CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.6. Các bước khảo sát
2.3.6.1. Khảo sát thành phần và pH dung dịch nền
Khảo sát thành phần và pH của dung dịch nền rất quan trọng quyết định đến kết quả phân tích. Trong dung dịch điện phân để giảm sự điện di và sự ảnh hưởng của dòng tụ điện người ta cần cho thêm lượng dư chất điện li trơ vào dung dịch. Chất điện li thường dùng là: KCl; KNO3; NH4Cl; NaOH; HCl. pH của dung dịch cũng ảnh hưởng đến thế đỉnh và cường độ dòng khuếch tán giới hạn. Khi thay đổi pH của dung dịch đo, thế đỉnh pic có thể dịch chuyển về phía âm hơn hoặc dương hơn tùy vào phản ứng điện cực. Trong luận án chúng tôi đã lựa chọn khảo sát các dung dịch nền NaOH; đệm photphat; đệm axetat; đệm Britton-Robinson ở các pH từ 2 đến 13 cho các thuốc.
Lấy chính xác một thể tích thuốc chuẩn có nồng độ nhất định cho vào bình định mức 25 ml, thêm nước cất đến thể tích khoảng 5ml, thêm 8 – 10 ml dung dịch đệm, định mức đến vạch. Chuyển tồn bộ dung dịch vào bình điện phân. Tiến hành ghi đo dịng khuếch tán bằng phương pháp von-ampe xung vi phân và von-ampe xung vi phân hòa tan hấp phụ.
2.3.6.2. Khảo sát điều kiện thủy phân cefadroxil
* Khảo sát nồng độ NaOH: Lấy 0,25ml dung dịch cefadroxil có nồng độ 0,05mg/ml cho vào cốc thủy tinh chịu nhiệt, thêm nước cất đến thể tích khoảng 5ml, thêm V ml dung dịch NaOH 1,0M (V = 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0 ml), đun cách thủy 60 phút ở nhiệt độ 100oC, lấy ra chuyển vào bình định mức 25 ml, định mức bằng nước cất hai lần đến vạch rồi cho toàn bộ dung dịch vào bình điện hóa. Tiến hành ghi đo bằng phương pháp von-ampe xung vi phân và von-ampe hòa tan hấp phụ.
* Khảo thời gian thủy phân: Lấy 0,25ml dung dịch cefadroxil có nồng độ 0,05mg/ml cho vào cốc thủy tinh chịu nhiệt, thêm nước cất đến thể tích khoảng 5 ml, thêm V ml dung dịch NaOH 1,0M (V là giá trị tốt nhất đã tìm được từ thí nghiệm trên), đun cách thủy ở nhiệt độ 100oC trong thời gian t (từ 5 đến 60 phút), lấy ra chuyển vào bình định mức 25,00ml, định mức bằng nước cất hai lần đến vạch rồi cho tồn bộ dung dịch vào bình điện hóa. Tiến hành ghi đo bằng phương pháp von-ampe xung vi phân và von-ampe hòa tan hấp phụ.
* Khảo sát nhiệt độ thuỷ phân: Lấy 0,25ml dung dịch cefadroxil có nồng độ 0,05mg/ml cho vào cốc thủy tinh chịu nhiệt, thêm nước cất đến thể tích khoảng 5ml, thêm V ml dung dịch NaOH 1,0M, đun cách thủy ở các nhiệt độ từ 30 đến 100oC, chuyển dung dịch vào bình định mức 25ml, định mức bằng nước cất hai lần đến vạch rồi cho tồn bộ dung dịch vào bình điện hóa. Tiến hành ghi đo bằng phương pháp von-ampe xung vi phân và von- ampe hòa tan hấp phụ.
2.3.6.3. Nghiên cứu cơ bản
Các thông số khảo sát:
- Khoảng quét thế: Khảng quét thế có thể xác định dựa vào phổ CV của chất điện hoạt. Khoảng quét thế không ảnh hưởng nhiều đến thế đỉnh
pic và cường độ dòng pic nhưng cần quét thể trong khoảng thế phù hợp sao cho lấy hết chân pic, không cần quá dài làm mất thời gian ghi đo không cần thiết.
- Tốc độ quét thế: Tốc độ quét thế phụ thuộc vào bước nhảy thế, trong phương pháp von-ampe xung vi phân tốc độ quét thế thường từ 5 đến 20 mV/s, tương ứng với bước nhảy thế từ 2 đến 8 mV. Tốc độ qt càng cao thì ghi dịng càng nhanh nhưng cũng ảnh hưởng đến cường độ dòng hòa tan và độ nhạy của phép đo.
- Biên độ xung: Thường từ 10 đến 80 mV, biên độ xung càng cao chiều cao pic càng lớn nhưng lại làm chân pic rộng, giảm độ phân giải.
- Thời gian đuổi khi oxi: Oxi hòa tan trong nước ảnh hưởng đến quá trình phân tích các chất hữu cơ trong nước do ảnh hưởng đến chất lượng đường khuếch tán thậm chí có thể phản ứng với chất phân tích làm giảm nồng độ của chất phân tích. Vì vậy trước khi đo cần thiết phải đuổi oxi khỏi nền. Trong phương pháp von-ampe loại bỏ oxi hòa tan trong nước bằng cách sục khí nito vào dung dịch, thời gian sục khí được chọn khi khơng có sự ảnh hưởng đến dịng pic.
- Thế tích lũy Eacc: Trong phương pháp von-ampe hịa tan hấp phụ thế tích lũy (làm giàu) là thơng số quan trọng. Cần tìm được thế tích lũy phù hợp để chất hấp phụ lên điện cực lớn nhất trong cùng một khoảng thời gian, khi đó dịng hịa tan sẽ có giá trị lớn nhất, tăng độ nhạy của phép phân tích. Với các hợp chất hữu cơ một số tác giả thường chọn thế khoảng – 0,4V.
- Thời gian tích lũy tacc: Thời gian tích lũy càng nhiều thì chất hấp phụ lên điện cực càng lớn làm cường độ dòng hòa tan tăng, nhưng đến một giá trị nhất định cường độ dòng hòa tan sẽ bão hòa. Tùy thuộc nồng độ chất phân tích và yêu cầu phân tích mà có thể chọn thời gian tích lũy phù hợp.