1.2.2 .Đặc điểm cận lâm sàng
1.3. Cơ chế bê ̣nh sinh bê ̣nh viêm loét đại trực tràng chảy máu
1.3.4. Nguyên lý phản ứng phát hiện cytokin bằng phản ứng miễn dịch
huỳnh quang
Cytokin được phát hiện bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang kiểu sandwich trên bề mặt của các vi hạt từ. Bề mặt của vi hạt được gắn sẵn các phân tử kháng thể đơn clôn đặc hiệu với một quyết định kháng nguyên trên phân tử cytokin. Khi ủ mẫu xét nghiệm với hạt phủ kháng thể, các phân tử cytokin sẽ bị kháng thể đặc hiệu bắt giữ và bám vào bề mặt hạt. Sau đó kháng thể đơn clơn thứ hai đặc hiệu với một quyết định kháng nguyên khác của cytokin đã gắn biotin được thêm vào, tạo thành phức hợp miễn dịch gồm phân tử cytokin kẹp giữa hai kháng thể đơn clôn. Cuối cùng phức hợp streptavidin- PE được thêm vào sẽ gắn vào kháng thể đơn clôn thứ hai qua tương tác streptavidin-biotin. Dưới tác động của tia laser bước sóng tử ngoại PE sẽ phát ra ánh sáng huỳnh quang chứng tỏ sự có mặt của cytokin trong mẫu xét nghiệm. Lượng PE gắn vào tỷ lệ thuận với lượng kháng thể thứ hai hay lượng cytokin có trên bề mặt hạt từ. Dựa vào mật độ huỳnh quang phát ra từ các hạt được ủ với những nồng độ cytokin đã biết cho phép định lượng được cytokin.
Kỹ thuật hấp phụ miễn dịch vi hạt huỳnh quang (Fluorescence covalent microbead immunosorbent assay-FCMIA) là kỹ thuật sử dụng các hạt từ huỳnh quang có kích thước bằng nhau (tương tự như tế bào) nhưng phát ra tín hiệu huỳnh quang khác nhau làm giá đỡ để gắn các phân tử sinh học như kháng thể đặc hiệu lên bề mặt. Các hạt này được phân tích bằng phương pháp đếm tế bào/hạt theo dòng chảy (flowcytometry) với hai nguồn lase và detector
khác nhau để kích thích và nhận hai loại tín hiệu huỳnh quang độc lập do hạt từ huỳnh quang phát ra (tín hiệu định tính) và từ phản ứng đặc hiệu trên bề mặt hạt từ phát ra (tín hiệu định lượng). Nhờ phần mềm máy tính có khả năng phân biệt được nhiều loại hạt từ huỳnh quang khác nhau cho phép gắn mỗi loại hạt với một kháng thể đặc hiệu khác nhau rồi trộn lại để phát hiện đồng thời nhiều kháng nguyên khác nhau trong cùng một mẫu xét nghiệm.