Bước 1) Xử lý dịch giông vi khuaơn caăn cô định
- Chuaơn bị giông thuaăn khiêt tređn mođi trường thách nghieđng.
- Nhađn giông : các chê đoơ nhađn giông tôi ưu múc 3.3.5. Maơt đoơđ giông trung bình đát 48.106 đên 5.107 tê bào/ml.
- Ly tađm thu sinh khôi giông
Bước 2) Phương pháp băy hâp thú vi khuaơn tređn BC: goăm 2 giai đốn
* Giai đốn 1: BC đóng vai trò là chât neăn ( matrix) đeơ hâp thú vi khuaơn caăn cô định.
- Chuyeơn BC đã xử lý, sinh khôi giông vi khuaơn sau ly tađm và dịch mođi trường dinh dưỡng tươi vào bình ( 100 gam BC đã xử lý có khạ naíng hâp thú và trương nở hòan toàn 0,5 lít dịch có maơt đoơ giông là 3.108 tê bào/ ml ). Sử dúng bình có dung tích 1 lít.
- 3 phương pháp hâp thú sau:
• Phương pháp A: ngađm trong thời gian 20-30 phút, cho đên khi miêng BC trương nở hoàn toàn trong dịch giông.
• Phương pháp B: như phương pháp A nhưng kêt hợp sử dúng cánh khuây đeơ taíng khạ naíng hâp thú tê bào vi khuaơn vào chât mang.
• Phương pháp C: tương tự phương pháp A nhưng kêt hợp sử dúng chê đoơ laĩc 250 v/phút đeơ taíng khạ naíng hâp thú tê bào vi khuaơn vào chât mang.
* Giai đốn 2: BC đóng vai trò là giá đỡ ( supporter) đeơ nhađn giông thu sinh khôi vi khuaơn
- Chât neăn BC sau khi cô định vi khuaơn được chuyeơn vào các đĩa Petri.
- Đaịt các đĩa Petri chứa BC đã cô định vi khuaơn vào tụ âm phù hợp với nhieơt đoơ sinh lý vi khuaơn cô định. Ví dú, với A.xylinum thì nhieơt đoơ ụ trong khoạng 28-30oC. Với nhóm vi khuaơn Lactic thì nhieơt đoơ ụ từ 40-
450C. Thời gian ụ tôi ưu được xác định khi maơt đoơ vi khuaơn cô định cao nhât.
Phương pháp theo dõi trong và sau quá trình cô định
- Maơt đoơ vi khuaơn phát trieơn tređn chât neăn (matrix) trong thời gian ụ: . Khạo sát 2 dáng chât neăn là S-BC và A-BC
. Xác định thời gian ụ tôi ưu, cho maơt đoơ tê bào vi khuaơn cao nhât.
- Gia taíng maơt đoơ vi khuaơn phát trieơn tređn các chât neăn baỉng cách cại tiên phương pháp hâp thú.
- Maơt đoơ vi khuaơn cô định tređn chât neăn trong thời gian bạo quạn ở 2 chê đoơ : nhieơt đoơ phòng và nhieơt đoơ mát.