Từ các mẫu bệnh phẩm thu thập ựược, chọn ra các mẫu tiêu biểu của từng con ựể tiến hành tách chiết RNA của virus theo Kit QIAgen (ựã trình bày trong phần phương pháp nghiên cứu), các bước thực hiện ựúng theo hướng dẫn của Kit. RNA sau khi tách chiết ựược tiến hành làm phản ứng RT-PCR ựể chẩn ựoán sự có mặt của virus LMLM bằng việc sử dụng cặp mồi ựặc hiệụ Sau khi thực hiện 35 chu kỳ của phản ứng, sản phẩm khuếch ựại sẽ ựược ựiện di và chụp ảnh. Kết quả của phản ứng RT- PCR xác ựịnh sự có mặt của virus LMLM ựược trình bày ở hình 3.1 và bảng 3.2:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 44
Ghi chú: virus LMLM ựược phát hiện bằng phản ứng RT-PCR với ựộ dài của gen phát hiện là 658bp, thang chuẩn DNA M 100bp. Giếng từ 1-10 là mẫu theo thứ tự bảng 4.2, giếng 11 là ựối chứng dương, giếng 12 là ựối chứng âm.
Bảng 3.2. Kết quả phản ứng RT-PCR
STT Lợn Cơ quan lấy mẫu Kết quả RT-PCR
1 Dịch mụn nước +
2
L1
Da nơi có mụn nước +
3 Biểu mô lưỡi +
4
L2
Da nơi có mụn nước +
5 Biểu mô lưỡi +
6 L3 Mụn nước + 7 Mụn nước + 8 L4 Da nơi có mụn nước + 9 Dịch kẽ móng + 10 L5
Biểu mô lưỡi +
11 đối chứng dương RNA virus LMLM +
12 đối chứng âm Nước khử ion -
Từ hình 3.1 cho thấy 10 mẫu bệnh phẩm của 05 lợn ựều cho kết quả dương tắnh với virus LMLM bằng phản ứng RT-PCR.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 45 Sản phẩm ựiện di cho vạch DNA tương ứng với 658bp theo ựúng thiết kế mồị 05 lợn ựều có triệu chứng ựặc trưng của bệnh LMLM là xuất hiện mụn nước ở miệng, vành móng, vùng da mỏng....
Như vậy, trong quá trình thu thập bệnh phẩm ựể tiến hành xét nghiệm bệnh LMLM thì có thể lấy bệnh phẩm là biểu mô lưỡi, biểu mô mụn nước, vùng da ở chân nơi có xuất hiện mụn nước....
Phản ứng RT-PCR là phản ứng có ựộ nhạy cao và có thể sử dụng ựể chẩn ựoán bệnh LMLM trong ựiều kiện Phòng thắ nghiệm trọng ựiểm Công nghệ sinh học Thú Ỵ
