- Cơ chế tác dụng của glucocorticoid
1. Lâm sàng và điều trị
2.2.5.2. Phương tiện xét nghiệm
Tất cả các xét nghiệm tiến hành tại Khoa Xét nghiệm Huyết học - Trung tâm Huyết học Truyền máu, Khoa Hóa sinh và Khoa Vi sinh Bệnh viện Trung ƣơng Huế.
+ Xét nghiệm huyết học
* Máy đếm tế bào máu: máy Cell - Dyn 3200 của hãng Abbott - Hoa Kỳ. Máy gồm hai kênh: đo tế bào ở kênh quang học theo nguyên lý đếm tế bào dòng chảy và kênh đo hemoglobin theo nguyên lý so màu. Tiến hành lấy đủ 2 mL máu trong ống có chất chống đông EDTA. Những kết quả tiểu cầu < 150 x 106/L đều đƣợc kéo lam nhuộm giêm - sa để loại trừ giảm tiểu cầu giả do ngƣng tập với EDTA.
* Máy xét nghiệm đông máu: máy STA compact tự động của hãng Diagnostica Stago - Pháp. Máy hoạt động theo nguyên lý đầu dò điện từ để phát hiện thời điểm đông. Máy có ƣu điểm tránh đƣợc các sai số do mẫu thử nhƣ huyết tƣơng giàu lipid, tăng bilirubin. Hoá chất xét nghiệm dùng của
chính hãng cung cấp. Lấy máu trong ống nghiệm có chất chống đông là citrat natri 3,2% theo tỉ lệ 1/ 9 (1 thể tích chống đông / 9 thể tích máu), điều chỉnh chất chống đông theo hematocrit. Xét nghiệm tiến hành trong vòng 4 giờ, bảo đảm đúng các tiêu chuẩn lấy máu của phòng xét nghiệm đông máu.
+ Xét nghiệm hoá sinh và miễn dịch:
* Máy phân tích khí máu hiệu Medica Easy Blood Gas của Hãng Medica Hoa Kỳ: máy đƣợc thiết kế để đo trực tiếp pH (hoạt tính ion hydro), PaCO2 (áp suất riêng phần CO2) và PaO2 (áp suất riêng phần O2) trên các mẫu máu toàn phần lấy bằng các ống tiêm hoặc ống mao mạch có tráng heparin. Các kết quả thƣờng đƣợc điều chỉnh theo nhiệt độ do đó phản ánh chính xác các tình trạng in vivo. Trên cơ sở pH, PaCO2, PaO2 và các tham số bổ sung nhƣ nhiệt độ, hemoglobine, ... máy sẽ tính toán bổ sung các kết quả khác nhƣ HCO3-, kiềm dƣ, SaO2, ...
* Máy OLYMPUS AU640 của Nhật: xét nghiệm bilirubin, creatinin, CRP và glucose.
†) Định lƣợng bilirubin: xét nghiệm so màu để định lƣợng bilirubin toàn phần trong huyết thanh hoặc huyết tƣơng ngƣời. Nguyên tắc xét nghiệm: muối diazonium ổn định phản ứng trực tiếp với bilirubin liên hợp và phản ứng với bilirubin không liên hợp khi có sự hiện diện của yếu tố xúc tác để hình thành azobilirubin. Sự hấp phụ ở bƣớc sóng 540 nm tỷ lệ với nồng độ bilirubin toàn phần.
†) Định lƣợng creatinin: sử dụng phƣơng pháp so màu động học Raffe. Nguyên lý: creatinin phản ứng với acid picric trong môi trƣờng kiềm tạo thành phức hợp màu cam. Tốc độ thay đổi mật độ quang đo ở bƣớc sóng 520/800 nm tỷ lệ thuận với nồng độ creatinin trong mẫu.
†) Định lƣợng CRP: phƣơng pháp miễn dịch đo độ đục (immunonephelometry) của phản ứng kháng nguyên - kháng thể giữa kháng thể dê kháng CRP ngƣời và CRP trong mẫu xét nghiệm.
hexokinase (HK) theo nguyên lý sau:
Glucose + ATP HK G-6-P + ADP
G-6-P + NAD G6PDH 6-Phosphogluconate +NADH + H+ Sự thay đổi mật độ quang ở 340/380 nm tỷ lệ thuận với lƣợng glucose có trong mẫu.
* Máy xét nghiệm IMMULITE 1000 của hãng Siemens - Hoa Kỳ: dùng để định lƣợng IL-6 và IL-10. Sử dụng bộ kít định lƣợng IL-6 và IL-10 của chính hãng cung cấp.
Nguyên lý: xét nghiệm miễn dịch hóa phát quang (chemiluminescent immunometric assay) gắn enzym pha rắn.
Mẫu máu có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tƣơng (chống đông bằng heparin). Mẫu máu đƣợc ly tâm, tách huyết thanh, đông lạnh huyết thanh và bảo quản ở tủ đông lạnh sâu (-300C) của hãng SANYO - Nhật ở Ngân hàng Máu khu vực - Bệnh viện Trung ƣơng Huế trƣớc khi xét nghiệm, thời gian bảo quản mẫu đông lạnh cho phép kéo dài đến 6 tháng [158], [159].
Đây là phƣơng pháp miễn dịch kiểu sandwich, đƣợc ứng dụng để định lƣợng các chất phân tích có nồng độ thấp, dễ dàng và nhanh chóng. Chất cần định lƣợng (IL-6 hoặc IL-10) là kháng nguyên đƣợc kẹp giữa 2 kháng thể đặc hiệu trong thuốc thử:
Anti-IL-6 + IL-6 + anti-IL-6 cộng hợp enzym
Chất đánh dấu là một enzym kết hợp với chất nền hóa phát quang sẽ phát sáng. Cƣờng độ ánh sáng phát ra tỷ lệ với lƣợng enzym hiện diện và liên quan trực tiếp với lƣợng IL-6 có trong mẫu xét nghiệm (sơ đồ 2. 2).
Ngƣỡng phát hiện của máy: IL-6: 2 - 1000 pg/mL ;
IL-10: 5 - 1000 pg/mL [160].
Đối với những kết quả trả lời bán định lƣợng > 1000 pg/mL, mẫu huyết thanh sẽ đƣợc hòa loãng 1/2 hoặc 1/4 , … để lặp lại xét nghiệm lần 2 hoặc lần
3 cho đến khi cho kết quả định lƣợng. Sau đó, kết quả sẽ đƣợc tính ngƣợc với độ hòa loãng để trả lời kết quả của mẫu xét nghiệm.
Sơ đồ 2.2. Nghiệm pháp miễn dịch hóa phát quang định lƣợng
* Nguồn: theo Rockland immunochemicals inc. (2012) [146] +Xét nghiệm vi sinh:
* Đàm, mủ, nƣớc tiểu: phƣơng pháp trực tiếp nhuộm Gram, đếm bạch cầu, ... tìm vi khuẩn.
* Cấy máu: trên môi trƣờng Mac Conkey ở máy cấy máu BacT/ALERT của hãng BIORAD - Pháp.
* Cấy các bệnh phẩm khác theo quy trình thƣờng quy của Khoa Vi sinh trên các môi trƣờng thạch dinh dƣỡng và thạch máu.
* Cấy nấm trên môi trƣờng Sabauraud.
* Kháng sinh đồ trên môi trƣờng Mueller - Hinton.