tơng ĐVN9 thông qua tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus
Thời gian đồng nuôi cấy có ảnh hởng rất lớn đến kết quả của quá trình biến nạp và tăng cờng khả năng xâm nhiễm của vi khuẩn với tế bào thực vật. Trong quá trình chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium, đồng nuôi cấy là giai đoạn vi khuẩn thực hiện cơ chế chuyển đoạn T-DNA vào tế bào thực vật. Vì vậy mà hiệu quả chuyển gen phụ thuộc rất nhiều vào thời gian đồng nuôi cấy.
Trong thí nghiệm này để xác định ảnh hởng của thời gian đồng nuôi cấy tới tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus ở đậu tơng bố trí 6 công thức thí nghiệm sử dụng chủng vi khuẩn AGL-1 có OD600= 0,8 với thời gian đồng nuôi cấy lần lợt là: 0, 2, 3, 4, 5 và 7 ngày. Kết quả thí nghiệm đợc trình bày ở bảng 4.4.
Bảng 4.4. ảnh hởng của thời gian đồng nuôi cấy đến sự biểu hiện tạm thời của
gen gus
Công thức
Thời gian đồng nuôi cấy (ngày)
ĐVN9 Số mẫu nhuộm gus Số mẫu có đốm xanh Tần số biểu hiện gen tạm thời (%) 1 0 75 0 0 2 2 75 2 2,67 3 3 75 7 9,33 4 4 75 13 17,33 5 5 75 16 22,00 6 7 75 8 10,67
Kết quả thí nghiệm ở bảng 4.4 cho thấy: Có sự khác biệt lớn về tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus ở đậu tơng ĐVN9 giữa công thức đối chứng (0 ngày) với các công thức còn lại. ở công thức 2, tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus chỉ đạt 2,67% trong khi ở các công thức khác tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen gus dao động từ 9,33% đến 22%. Nếu thời gian đồng nuôi cấy ngắn sẽ không đảm bảo đợc hiệu quả cao khi biến nạp. Tuy nhiên, nếu thời gian đồng nuôi cấy quá dài sẽ làm tổn th- ơng mô thực vật, làm hạn chế khả năng sống và tái sinh của mô sau chuyển gen.Với mỗi đối tợng thực vật sẽ có một thời gian đồng nuôi cấy nhất định. Một số tác giả đã tiến hành đồng nuôi cấy trong điều kiện tối và thu đợc hiệu quả biến nạp cao hơn nhiều so với để bên ngoài ánh sáng (Olhoft P.M. và cs, (2003)[24].
Thêm vào đó, thời gian đồng nuôi cấy càng lâu thì càng gây ra tổn thơng cho mẫu đậu tơng và làm ảnh hởng tới khả năng phục hồi của đậu tơng sau này. Do đó, thời gian đồng nuôi cấy thích hợp nhất là 5 ngày, cho tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen GUS đạt 22%. Kết quả này cũng phù hợp với nghiên cứu của Trần thị cúc
0 ngày 2 ngày 3 ngày
4 ngày 5 ngày 7 ngày
Hình 4.4. ảnh hởng của thời gian đồng nuôi cấy lên biểu hiện tạm thời
của gengus trên ĐVN9