ chuối vào nước cất lần lượt theo các nồng độ khác nhau (0,1%; 0,5% và 1% w/v). Sau đó, tơm ngun con (bao gồm cả phần đầu) được ngâm trong dung dịch BPE đã được chuẩn bị theo tỷ lệ giữa tôm và dung dịch BPE là 1:2 (g/mL) ở nhiệt độ phòng trong 30 phút và được kí hiệu lần lượt là “BPE- 0.1”, “BPE-0.5” và “BPE-1” tương ứng với mẫu được xử lí với cao trích vỏ chuối ở nồng độ 0,1%, 0,5% và 1%. Tôm được ngâm trong nước cất cùng điều kiện được lấy làm mẫu đối chứng. Tôm sau khi được xử lý sẽ được mang đi làm ráo trong 10 phút. Mỗi mẫu (khoảng 20 con tôm) được đặt trên khay, bọc lại và bảo quản trong nước đá vảy. Các mẫu được lấy
ngẫu nhiên để phân tích sau mỗi 2 ngày và phân tích đến ngày thứ 8 (Thanasak Sae-leaw và Soottawat Benjakul, 2019b).
2.2.6. Phương pháp đánh giá khả năng bảo quản của BPE lên tôm thẻ chân trắng 2.2.6.1. Phương pháp xác định pH thịt tôm 2.2.6.1. Phương pháp xác định pH thịt tôm
pH thịt tôm được tiến hành theo phương pháp của Maria Elvira Lo´pez-Caballero và cộng sự (2007). Với từng mẫu tôm đã được xử lý, lấy 10g phần thịt tôm trộn với 20mL nước cất và mang đi đồng hóa. Sau 5 phút ở nhiệt độ môi trường, hỗn hợp được đo bằng máy pH hãng Mettler Toledo AG 8603. (Maria Elvira Lo´pez-Caballero và cộng sự, 2 007).
2.2.6.2. Phương pháp đánh giá melanosis trên tôm
Thực hiện đánh giá melanosis trên mẫu tôm đối chứng và mẫu tôm được ngâm với dung dịch cao trích từ vỏ chuối vào ngày thứ 0, 2, 4, 6 và 8. Tôm được đặt trên nền xanh lục với số lượng 5 con và đưa vào buồng chụp với ánh sáng cố định. Sử dụng máy ảnh Canon EOS 60D với thông số ISO 800, tốc độ màn chập 1/60s, khẩu độ f5,6 để thu hình ảnh. Sự thay đổi màu sắc trên các mẫu tơm được đánh giá thơng qua độ xám trung bình từ phần mềm ImageJ 1.52a (Image Processing and Analysis in Java). Độ xám trung bình càng nhỏ, sắc tố đen càng cao.
2.2.6.3. Phương pháp xác định chỉ số oxy hóa TBARS thịt tơm
Nguyên tắc: Q trình peroxy hóa lipid tạo ra sản phẩm cuối cùng bao gồm lipid
hydroperoxide, aldehyde, và malondialdehyde (MDA). Các hợp chất này tác dụng với TBA tạo nên sắc tố làm thay đổi màu sắc dung dịch. Trong đó, MDA được đánh giá là một trong những chất phân tích được sử dụng với mục đích ước tính kết quả của q trình peroxy hóa lipid. MDA khi kết hợp với TBA tạo thành MDA-TBA2 mang sắc tố hồng, hấp thụ cực đại tại bước sóng 532 nm. Dựa vào độ hấp thụ, các mẫu được tính dựa trên đường chuẩn MDA để xác định chỉ số oxy hóa có trong mẫu tơm (Hamdy F. Moselhy và cộng sự, 2013).
Chỉ số oxy hóa TBARS trong các mẫu được xác định theo mô tả của Benjakul và Bauer (2001) với một số sửa đổi để phù hợp với điều kiện thí nghiệm. Lấy 1g thịt tơm xay trộn với 9 mL dung dịch HCl 0,25 N chứa 0,375% TBA và 15% TCA. Hỗn hợp được đun nóng trong nước sơi trong 10 phút, sau đó làm mát dưới vòi nước chảy. Hỗn hợp được ly tâm với tốc độ 4000 rpm/phút trong thời gian 20 phút bằng máy ly tâm. Thu phần dung dịch bên trên và đo
chuẩn bị theo cách tương tự nhưng thay thế 1g thịt tôm bằng 1mL hỗn hợp HCl. Chỉ số TBARS được tính tốn dựa theo đường chuẩn của MDA (2 – 8 ppm) và được biểu thị bằng mg MDA/kg thịt tôm (T. Sae-Leaw và S. Benjakul, 2019).
Thịt tôm
Hỗn hợp HCl chứa TBA, TCA
Định lượng Phối trộn Đun sôi Làm mát Ly tâm Thu dung dịch bề mặt Kết quả Đo độ hấp thụ ở 532 nm