gmNAC
* Kết quả khảo sát sự có mặt tạm thời của gen chọn lọc hpt (kháng
Hình 4.7. Mức độ kháng hygromycin sau 12 giờ. Lá của cây đối chứng (không
chuyển gen) (1, 2). Lá của cây đã đợc chuyển gen hpt (3, 4).
Để khẳng định cho kết quả phân tích cây chuyển gen, đề tài đã tiến hành thí nghiệm đánh giá tính kháng hygromycin của mô lá các cây đậu tơng đã chuyển gen.
Trong môi trờng chứa hygromycin quan sát thấy lá của cây có mang gen hpt
vẫn giữ đợc màu sắc tự nhiên, trong khi đó lá của những cây đối chứng không chuyển gen vàng và chết dần. Từ đó cho thấy, đây là một phơng pháp chính xác, có thể kết hợp với phơng pháp sàng lọc bằng điều kiện khô hạn để đánh giá cây chuyển gen trớc khi tiến hành phân tích bằng PCR tránh tốn kém.
* Tách DNA tổng số đậu tơng chuyển gen
Sử dụng DNA đã đợc tách chiết từ lá đem điện di trên gel agarose 1% thu đợc băng điện di nh sau:
Từ kết quả điện di DNA tổng số, sau khi đợc xử lý với Rnase DNA đợc tinh sạch và còn nguyên vẹn đợc sử dụng để thực hiện các thí nghiệm tiếp theo.
Quy trình tách DNA đậu tơng có cải tiến là phù hợp và đợc chúng tôi sử dụng cho các phân tích tiếp theo.
* Kết quả phân tích các cây đậu tơng chuyển gen bằng kỹ thuật PCR
Để khẳng định sự có mặt của các gen chuyển nạp trong hệ gen của các cây đậu tơng tái sinh bằng kỹ thuật PCR, dề tài sử dụng cặp mồi đặc hiệu cho gen Hpt
(kháng hygromycin) nêu ở phần 3.
kết quả phân tích PCR với cặp mồi đặc hiệu của gen Hpt (kháng hygromycin) cho thấy, mẫu DNA từ lá 5 cây chuyển gen biểu hiện dơng tính, kết quả hoàn toàn phù hợp với kết quả thử nghiệm hygromycin ở trên.
514 bp M + - 1 2 3 4 5 M: Marker (+): Đối chứng dơng (-): H20 (âm tính) 1,2,3,4,5: ĐVN9 chuyển gen
Hình 4.9. ảnh điện di sản phẩm PCR với cặp mồi đặc hiệu cho gen Hpt
(kháng hygromycin)
Từ kết quả phân tích trên, có thể ứng dụng xây dựng vector mang gen đích và chuyển vào đậu tơng thông qua A.tumefaciens sử dụng phơng pháp gây tổn thơng nốt lá mầm của hạt, hứa hẹn những thành tựu mới trong tơng lai.
Phần 5
KếT LUậN Và Đề NGHị