tốn được trình bày trong bảng 3.45.
Bảng 3.45: Độ lặp lại của cefadroxil Mẫu Mẫu (số xác định song song) Nồng độ chuẩn (µg/ml) Nồng độ xác định (µg/ml) Nồng độ trung bình (µg/ml) RSD (%) 1 0,30 0,30 0,292 1,40% 2 0,30 0,29 3 0,30 0,29 4 0,30 0,29 5 0,30 0,29 6 0,30 0,29 1 0,90 0,91 0,897 1,15% 2 0,90 0,91 3 0,90 0,89 4 0,90 0,89 5 0,90 0,89 6 0,90 0,89 1 1,50 1,48 1,495 1,38% 2 1,50 1,48 3 1,50 1,51 4 1,50 1,47 5 1,50 1,51 6 1,50 1,52
Kết quả thực nghiệm cho thấy phương pháp có độ đúng, độ chính xác cao, độ lệch chuẩn tương đối đều nằm trong giới hạn cho phép < 2%.
Nhận xét: Qua nghiên cứu khảo sát các điều kiện phân tích cefadroxil cho thấy: cefadroxil với phân tử khá cồng kềnh, có vịng β-lactam ngưng tụ với vịng 6 cạnh khơng có hoạt tính điện hóa trực tiếp. Thực nghiệm đã cho thấy với các hệ đệm axetat, photphat, Britton-Robinson có pH = 2 ÷ 8 khơng có tín hiệu điện hóa. Khi bị thủy phân trong môi trường kiềm cefadroxil tạo thành các sản phẩm chứa nhóm C = N và C = C có phản ứng khử trên điện cực thủy ngân. Trong nền đệm photphat và nền NaOH sản phẩm thủy phân của cefadroxil cho pic nhọn tại thế khoảng -0,7V. Nghiên cứu đường von- ampe vòng cho thấy sản phẩn thủy phân của cefadroxil có hoạt tính điện hóa gần thuận nghịch, pic khử cao hơn píc oxi hóa nhiều lần vì vậy chọn pic khử để phân tích. Thực nghiệm đã thành cơng khi chọn điều kiện thủy phân và các điều kiện ghi đo phổ von-ampe xung vi phân cho thế đỉnh pic khá ổn định. Khoảng tuyến tính là 0,2 – 2,0 µg/ml với R2 = 0,9998, LOD = 6,22.10-8M, LOQ = 2,07.10-7M. Các kết quả nghiên cứu về độ đúng, độ chính xác đều nằm trong giới hạn cho phép của Bộ Y tế về định lượng dược phẩm.
3.4.1.3. Xây dựng qui trình định lượng cefadroxil trong mẫu thuốc.
Thuốc cefadroxil hiện đạng lưu hành trên thị trường chủ yếu dưới thuốc viên. Căn cứ vào các kết quả nghiên cứu và qui định về xác định độ đồng đều hàm lượng và độ đồng đều khối lượng trong kiểm nghiệm dược phẩm của Bộ Y tế (được qui định trong Dược điển Việt Nam III, phần phụ lục 8.2 8.3) [1; 4], chúng tơi xây dựng qui trình phân tích đối với hai loại chế phẩm này như sau:
Qui trình xác định: cân 20 viên thuốc, xác định khối lượng trung bình của 1 viên, nghiền mịn, trộn đều. Cân chính xác lượng bột tương ứng 50,0 mg cefadroxil hịa tan trong cốc thủy tinh rồi chuyển tồn bộ vào bình định mức 100 ml, định mức bằng nước cất đến vạch. Lắc kỹ dung dịch, để lắng trong (dung dịch 1). Lấy 2,50 ml dung dịch 1 chuyển vào bình định mức 50 ml, định mức bằng nước cất đến vạch (dung dịch 2).
Dùng micropipet lấy 0,30 ml dung dịch 2, thêm nước cất đến khoảng 5ml, thêm 4ml dung dịch NaOH 1,0M, thủy phân trong 45 phút, để nguội, chuyển vào bình định mức 25 ml, định mức bằng nước cất đến vạch. Lắc kỹ rồi chuyển vào bình điện phân và tiến hành đo trong các điều kiện đã chọn. Hàm lượng cefadroxil được xác định bằng phương pháp thêm chuẩn. Hàm lượng cefadroxil trong 1 viên thuốc được xác định theo công thức:
Hàm lượng cefadroxil/viên =25 Cx 50 100 500*10 3 0,3 2,5 50
(mg)
3.4.1.4. Áp dụng thực tế phân tích các mẫu thuốc
Tiến hành định lượng cefadroxil trong 2 loại thuốc là Cefadroxil 500mg viên nang dạng bột sản xuất tại Công ty TNHH MTV Dược phẩm và sinh học y tế Mebiphar (Số lô SX: 020810) và Công ty Cổ phần Dược phẩm TW- Vidapha; (Số lô SX: 020910).
Tiến hành 6 lần cân đo mẫu theo qui trình trên. Kết quả được trình bày trong bảng 3.46 và 3.47.
Bảng 3.46: Kết quả định lượng cefadroxil trong viên nang cefadroxil (500 mg) sản xuất tại Công ty TNHH MTV Dược phẩm và sinh học y tế Mebiphar. Mẫu Nồng độ
(µg/ml)
Hàm lượng cefadroxil / viên
Hàm lượng
phần trăm (%) Số liệu thống kê
1 0,299 498,50 99,70 X= 491,72 (98,34%) SD = 5,63 RSD = 1,14 % m = 491,72 ± 5,91 (mức tin cậy 95%) 2 0,295 492,33 98,47 3 0,291 484,33 96,87 4 0,297 495,83 99,17 5 0,296 493,67 98,73 6 0,291 485,67 97,13
Bảng 3.47: Kết quả định lượng cefadroxil trong viên nang cefadroxil (500 mg) sản xuất tại Công ty Cổ phần Dược phẩm TW- Vidapha.
Mẫu Nồng độ (µg/ml)
Hàm lượng cefadroxil / viên
Hàm lượng
phần trăm (%) Số liệu thống kê
1 0,290 482,67 96,53 X= 487,44 (97,49%) SD = 6,61 RSD = 1,36 % m = 487,44 ± 6,94 (mức tin cậy 95%) 2 0,288 480,83 96,17 3 0,292 487,33 97,47 4 0,290 484,17 96,83 5 0,299 498,83 99,77 6 0,294 490,83 98,17
Phân tích đối chứng theo phương pháp HPLC 98,2%
Các kết quả phân tích đều có RSD nhỏ (<2,0%), đáp ứng yêu cầu của phương pháp phân tích. Các kết quả phân tích cũng cho thấy hàm lượng cefadroxil trong các viên thuốc từ 96,53 đến 99,77 % so với ghi trên nhãn, đối chiếu với tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam 4 [1] thấy thuốc của các công ty trên đều đạt tiêu chuẩn 90 đến 110% so với ghi trên nhãn.
So sánh kết quả phân tích với mẫu gửi đi kiểm nghiệm đối chứng (MĐC) tại Cơng ty Cổ phần Hóa dược Việt Nam theo phương pháp HPLC (chuẩn Dược điển Việt Nam) cho thấy sự sai lệch giữa các kết quả phân tích trong giới hạn cho phép sự sai khác chỉ là ngẫu nhiên.
3.4.2. Nghiên cứu định lượng cefadroxil bằng phương pháp von – ampe hòa tan hấp phụ
3.4.2.1. Nghiên cứu đặc tính hấp phụ của cefadroxil trên điện cực HMDE
Sử dụng dung dịch chuẩn có nồng độ chính xác biết trước, tiến hành quét thế von-ampe vòng và von-ampe hòa tan hấp phụ xung vi phân trong điều kiện thích hợp với thời gian làm giàu khác nhau. Khả năng hấp phụ của thuốc trên điện cực được thể hiện qua cường độ pic tăng theo thời gian làm giàu.
Kết quả nghiên cứu khả năng hấp phụ của cefadroxil trên điện cực giọt thủy ngân đối với dung dịch cefadroxil thể hiện trong hình 3.66 và 3.67.
-400m -600m -800m -1.00 -1.20 U (V) -140n -120n -100n -80.0n -60.0n -40.0n -20.0n I (A ) Hình 3.66: Phổ CV của thuốc cefadroxil ở các thời gian làm giàu:
0s; 30s; 60s; 90s; 150s; 180s. -500m -600m -700m -800m -900m U (V) -125n -100n -75.0n -50.0n -25.0n 0 I (A ) Hình 3.67: Phổ DP của thuốc cefadroxil ở các thời gian làm giàu:
0s; 30s; 60s; 90s; 180s.
Có sự tăng mạnh của cường độ dòng pic theo thời gian làm giàu cho thấy cefadroxil có khả năng hấp phụ tốt trên điện cực giọt thủy ngân.
Ảnh hưởng của thế tích lũy (Eacc)
Thế tích lũy là yếu tố rất quan trọng quyết định khả năng hấp phụ và tham gia phản ứng khử cực của chất trên bề mặt điện cực. Vì vậy chúng tơi khảo sát ảnh hưởng của thế tích lũy trước khi khảo sát các yếu tố khác ảnh hưởng khác đến cường độ dòng hấp phụ. Tiến hành khảo sát ảnh hưởng của thế tích lũy đến dung dịch có nồng độ 0,1 µg/l. Kết quả được trình bày trên hình 3.68, bảng 3.478và hình 3.69.
Ở thế hấp phụ từ -0,3 V đến -0,4V giá trị cường độ dòng cao và ổn định. Chúng tôi chọn thế hấp phụ -0,4 V cho các nghiên cứu tiếp theo.
-500m -600m -700m -800m -900m U (V) -100n -80.0n -60.0n -40.0n -20.0n 0 I (A )
Hình 3.68: Đường DP-AdSV của