II. Tổng quan về vi tảo lục H.pluvialis
5. Nuụi trồng H.pluvialis những cơ hội và thỏch thức
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.2.7. Phương phỏp xỏc định hàm lượng protein của tế bào vi tảo H.pluvialis
Định lượng protiein của tảo theo phương phỏp Lowry (Lowry và cs., 1951).
- Tỏch chiết protein
Lọc 10 ml dịch tảo bằng giấy lọc GF/C, cho vào lọ penicilin, cất trong ngăn đỏ tủ lạnh. Dựng panh gắp giấy lọc cú sinh khối tảo vào cối sứ đặt trong hộp đỏ, thờm cỏt thuỷ tinh, nghiền bằng chày cho đến khi sinh khối thấy mịn, thờm 1ml dung dịch NaCl 1M, nghiền tiếp, chuyển vào lọ penicilin.
Trỏng chày cối bằng 3ml dung dịch NaCl 1M, chia làm 3 lần đến khi dịch
trỏng khụng cũn màu xanh để thu sinh khối 1 cỏch tối đa.
Ủ trong lạnh 2giờ, ly tõm 12000 vũng/5 phỳt, thu lấy phần dịch trờn cho sang lọ penicilin khỏc.
Thờm 2V acetone, ủ lạnh qua đờm, ly tõm 12000 rpm/10 phỳt, thu tủa, làm khụ tủa trong 10 phỳt, hoà tan tủa trong 100 μl dung dịch NaCl 0,01M. Ly tõm 10000 rpm trong 20 phỳt, thu lấy phần dịch trong phớa trờn để tiến hành làm phản ứng Lowry
Viện CNSH & Thực phẩm 41 Luận văn thạc sỹ khoa học - Phản ứng Lowry
Dung dịch A: 2% NaR2RCO3 R Rhũa tan trong NaOH 0,1N
Dung dịch B: 0,5% CuSOR4Rtrong dung dịch 1% Natrikalitactrat
Dung dịch C: 49A: 1B Thuốc thử Folin Tiến hành:
Hỳt 300 àl dung dịch C cho vào ống mẫu;
Thờm 30 μl mẫu tỏch protein, lắc đều, để trong 10 phỳt;
Thờm 15 àl thuốc thử Folin, lắc đều, để trong 30 phỳt, thờm 1655 μl nước cất Đo OD ở bước súng 720 nm.
Viện CNSH & Thực phẩm 42 Luận văn thạc sỹ khoa học - Xõy dựng đường chuẩn: Tiến hành với 9 nồng độ protein chuẩn (albumin) từ 5–
100 àg, blank là mẫu 0 àg và kết quả đo được với protein chuẩn ở cỏc nồng độ khỏc nhau (bảng 4; hỡnh 14).
Bảng 4. Kết quả đo OD trong phương phỏp xõy dựng đường chuẩn protein STT Hàm luợng protein (àg) V dd C (àl) V Folin (àl) V HR2RO(àl) ODR720 0 300 15 1685 0,000 1 5 300 15 1680 0,006 2 10 300 15 1675 0,013 3 20 300 15 1665 0,026 4 30 300 15 1655 0,041 5 40 300 15 1645 0,045 6 50 300 15 1635 0,064 7 60 300 15 1625 0,088 8 80 300 15 1605 0,097 9 100 300 15 1585 0,111
Viện CNSH & Thực phẩm 43 Luận văn thạc sỹ khoa học y = 835.56x - 1.6958 r = 0.985 0 20 40 60 80 100 120 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 OD 720 H am lu on g Pr (à g)
Hỡnh 14. Đường chuẩn protein được xỏc lập giữa hàm lượng protein (àg) theo giỏ trị OD ở bước súng 720nm
- Từ kết quả thu được nờu trờn, chỳng tụi đó xõy dựng được đường chuẩn xỏc định
hàm lượng protein (àg) theo giỏ trị OD đo ở bước súng 720 nm với giỏ trị OD nằm trong khoảng [0; 0,110] theo phương trỡnh:
Y = 835,56 X – 1,6958
Trong đú, Y: hàm lượng protein (àg); X: giỏ trị ODR720R mẫu bằng dung dịch
ethanol 98% hoặc foocmon 4%.
- Cỏc số liệu được xử lý bằng phần mềm Excel và thống kờ ANOVA một thành
Viện CNSH & Thực phẩm 44 Luận văn thạc sỹ khoa học
CHƯƠNG III
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN