CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
2.3.1. Bệnh phẩm
- Máu ngoại vi của bệnh nhân: Lấy 1 ml máu tĩnh mạch có chống đơng bằng EDTA K3 để đếm các chỉ số huyết học máu ngoại vi và làm tiêu bản
- Dịch hút tuỷ xương của bệnh nhân: Lấy 0,5 ml dịch tuỷ có chống
đơng bằng EDTA K3 để đếm chỉ số huyết học, làm tiêu bản tuỷ đồ. Lấy 2 ml
dịch tuỷ chống đông bằng heparin dùng để xét nghiệm tế bào di truyền và 2
ml để làm xét nghiệm sinh học phân tử.
2.3.2. Phương tiện dụng cụ
2.3.2.1. Phương tiện dụng cụ làm xét nghiệm tổng phân tích tế bào máu
ngoại vi, huyết tủy đồ.
- Bộ sát trùng tại chỗ: cồn Iod 5%, cồn 700, bông, gạc; - Kim chọc tuỷ;
- Bơm tiêm 5-10ml;
- Thuốc gây tê xylocain 2 %; - Ống nghiệm có EDTA K3;
- Bộ dụng cụ làm tiêu bản máu, tiêu bản tuỷ, thuốc nhuộm Giemsa, thuốc nhuộm hồng cầu lưới;
- Hoá chất nhuộm hoá học tế bào;
- Máy đếm tế bào tự động XT-2000i của hãng Sysmex của Nhật bản; - Kính hiển vi quang học Nikon của Nhật Bản;
- Máy Flowcytometry FC500 của hàng Beckman – Coulter của Mỹ.
2.3.2.2. Phương tiện dụng cụ, hóa chất sinh vật phẩm làm xét nghiệm tế
bào di truyền và sinh học phân tử
Phương tiện, dụng cụ nghiên cứu
- Ống Heparin Sodium (Hãng: Beaton Dickinson, Mỹ)
- Pipet nhựa vô trùng (Samco Scientific, Mexico) - Ống Falcon 15 ml (Corning, Mỹ)
- Ống Falcon 50ml (Corning, Mỹ)
- Hệ thống phân tích NST tự động (của hãng Carl Zeiss, Nhật) - Máy ly tâm của hãng Hitachi, Nhật.
- Máy lắc ủ nhiệt Thermomixer compact của hãng Eppendorf, Đức. - Máy Vortex.
- Máy PCR Light Cycler 2.0 của Roche.
- Máy điện di, máy chụp ảnh gel của hãng Beckman Coulter, Mỹ.
Hóa chất - sinh phẩm
Hóa chất sinh phẩm cho xét nghiệm công thức nhiễm sắc thể Ph1.
- Môi trường RPMI 1640 ( Hãng Gibco, Mỹ).
- Huyết thanh bào thai bê (Hãng Gibco , Mỹ). Hóa chất sinh phẩm cho xét nghiệm FISH.
Probe: Vysis LSI BCR-ABL Dual Cobe, Dual Fusion (Abbott Molecular, Mỹ) và hóa chất đệm.
Hóa chất - sinh phẩm để tách chiết ARN: Kít tách ARN của Qiagen, Đức.
Hóa chất sinh phẩm cho xét nghiệm Nested-RT-PCR
- 10X Buffer, 25mM MgCl2, 2.5mM d NTP, Revert Transcriptase, Taq polymerase.
- Cặp mồi đặc hiệu: *P190 ABL-a3-B + BCR-b1-A ABL-a3-D+ BCR-b2-C *P210 ABL-a3-B + BCR-c1-A ABL-a3-D+ BCR-c1-C