Sulfaguanidine, có khạ naíng toơng hợp cellulose cao
Gađy đoơt biên baỉng tia UV ở bước sóng 260nm đeơ chĩn lĩc dòng có khạ naíng táo ra BC cao tređn mođi trường rư đường qua các khạo sát:
- Aûnh hưởng cụa tia tử ngối đên tê bào vi khuaơn Acetobacter xylinum, xác định mức đoơ sông sót và tỷ leơ % gađy chêt.
- Chĩn lĩc đoơt biên kháng Sulfaguanidine.
- Khạ naíng leđn men cellulose cụa các dòng đoơt biên tređn mođi trường rư đường, so sánh maơt đoơ tê bào và sạn lượng BC cụa các dòng đoơt biên so với dòng gôc.
• Tác đoơng gađy chêt cụa tia tử ngối leđn tê bào vi khuaơn
Acetobacter xylinum:
- Hốt hóa và nhađn giông vi khuaơn A.xylinum ở 28-300C trong 4 ngày. Xác định maơt đoơ tê bào trong dịch nhađn giông. Chuyeơn dịch nhađn giông vào đĩa Petri vođ trùng sao cho beă cao cụa dịch giông trong đĩa là 4mm.
- Chiêu xá tia tử ngối: Trong tụ cây vođ trùng được bô trí moơt đèn tử ngối có chieău dài 60 cm, máy khuây từ. Khoạng cách từ đèn tử ngối đên beă maịt máy khuây từ là 9cm. Đaịt đĩa Petri chứa dịch tê bào vi khuaơn
A.xylinum leđn máy khuây từ trong tụ vođ trùng ( đieău chưnh tôc đoơ khuây phù hợp đeơ tê bào được troơn đeău trong quá trình chiêu xá). Mở naĩp hoơp Petri và baơt đèn UV đeơ thực hieơn các lieău chiêu xá như sau : 0; 10-4J/cm2; 1,5.10-4J/cm2; 2.10-4J/cm2; 2,5.10-4J/cm2; 3.10-4J/cm2. Thời gian chiêu xá tương ứng là 0; 30; 60; 90; 120 và 150 giađy.
- Ở moêi lieău chiêu xá, dùng pipetman hút 500µl cho vào các ông eppendorf tương ứng.
- Đeơ tránh ánh sáng tiêp xúc với dịch, các ông eppendorf caăn bĩc giây bác beđn ngoài và ụ tôi trong 2 giờ đeơ tránh hieơn tượng quang phúc hoăi.
- Trại dịch giông tê bào chiêu xá leđn mođi trường chĩn lĩc đoơt biên kháng Sulfaguanidine.
- Xác định tỷ leơ sông sót cụa các tê bào sau chiêu xá.
• Chĩn lĩc các đoơt biên kháng Sulfaguanidine
- Với 4 lođ thí nghieơm A,B, C, D như sau:
Dịch giông Mođi trường
Dịch giông khođng chiêu xá
Dịch giông chiêu xá Mođi trường khođng có
Sulfaguanidine
Lođ A Lođ C
Mođi trường Sulfaguanidine 850 mg/l mođi trường
LođB Lođ D
Sau 4 ngày ụ ở nhieơt đoơ 28-300C, đêm sô khuaơn lác tređn moêi đĩa ở moêi lođ thí nghieơm.
Kieơm tra lái tính kháng Sulfaguanidine cụa các chụng đoơt biên baỉng phương pháp in dâu nhung.
3.3.5 Khạo sát quá trình nhađn giông quy mođ nhỏ và quy mođ pilot
Các khạo sát quá trình nhađn giông xác định:
- Xác định nguoăn[N] hữu cơ: Sử dúng 4 nguoăn pepton, cao nâm men, dịch đaơu nành và dịch chiêt nâm men thụy phađn. Xác định nguoăn [N] hữu cơ phù hợp.
- Xác định tôc đoơ laĩc : Khạo sát 5 tôc đoơ quay cụa máy laĩc 100, 200, 250, 300 và 350 vòng/ phút.
- Xác định thời gian nhađn giông trong khoạng từ 2 đên 6 ngày.
- Aûnh hưởng cụa nhieơt đoơ nuođi cây trong quá trình nhađn giông qua 5 mức 25oC, 28oC, 30oC, 32oC và 35oC.
- Xác định phương thức khuây đạo trong nhađn giông quy mođ lớn (nhađn giông câp 3) qua 3 kieơu: fermentor, thiêt bị có heơ thông thoơi khí và thiêt bị có heơ thông thoơi khí - hoăi lưu.
Fermentor: Bio Flo 115 Modular Fermentor ME1275 – 0055, với các thođng sô đã xác định ở tređn veă mođi trường nhađn giông, thời gian, nhieơt đoơ, pH tôi ưu, heơ thông cánh khuây chẽ ba với tôc đoơ 200 vòng / phút đát noăng đoơ oxy hòa tan trong khỏang 0,5-0,6 mmol / l / phút.
Thiêt bị có heơ thông thoơi khí: máy súc khí Lifetech AP1000 với các thođng sô như sau:
- Lưu lượng khí max: 1 m3/phút.
- Lưu lượng khí dùng trong thí nghieơm: 5.10-2 m3/phút. Thiêt bị có heơ thông thoơi khí – hoăi lưu:
+ Máy súc khí Lifetech AP1000 với các thođng sô như tređn. + Máy bơm Lifetech AP1600 với lưu lượng bơm 100 l/h. Chư tieđu theo dõi: maơt đoơ tê bào/ml.
Moơt sô phương thức trong quá trình nhađn giông, leđn men BC được ghi nhaơn qua hình 3.1.
1.Lín men bề mặt 2. Lín men chìm (Máy lắc)
3. Lín men chìm (Thoơi khí-Hồi lưu) 4. Lín men chìm (Fermentor)
Hình 3.1. Mođt sô phương thức trong quá trình nhađn giông, leđn men BC
3.3.6 Thành phaăn mođi trường phù hợp phương thức leđn men beă maịt và leđn men chìm
- Xác định nguoăn [N] hữu cơ: Sử dúng 4 nguoăn là pepton, cao nâm men, dịch đaơu nành và dịch chiêt nâm men thụy phađn.
- Xác định noăng đoơ [N] hữu cơ ( dịch chiêt nâm men): Với 5 mức [N] thay đoơi 1% , 3%, 5%, 7%, 9%.
Các chư tieđu theo dõi: maơt đoơ tê bào, sạn lượng S-BC, sạn lượng A-BC.
3.3.7 Moơt sô đieău kieơn nuođi cây ạnh hưởng đên quá trình leđn men beă maịt và leđn men chìm BC
- Aûnh hưởng cụa pH ban đaău với các mức khạo sát pH thay đoơi từ 3; 3,5; 4; 4,5; 5; 5,5; 6.
- Aûnh hưởng cụa lượng giông và thời gian leđn men với 5 mức thay đoơi tỷ leơ giông 4%, 6%, 8%, 10%, 12% trong thời gian theo dõi từ 4 -8 ngày.
- Aûnh hưởng cụa nhieơt đoơ mođi trường trong quá trình leđn men BC với 5 mức 26oC , 28 oC, 30 oC, 32oC, 34oC.
- Rieđng đôi với kieơu leđn men chìm đeơ thu A-BC : Theo dõi tôc đoơ quay cụa máy laĩc trong leđn men chìm và theo 3 phương thức khuây đạo: sử dúng máy laĩc, thiêt bị có heơ thông thoơi khí và thiêt bị có heơ thông thoơi khí - hoăi lưu.
Các chư tieđu theo dõi: Sạn lượng S-BC, sạn lượng A-BC.