Xử lý thông keđ baỉng phaăn meăm Microsoft Excel và MSTATC ( Russel D. Freed).
CHƯƠNG 4. KÊT QUẠ VAØ THẠO LUAƠN
4.1 Laơp boơ sưu taơp giông
Do giông thu nhaơn từ các nguoăn khác nhau neđn bước đaău tieđn chúng tođi tiên hành kieơm tra lái các đaịc tính cụa loài Acetobacter xylinum.
4.1.1 Sơ tuyeơn
Từ 14 nguoăn giông và mău thu thaơp như đã giới thieơu qua bạng 3.1, chúng tođi tiên hành phađn laơp, tách và làm thuaăn thu được toơng coơng 59 chụng vi khuaơn sinh acid acetic. Tređn mođi trường thách đĩa, 59 chụng vi khuaơn tređn mĩc thành khuaơn lác từ cơ chât ethanol và sạn sinh ra acid hữu cơ tương ứng là acid acetic làm tan CaCO3 táo vòng phađn giại trong xung quanh khuaơn lác.
Kêt quạ kieơm tra ban đaău xác định khạ naíng sạn sinh cellulose cụa 59 chụng vi khuaơn Acetic cho thây:
- Sau 24 giờ nuođi cây, chư có 12 chụng vi khuaơn xuât hieơn lớp màng tređn beă maịt mođi trường ( hình 4.1).
- Sau 48 giờ nuođi cây, có theđm 9 chụng vi khuaơn xuât hieơn lớp màng tređn beă maịt mođi trường.
- Sau 72 giờ nuođi cây, có theđm 8 chụng vi khuaơn xuât hieơn lớp màng tređn beă maịt mođi trường.
- Sau 96 giờ nuođi cây, khođng thây xuât hieơn theđm chụng vi khuaơn nào có hình thành lớp màng mỏng tređn beă maịt mođi trường.
Từ 59 chụng vi khuaơn sinh acid acetic, chúng tođi chư sơ tuyeơn được 29 chụøng vi khuaơn có khạ naíng sạn sinh cellulose. 29 chụng này được dùng cho những nghieđn cứu tiêp theo.
4.1.2 Khạo sát đaịc đieơm sinh hĩc cụa 29 chụng vi khuaơn
4.1.2.1 Đaịc đieơm hình thái hĩc và tê bào hĩc
(1) (2)
(3) (4)
Hình 4.2 Hình ạnh vi theơ cụa moơt sô chụng đái dieơn
Nhaơn xét chung đaịc đieơm tê bào hĩc cụa 29 chụng sơ tuyeơn:
- Veă hình dáng tê bào : Đa sô các chụng đeău có tê bào hình que, trực khuaơn. Có 4 chụng có dáng caău trực khuaơn .
- Veă sự saĩp xêp tê bào : Tât cạ các chụng tê bào đeău đứng rieđng lẹ.
- Kích thước tê bào thay đoơi từ 1-3µm. Đa sô các chụng có kích thước là 2µm. Những chụng có hình dáng tê bào caău trực khuaơn có kích thước từ 1-2µm. Đáng chú ý 8 chụng vi khuaơn có kích thước từ 2-3µm. Veă đaịc đieơm tê bào , sự khác nhau giữa các chụng chụ yêu ở kích thước tê bào.
- Veă đaịc đieơm nhuoơm Gram: Tât cạ các chụng thuoơc Gram ađm. Có 2 chụng kêt quạ nhuoơm Gram thay đoơi khi tê bào già ( Khi non : Gram ađm, khi già : Gram dương ).
- Khođng có khạ naíng di đoơng.
- Bao nhaăy: Khi còn non thì khođng có bao nhaăy nhưng khi trưởng thành thì có vỏ nhaăy bao quanh.
- Khođng sinh bào tử.
Hình 4.2 theơ hieơn hình ạnh vi theơ đái dieơn cho moơt sô chụng. 4.1.2.2 Đaịc đieơm sinh trưởng tređn mođi trường đaịc
Vi sinh vaơt khi phát trieơn tređn beă maịt mođi trường đaịc sẽ hình thành các khuaơn lác đaịc trưng cho chụng đó( hình 4.3).
Hình 4.3 Hình ạnh đái theơ khuaơn lác moơt sô chụng đái dieơn
Đaịc đieơm sinh trưởng và phát trieơn tređn mođi trường đaịc :
Tât cạ các chụng đeău táo khuaơn lác dáng tròn , traĩng, đúc, đa sô beă maịt khuaơn lác trơn bóng và câu trúc khuaơn lác đoăng nhât. Sau 3 ngày nuođi cây, kích thước trung bình cụa khuaơn lác đát từ 3-5 mm (chư có 1 chụng có khuaơn lác dáng
đieơm). Tât cạ các chụng, khuaơn lác đeău khođng có khạ naíng táo huyeăn phù trong nước và khuaơn lác sađu thì đoăng nhât và khođng sinh khí.
Quan sát sự sinh trưởng cụa các chụng dĩc theo vêt cây tređn mođi trường thách nghieđng đeău có dáng dày, mép phẳng.
4.1.2.3 Đaịc đieơm sinh trưởng tređn mođi trường lỏng
Tât cạ các chụng đeău có khạ naíng táo màng. Màng có theơ dáng phẳng hay xù xì, khá nhaăy ướt, noơi, hướng leđn thành bình ( phú lúc). Có 9 chụng có mức sinh trưởng mánh táo thành màng dày. Các chụng còn lái táo màng mỏng. 4.1.2.4 Đaịc đieơm sinh lý
a.Quan heơ với oxygen
Hình 4.4 Quan heơ với oxy cụa moơt sô chụng vi khuaơn
Quan sát sự sinh trưởng cụa các chụng khi nuođi cây baỉng dịch vi khuaơn troơn vào mođi trường agar chưa đođng. Hình 4.4 theơ hieơn quan heơ với oxy cụa các chụng vi khuaơn cho thây tât cạ các chụng đeău thuoơc hiêu khí.
b. Quan heơ với nhieơt đoơ
Bạng 4.1 Quan heơ với nhieơt đoơ
Nhieơt đoơ nuođi Các vêt cây 20
0C 300C 370C 450C
Thứ nhât - +++ - -
Thứ hai - +++ - -
Thứ ba - +++ - -
Quan sát sự sinh trưởng cụa các chụng khi nuođi cây ở 200C, 300C, 370C và 450C (bạng 4.1) cho thây các chụng phát trieơn tôt trong khoạng nhieơt đoơ 300C. c. Quan heơ với pH
Tât cạ các chụng khạo sát đeău thuoơc lối ưa acid ( pH=4-5).
Như vaơy, veă đaịc đieơm sinh lý, các dòng vi khuaơn đeău thuoơc lối hiêu khí , phát trieơn tôt ở 300C và ưa acid.
4.1.2.5 Đaịc đieơm sinh hóa
Kieơm tra các đaịc đieơm sinh hoá theơ hieơn đaịc đieơm định danh loài
Acetobacter xylinum.
Bạng 4.2. Kêt quạ kieơm tra các đaịc đieơm sinh hoá
STT Đaịc đieơm Hieơn tượng Kêt quạ (+/-)
1 Oxy hoá ethanol thành acetic acid Mođi trường chuyeơn màu vàng sau đó chuyeơn thành xanh lúc. +
2 Catalase Sụi bĩt khí +
3 Sinh trưởng tređn mođi trường Hoyer Sinh khôi khođng phát trieơn - 4 Chuyeơn hoá glucose thành
acid
Vòng sáng xung quanh khuaơn
laic +
5 Chuyeơn hoá glycerol thành Dihydroxy acetone Vòng CuO xuât hieơn quanh khuaơn lác. + 6 Kieơm tra khạ naíng sinh saĩc tô nađu Khođng có saĩc tô nađu + 7 Kieơm tra khạ naíng toơng hợp cellulose Váng vi khuaơn xuât hieơn màu lam +
29 chụng đeău có chung kêt quạ khạo sát các đaịc đieơm sinh hoá phađn lối như trong bạng 4.2. Kêt quạ cho thây đađy là đaịc đieơm sinh hóa cụa loài
Acetobacter xylinum.
4.1.3 Ký hieơu
Qua đánh giá các đaịc tính cụa Acetobacter và các đaịc tính sinh hóa cụa
Acetobacter xylinum có theơ khẳng định 29 chụng đeău là Acetobacter xylinum.
Bạng 4.3 Ký hieơu boơ sưu taơp giông
Ký hieơu giông Nguoăn giông hoaịc nguoăn phađn laơp Đaịc đieơm rieđng (nêu có)
Acetobacter xylinum BC1 Vieơn Cođng ngheơ Á chađu tái Thái Lan
Acetobacter xylinum BC2 Vieơn Cođng ngheơ Á chađu tái Thái Lan
Acetobacter xylinum BC3 Vieơn Cođng ngheơ Á chađu tái Thái Lan
Acetobacter xylinum BC4 Vieơn Cođng ngheơ Á chađu tái Thái Lan
Acetobacter xylinum BC5 Vieơn cođng ngheơ Thực phaơm và mođi trường Philippines
Acetobacter xylinum BC6 Vieơn cođng ngheơ Thực phaơm và mođi trường Philippines
Acetobacter xylinum BC7 Trường Đái hĩc Kasetsart Thái Lan
Acetobacter xylinum BC8 Trường Đái hĩc Kasetsart Thái Lan
Acetobacter xylinum BC9 Trường Đái hĩc Kasetsart Thái Lan
Acetobacter xylinum BC10 Trường Đái hĩc Kasetsart Thái Lan
Acetobacter xylinum BC11 Vieơn Sinh hĩc
Acetobacter xylinum BC12 Vieơn Sinh hĩc
Acetobacter xylinum BC13 Trường Đái hĩc Bách Khoa TP.HCM
Acetobacter xylinum BC14 Trường Đái hĩc Bách Khoa TP.HCM
Acetobacter xylinum BC15 Cơ sở sạn xuât thách dừa (tưnh Bulacan- Philippines)
Acetobacter xylinumBC16 Cơ sở sạn xuât thách dừa (Namli-
Philippines) Tê bào dài- Màng dày
Acetobacter xylinum BC17 Cơ sở sạn xuât thách dừa (tưnh Pulalan- Philippines)
Acetobacter xylinum BC18 Cơ sở sạn xuât thách dừa (tưnh Bulacan- Philippines)
Acetobacter xylinum BC19 Cơ sở sạn xuât thách dừa (Philippines)
Acetobacter xylinum BC20 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt
Acetobacter xylinum BC21 Phađn laơp từ dịch giâm nước dừa
Acetobacter xylinum BC22 Phađn laơp từ dịch giâm nước dừa
Acetobacter xylinum BC23 Phađn laơp từ mău giâm gáo
Acetobacter xylinum BC24 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt
Acetobacter xylinum BC25 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt (Campuchia) Tê bào dài- Màng dày
Acetobacter xylinum BC26 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt
Acetobacter xylinum BC27 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt
Acetobacter xylinum BC28 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt (Campuchia) Tê bào dài- Màng dày
Acetobacter xylinum BC29 Phađn laơp từ dịch giâm thôt nôt