Sau khi ựã xác ựịnh ựược trình tự nucleotide ựoạn gen dài 600bp của virus LMLM và nhờ sử dụng phần mềm Clustal W ựã tiến hành xây dựng ựược cây phát sinh chủng loại của 05 chủng virus LMLM phân lập trên ựàn lợn nuôi ở tỉnh Thái Bình. Xây dựng cây phát sinh chủng loại ựể xác ựịnh nguồn gốc phát sinh của các chủng virus gây bệnh LMLM tại Việt Nam.
Kết quả ựược thể hiện qua hình 3.7: HQ832592(India)
HQ832590(India) HQ632773(United Kingdom) HQ632774(United Kingdom) HQ832586(India) HQ832585(India) HQ632770(United Kingdom) FMD-pg1 (Vietnam) D-pg2 (Vietnam) FMD-pg3 (Vietnam) FMD-pg4 (Vietnam) FMD-pg5 (Vietnam) F M GU582121-O(Vietnam) GU582119-O(Vietnam) HQ260714-O(Vietnam) 85 100 100 70 66 60 23 22 93
Hình 3.7: cây phát sinh chủng loại của 05 chủng virus LMLM phân lập ựược trên ựàn lợn ở tỉnh Thái Bình
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 55 Hình 3.7 cho thấy 05 chủng virus nghiên cứu có quan hệ gần gũi với nhau và cùng một nguồn gốc phát sinh. điều này ựúng với kết quả giải trình tự (mức ựộ tương ựồng giữa 05 chủng ở mức rất cao).
Từ cây sinh học này chúng ta cũng nhận thấy 03 chủng virus LMLM cũng thuộc type O phân lập tại Việt Nam trước ựây: GU 582121_O (Vietnam), GU 582119_O (Vietnam), HQ 26714_O (Vietnam) thuộc một nhánh phát sinh khác. Vì vậy mức ựộ tương ựồng giữa 05 chủng virus LMLM nghiên cứu và 3 chủng virus LMLM trước ựây là không caọ Chúng tôi nhận thấy rằng ựã có những sai khác ựáng kể trong trình tự nucleotide giữa chúng. điều ựó cho thấy các phương pháp kiểm soát dịch bệnh LMLM cần phải thay ựổị
Một số chủng virus LMLM phân lập tại Ấn độ như: HQ 832592, HQ 832590, HQ 832586, HQ 832585, phân lập tại Vương Quốc Anh như: HQ 632770, HQ 632773, HQ 632774 thuộc các nhánh phát sinh khác với 05 chủng virus nghiên cứụ điều ựó cho thấy mức ựộ tương ựồng giữa 05 chủng virus nghiên cứu và các chủng virus LMLM phân lập tại Ấn độ, Vương Quốc Anh là không caọ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 56
KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ
KẾT LUẬN
1. đã chẩn ựoán ựược lợn mắc bệnh LMLM bằng phương pháp RT-PCR.
2. đã phân lập ựược virus gây bệnh LMLM trên môi trường tế bào
BKH21 ựể tạo ra lượng virus phục vụ cho các nghiên cứu khác.
3. Các chủng virus phân lập ựược trên lợn mắc bệnh ở tỉnh Thái Bình
ựầu năm 2012 ựều thuộc type Ọ
4. Giải trình tự ựược ựoạn gen VP1 của virus LMLM. Mức ựộ tương
ựồng giữa 05 chủng virus nghiên cứu rất cao từ 99,7% ựến 100%. 05 chủng virus nghiên cứu có cùng nguồn gốc phát sinh với nhau nhưng lại thuộc nhánh phát sinh khác với các chủng virus gây bệnh LMLM ở nước ta trước ựâỵ
KIẾN NGHỊ
1. Tiếp tục giải trình tự các ựoạn gen còn lại của virus gây bệnh LMLM
tiến tới giải trình tự toàn bộ bộ gen của virus.
2. Tiếp tục nghiên cứu ựề tài trên qui mô lớn hơn ựể có bức tranh toàn
cảnh về dịch tễ học phân tử bệnh LMLM ở nước tạ
3. Nghiên cứu ựầy ựủ ựặc tắnh sinh học của virus LMLM ựể ựưa ra chủng chế vacxin phòng bệnh nhằm giảm thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôị
4. Khuyến nghị cơ quan quản lý nhà nước về Thú y xác ựịnh chọn loại
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 57
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT.
Bùi Quang Anh và Hoàng Văn Năm (2001), Tình hình bệnh Lở mồm long
móng tại đông Nam Á và thế giới năm 2000, Tạp chắ KHKT Thú y,
tập VIII số 3, Hội Thú y Việt Nam, tr.90-93.
Bộ Nông Nghiệp và Phát triển Nông thôn (2010), Chương trình quốc gia
khống chế và thanh toán bệnh Lở mồm long móng giai ựoạn 2011 Ờ 2015, 12/2010.
Cục Thú y (2003), Sổ tay phòng chống bệnh Lở mồm long móng ở gia súc,
NXB Nông nghiệp.
Nguyễn Tiến Dũng (2000), Bệnh lở mồm long móng (Bài tổng hợp), Tạp
chắ Khoa Học Kỹ Thuật Thú Y, tập VII Số 3, Tr. 8-16.
Nguyễn Bá Hiên, Trần Lan Hương (2009), Miễn dịch học Thú y, NXB
Nông nghiệp.
Kiều Mạnh Hùng (2012), Nghiên cứu chế tạo bộ kit RT-PCR ựể chuẩn
ựoán virus lở mồm long móng (LMLM) ựại diện ựang lưu hành ở Việt Nam, luận văn thạc sỹ công nghệ nano sinh học.
Nguyễn Viết Không, Tạ Hoàng Long, Nguyễn Văn Hưng, Trịnh Quang
đại, Trương Anh đức, Nguyễn Thị Hồng Thắm (2011), giám sát
phân tử và nguyên nhân diễn biến phức tạp của dịch LMLM, Tạp chắ KHKT Thú y, T.18, S.5.
Văn đăng Kỳ (2002), Nghiên cứu dịch tễ học bệnh lở mồm long móng ở
lợn tại Việt Nam và biện pháp phòng chống, Luận án tiến sĩ KHNN
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 58
Văn đăng Kỳ và Nguyễn Văn Thông (2001), Một số kết quả trong phòng
chống bệnh Lở mồm long móng tại các khu vực trên thế giới, Tạp chắ KHKT Thú y, tập III, số 3, Hội Thú y Việt Nam, tr.83-88.
Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2010), Bài giảng bệnh truyền nhiễm thú y, Bộ môn VSV-Truyền nhiễm, khoa Thú ỵ
Phan Quang Minh (2003), Tình hình tổng quát bệnh Lở mồm long móng
trên thế giới năm 2002, Tạp chắ KHKT Thú y, tập X, số 3, 2003; Hội Thú y Việt Nam, tr.89-91.
OIE (2002), Kế hoạch khống chế, thanh toán bệnh Lở mồm long móng
trong khu vực đông Nam Á, Tạp chắ KHKT Thú y, tập VII, Hội Thú
y Việt Nam, tr.67-73.
Lê Văn Phan (2004), Tô Long Thành, Trần Thị Thu Hà, Trương Văn Dung,
đinh Duy Kháng và Dương Hồng Quân, Tách dòng và giải trình
ựoạn gen mã hóa cho serotype O virus Lở mồm long móng phân lập
tại tỉnh Quảng Trị, Báo cáo khoa học Chăn nuôi thú y, NXB Nông
nghiêp, Hà Nội, tr.222-228.
Nguyễn Vĩnh Phước (1978), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, NXB
Nông nghiệp, Hà Nội, tr.185-203.
Nguyễn Quang Thạch (2005), Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp,
Nhà xuất bản Nông Nghiệp, Hà Nội, Tr. 16-52.
Nguyễn Như Thanh (1974), Giáo trình thực tập vi sinh vật Thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nộị
Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2001), Giáo
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 59
Tô Long Thành (2000), Những tiến bộ trong sản xuất vacxin Lở mồm long
móng, Tạp chắ KHKT Thú y, tập VII, số 3, Hội Thú y Việt Nam, tr.22-25.
Tô Long Thành, Bùi Quang Anh, Hoàng Văn Năm, đồng Mạnh Hòa, Ngô
Thanh Long và Nguyễn Thu Hà (2006), Kết quả chẩn ựoán bệnh,
giám sát sự lưu hành của virus và lựa chọn vacxin phòng chống
bệnh LMLM của Cục Thú y(1985 Ờ 2006),Tạp chắ KHKT Thú y, tập
VIII, số 3, Hội Thú y Việt Nam, tr.70-74.
TÀI LIỆU TIẾNG ANH.
Alexandersen S., Zhang Z., Donaldson Ạ Ị, and Ạ J. M. G (2002), The pathogenesis and diagnosis of foot-and-mouth disease, Journal of Comparative Pathology 129: 1-36.
Barton D. J., OỖDonnell B. J., and Flanegan J. B. (2001), 5_ cloverleaf in
poliovirus RNA is a cis-acting replication element required for negativestrand synthesis, EMBO J. 20:1439-1448.
Belsham G.J (2001), Distinctive feature of foot-and-mouth disease virus, a
member of the picornavirus family; aspects of virus protein synthesis, protein processing and structure, Progress in Biophysic and Molecular Biology, 60, 241-260.
Carrillo C., Tulman ẸR., Delhon G., Lu Z., Carreno Ạ, Vagnozzi Ạ,
Kutish G.F., Rock D.L (2001), Comparative genomics of foot-and-
mouth disease virus, J. Virol. 79, 6487-6504.
Chatarjee NK, Bachrach HL, Polatnick J (1976), Foot-and-mouth disease
RNAs presence of 3'polyadenylic acid and absence of amino acid binding ability, Virol., 69: 369.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 60 Chinsangaram J., Koster M., and Grubman M. J (2001), Inhibition of L-
deleted foot-and-mouth disease virus replication by alpha/beta interferon involves double-stranded RND-dependent protein kinase, J Virol 75, 5498-5503.
Fogeby E (1963), Review of epizootiology and control of foot-and-mouth disease in Europe, 1937-1961. Eur. Comm. Control of FMD, FAO, Romẹ
Forss S, Strebel K, Beck Ẹ and Schaller H (1984), Nucleotide sequence and genome organization of foot-and-mouth diseaw virus, Nucleic Acids Research. Volume 12 Number 16 1984.
Gleeson L.J. (2002), A review of the status of foot-and-moụt disease in South-East Asia and approaches to control and eradication, Rev. scị tech. Off. Int. Epiz 21, 465-475.
Harris T. J., and F. Brown (1977), Biochemical analysis of a virulent and
an avirulent strain of foot-and-mouth disease virus, J. Gen. Virol. 34:87-105.
Hoffmann B., Beer M., Reid S.M., Mertens P., Oura C.Ạ, Van Rijn P.Ạ, Slomka M.J., Banks J., Brown ỊH., Alexander D.J. and King D.P
(2009), A review of RT-PCR technologies used in veterinary virology
and disease control: sensitive and specific diagnosis of five livestock diseases notifiable to the World Organisation for Animal Health, Vet Microbiol 139, 1-23.
Hyattsville M.D (1991), Foot and mouth disease Emergency Disease
Guideline, Animals and Plant Health Inspection Sevice United States Department of Agricultulrẹ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 61 Knowles N.J., Samuel ẠR., Davies P.R., Kitching R.P., Venkataramanan R., Kanno T., Scherbakov ẠV., Pacheco J.M., Mason P.W (2000),
Emergence of a pandemic strain of foot-and-mouth disease virus serotype Ọ In Session of the research group of the standing technical committee of the European Commission for the control of foot-and- mouth disease (Borovrts, Bulgaria, Rome, FAO), pp. 20-31.
Knowles N.J., Davies P.R., Henry T., OỖDonnell V., Pacheco J.M., Mason
P.W (2001), Emergence in Asia of foot-and-mouth disease viruses
with altered host range: characterisation of alteration in the 3A protein, J. Virol. 75, 1551-1556, 2001ạ
Le Van Phan, Kwang-Nyeong Lee, Tung Nguyen, Su-Mi Kim, In-Soo Cho, Dong Van Quyen, Dinh Duy Khang, Jong-Hyeon Park (2011),
Development of one-step multiplex RT-PCR method for simultaneous detection and differentiation of foot-and-mouth disease virus serotypes O, A, and Asia 1 circulating in Vietnam, Journal of Virological Methods.
Loma Kina N.F., Fallacara F, Pacciarini M., Amadori M. Lomakin Ạ Ị Ạ, Timina M., Shcherbakovaand L.Ọ Drygin V.V (2004),
Application of universal primers for identification of foot and mouth disease virus by PCR and PCR-ELISA, Archạ Virol, 149. 1155-1170.
Mason PW, Grubman MJ, Baxt B (2003), Molecular basis of pathogenesis
of FMDV, Virus Res. doi: 10.1016/S0168-1702(02)00257-5.
Ndiritu C. G., Ouldridge Ẹ J., Head M., and Rweyemamu M. M (1983), A
serological evaluation of 1972-1982 Kenyan foot-and-mouth disease type SAT 2 viruses, J. Hyg. (Lond) 91, page 335-341.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 62
Nunez J.Ị, Blanco Ẹ, Hernandez T., Popazo J., and Sobrino F (1998), RT-
PCR in foot and mouth disease diagnosis, Vet.Q.20 suppl 2.
Oudridge ẸJ (1987), Epidemiology of Foot and mouth disease in South East Asia, Foot and mouth disease bulletin, 25(4), page 1-3.
Racaniello V.R. (2001), Picornaviridae: the viruses and their replication, Virology, Raven Lippincott Wilkins & Wilkins, pp. 685-722.
Reid S.M., Ferris N.P., Hutchings G.H., Samuel ẠR., and Knowles N.J
(2000), Primary diagnosis of foot-and-mouth disease by reverse
transcription polymerase chain reaction, J.Virol.Methods, 89, 167-176.
Rueckert RR, Wimmer E (1985), Systematic nomenclature of picorna viral
proteins,J. Virol., 50: 957-959.
Sangar D. V., D. J. Rowlands, T. J. Harris, and F. Brown (1977), Protein
covalently linked to foot-and-mouth disease virus RNA, Nature 268:648-650.
Saravanan T, Ashok Kumar C, Ređy G. R, Dechamma H. J, Nagarajan G, Ravikumar P, Srinivas G and Suryanarayana V. V. S (2011),
Construction of genome-length cDNA for foot-andmouth disease virus serotype Asia 1 IND 63/72 vaccine strain, International Journal for Biotechnology and Molecular Biology Research Vol. 2(2), pp. 39-45, February 2011.
Saunders K, King AM, McCahon D, Newman JW, Slade WR, Forss S
(1985), Recombination and oligonucleotide analysis of guanidine
resistant foot-and-mouth disease virus mutants, J. Virol. 56: 921-929.
www.oiẹint: Guidelines for Animal Disease Control, foot and mouth
disease, reference reagents, the impact of foot and mouth disease, review report