đây là phương pháp kiểm tra kết quả phản ứng RT-PCR, tiến hành ựiện di trên gel agarose 1,2% có dùng chất nhuộm là Ethidium Bromidẹ Sau ựây là các bước thực hiện:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 38 Dung dịch ựệm thường sử dụng trong ựiện di agarose và polyacrylamid là TBE (Tris Boric acid_EDTA) và TAE (Tris Acetic acid_EDTA), trong nghiên cứu này sử dụng TBE và agarose ựể tạo bản gel. Bản gel ựược chuẩn bị bằng dung dịch ựệm TBE 1x hòa tan với 1,2 gam agarose ựặt trong lò vi sóng ở 1000C trong 5 phút, ựổ vào khuôn có các lược ựược cài sẵn ựể tạo bản gel với các giếng kiểm tra mẫu cần ựiện dị Khi bản gel ựã ựông cứng, ựặt bản gel vào bể ựiện di và ựổ dung dịch ựệm TBE ngập bản gel khoảng 3-5mm.
Bước 2: tra mẫu ựiện di
Thêm 2 ộl loading dye vào 8 ộl sản phẩm RT-PCR, trộn ựều hỗn dịch bằng pipet và chuyển vào các giếng trong bản thạch. điện di ựồng thời cả thang chuẩn DNA thường sử dụng từ 4-6 ộl DNA marker.
Bước 3: chạy ựiện di
Nguồn ựiện trong ựiện di thường sử dụng ở hiệu ựiện thế 100V cường ựộ 100mA, thời gian chạy ựiện di trong 30 phút.
Bước 4: nhuộm bản gel và ựọc kết quả
Kết thúc ựiện di bản gel ựược lấy ra nhuôm Ethydium bromide hoặc SYBR green trong khoảng từ 5-7 phút. Sau khi nhuộm bản gel ựược chuyển vào máy phát tia UV ựể quan sát kết quả ựiện dị Vị trắ các ựoạn DNA ựược phát hiện bằng các vệt sáng tương ứng của thuốc nhuộm, chụp ảnh và lưu kết quả.