II. Tổng quan về vi tảo lục H.pluvialis
5. Nuụi trồng H.pluvialis những cơ hội và thỏch thức
2.1. VẬT LIỆU, HểA CHẤT VÀ THIẾT BỊ
– Vi
Haematoccus pluvialisFlotow chủng HB phõn lập tại Hoà Bỡnh ệt Nam,
năm 2009 được nuụi cấy và lưu giữ trờn mụi trường C và RM tại phũng Cụng nghệ Tảo, Viện Cụng nghệ sinh học ở 25P
0 P
C, cường độ chiếu sỏng 2000 lux với chu kỳ sỏng: tối là 12: 12 giờ. Hỡnh ảnh minh họa hỡnh thỏi tế bào vi tảo lục H. pluvialis ở trạng thỏi sinh dưỡng và nang bào được chỉ ra trờn hỡnh 11.
Hỡnh 11. Mẫu Haematococcus pluvialis phõn lập ở Hũa Bỡnh, trạng thỏi sinh dưỡng và encyst (A), trạng thỏi cyst (B)
2.1.2. Thành phần cỏc mụi trường sử dụng cho chủng giống
Mụi trường được sử dụng trong toàn bộ quỏ trỡnh nghiờn cứu là hai mụi trường C và RM. Thành phần mụi trường C và RM được chỉ ra ở bảng 3. (Kaewpintong, 2004)
Bảng 3. Thành phần mụi trường C và RM dựng trong nghiờn cứu
Thành phần mụi trường
(mg/L) Mụi trường RM Mụi trường C
Tris base 500
KNOR3 100
Ca(NOR3R)R2 150
Viện CNSH & Thực phẩm 32 Luận văn thạc sỹ khoa học NaR2Rglycerolphosphate 50 NaNOR3 300 KR2RHPOR4 80 KHR2POR R4 20 MgSOR4.7 HR R2RO 10 40 NaR2 REDTA 3 MnClR2R.4HR2RO 0,108 CaClR2R. 2HR2RO 58,5 EDTA 7,5 NaCl 20 HR3RBOR3 0,3 MnSOR4.HR R2O R 1,5 ZnSOR4R.7HR2RO 0,1 0,022 NaR2RMoOR4R.2HR2RO 0,0075 CoClR2R.6HR2RO 0,012 (NH4R)RR6RMoR7ROR24R.4HR2RO 0,3 CuSOR4R.5 HR2RO 0,08 Co(NOR3R)R2R.6 HR2RO 0,26 FeClR3R.6 HR2RO 17 0,588 Vitamin B12 0,0001 Vitamin B1 0,01 Vitamin H 0,0001
Cỏch pha cỏc mụi trường như sau:
Để trỏnh gõy tủa cỏc thành phần cú trong mụi trường cần pha phải tiến hành cõn cỏc húa chất và hũa tan vào cốc pha mụi trường cú chứa nước cất theo đỳng thứ tự húa chất đó được liệt kờ tương ứng trong từng mụi trường ở bảng 3. Chỳng tụi chỉ xin trỡnh bày chi tiết cỏch pha 2 mụi trường C và RM như sau:
Pha mụi trường C: Cõn lần lượt từng húa chất theo thứ tự từ trờn xuống dưới như
được chỉ ra trong bảng 3, hũa tan trong nước cất. Sau đú định mức lại đỳng thể tớch cần pha. Mụi trường sau khi định mức được điều chỉnh pH bằng mỏy đo pH sao cho đạt pH 7,5. Húa chất điều chỉnh pH là NaOH hoặc HCl. Tiếp đến là phõn chia vào cỏc bỡnh đựng để khử trựng ở 121P
o P
C trong 30 phỳt.
Cỏc vitamin và vi lượng PIV được bổ sung sau khi khử trựng xong ở trong box cấy vụ trựng.
Viện CNSH & Thực phẩm 33 Luận văn thạc sỹ khoa học
Yờu cầu mụi trường sau khi pha xong: / Dịch mụi trường là trong suốt, khụng bị -
đục trong suốt thời gian sử dụng và bảo quản; / Tảo sinh trưởng bỡnh thường.-
Pha mụi trường RM: Mụi trường RM được phõn chia thành hai dung dịch A và B
được pha trong nước cất 1 lần. Dung dịch A gồm 2 húa chất: NaNOR3R và K2R RHPO4RR.
Dung dịch B gồm cỏc húa chất cũn lại (phương phỏp này sẽ trỏnh được mụi trường bị kết tủa sau khi pha). Sau khi pha xong 2 dung dịch sẽ được phõn chia vào bỡnh thủy tinh hoặc bỡnh tam giỏc riờng biệt để khử trựng ở 121P
o P
C trong 30 phỳt. Sau khi
khử trựng xong mụi trường sẽ được hũa trộn 2 dung dịch A và B với nhau ở trong box cấy vụ trựng theo tỷ lệ 1:1.
Yờu cầu mụi trường sau khi pha xong: / Khụng bị đục sau khi trộn lẫn dung dịch A -
với B trong suốt thời gian sử dụng và bảo quản mụi trường; / Tảo sinh trưởng và -
phỏt triển bỡnh thường.
2.1.3. Húa chất và thiết bị
* Húa chất
-Cỏc húa chất dựng để pha mụi trường nuụi tảo: C, RM đều do Trung Quốc và Việt Nam sản xuất, cỏc vitamin BR12R, H, B1R R(Việt Nam)…
- Cỏc húa chất sử dụng cho tỏch chiết protein và sắc tố: cỏc húa chất để pha dung dịch A, dung dịch B cho xỏc định hàm lượng protein; NaCl 1M; NaCl 0,01M; acetone; thuốc thử Folin đều do Việt Nam và Trung Quốc sản xuất…
Húa chất dựng để tỏch chiết và xỏc định sắc tố và protein: axeton 99%, NaCl
1M, NaR2RCO3RR, NaOH 0,1N, CuSO4R Rtrong dung dịch Natrikalitactrat, thuốc thử Folin, albumin chuẩn.
* Thiết bị:
Kớnh hiển vi quang học Olympus CX21 (Nhật Bản); buồng đếm tế bào
Burker-Turk (Đức); cõn kỹ thuật (Precisa XT2200A, Thụy Điển); cõn phõn tớch AY 120 (Shimadzu, Nhật Bản); mỏy li tõm Sorvall RT 1900 W (Kendo, Đức), mỏy khử trựng (Nhật Bản); mỏy ảnh kỹ thuật số Canon IXY Digital 70 (Nhật Bản); mỏy đo OD UV 1601 (Nhật Bản); mỏy đo pH Melter Toledo (Đức); pipette Pasteur (Việt Nam); Kớnh hiển vi quang học Olympus CX21 (Japan); tủ sấy Gallenkamp (USA);
Viện CNSH & Thực phẩm 34 Luận văn thạc sỹ khoa học
mỏy đo cường độ ỏnh sỏng (Lux meter, Nga); đốn sợi đốt cú cụng suất 1000 W; mỏy nộn khớ, cỏc loại cột lọc khớ, màng lọc khớ Satarious (Mỹ); cỏc loại bỡnh tam giỏc từ loại 50 ml, 100ml, 250 ml, 500 ml,…đều được sử dụng cho nuụi tảo (Trung Quốc); bỡnh nhựa loại 1,5 lớt và 10 lớt (Sụng Long Việt Nam); ống đong cỏc loại; -
cối chày sứ; giấy lọc GF/C (What man); thiết bị lọc tảo… và cỏc dụng cụ thụng -
thường của phũng thớ nghiệm.