- Thành phần phản ứng PCR
2 – 6 96oC 10 giõy 50oC 5 giõy 60oC 4 phỳt B ảo quản ở 10oC
2.6.2. Phương phỏp lấy mẫu ối và kỹ thuật phõn tử để phỏt hiện đột biến
gen CYP21A2
Tiến hành làm hồ sơ chọc ối tại khoa Chẩn đoỏn trước sinh - Bệnh viện Phụ sản Trung ương ở tuần thai thứ 14-16. Mỗi thai phụ sẽ được làm hồ sơ xin chọc ối theo quy định của bệnh viện. Cỏc bỏc sĩ sản khoa sẽ khỏm toàn diện về lõm sàng và siờu õm thai để loại trừ cỏc tỡnh trạng nhiễm trựng cấp tớnh, cỏc tỡnh trạng bất thường của mẹvà thai. Để trỏnh cỏc tai biến cú thể xảy
ra trong quỏ trỡnh làm thủ thuật chọc ối gõy nguy hiểm cho mẹ và thai. Hồ sơ sau khi được thụng qua tại Hội đồng chuyờn mụn của Bệnh viện, thai phụ sẽ được hẹn lịch chọc ối tại Trung tõm Chẩn đoỏn trước sinh. Phương phỏp chọc ối dưới sự hướng dẫn của siờu õm, do cỏc bỏc sĩ tại Trung tõm Chẩn đoỏn trước sinh Bệnh viện Phụ sản Trung ương tiến hành.
Dịch ối được bảo quản và vận chuyển về Trung tõm Nghiờn cứu Gen – Protein, Trường Đại học Y Hà Nội trong vũng 1-2 giờ.
+ Tỏch chiết DNA từ tế bào ối.
+ Xỏc định đột biến gen CYP21A2 bằng kỹ thuật MLPA và giải trỡnh tự gen. Qui trỡnh được mụ tảở mục 2.5.
Mẫu DNA đối chứng dương, DNA đối chứng õm và DNA của anh hoặc chị thai nhi được phõn tớch cựng với mẫu DNA thai nhi để xỏc định đột biến. Kết quảthu được, là cơ sở khoa học đểtư vấn di truyền và cú kế hoạch điều trị cho thai nhi.
Thai nhi bị bệnh mang đột biến gen CYP21A2, sau khi sinh được thăm khỏm và điều trị sớm theo phỏc đồ tại Bệnh viện Nhi Trung ương (phụ lục 2)
Thai nhi mang gen dị hợp tử sẽđược thụng bỏo cho gia đỡnh và lập hồ sơ theo dừi, quản lý và tư vấn di truyền.
Thai nhi bỡnh thường, khụng mang gen gõy bệnh thụng bỏo cho gia đỡnh.