CHƯƠNG 2 : THỰC NGHIỆM
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp
xúc (CE - C4D)
Trong phương pháp điện di mao quản, detector đo độ dẫn là một trong những loại detector rất được chú ý, tuy có độ nhạy thấp hơn so với hai kĩ thuật điện hóa khác nhưng lại có ưu điểm là detector đa năng có thể dùng cho rất nhiều loại chất phân tích khác nhau. Detector này có thể thu nhỏ, thuận lợi khi kết hợp với các mao quản có đường kính hẹp, thậm chí với các microchip mà khơng ảnh hưởng đến độ nhạy và các tính chất khác của detector.
*Giới thiệu chung
Cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc (C4D) với thiết kế hai điện cực đồng trục xuất hiện lần đầu trên thế giới vào năm 1998. Dựa trên thiết kế này, năm 2002 nhóm nghiên cứu của GS Peter Hauser (khoa Hóa, trường đại học Basel, Thụy Sỹ) đã phát triển thành cơng dịng sản phẩm C4D với nguồn điện thế kích thích xoay chiều cao (HV-C4D, 200V). Hãng điện tử eDAQ của Úc sau đó đã phối hợp cùng nhóm nghiên cứu của GS. Peter Hauser để phát triển dòng sản phẩm C4D thương phẩm dựa trên nghiên cứu này.
* Nguyên lý hoạt động C4D
Nguyên lý hoạt động của C4D được minh họa trong hình 2.6
Hình 2.1. Nguyên lý hoạt động của cảm biến đo độ dẫn không tiếp xúc
Nguồn điện xoay chiều (V) với tần số (f) được áp vào điện cực thứ nhất. Tại điện cực thứ hai, tín hiệu đo được ở dạng cường độ dòng điện (I). Theo đó, dịng điện thu được tại điện cực thứ 2 sẽ phụ thuộc vào độ lớn của điện thế V và tần số f.
Tín hiệu đầu ra thu được ở dạng cường độ dịng điện (xoay chiều), sau đó sẽ được chuyển đổi và khuếch đại thành tín hiệu dạng vơn thế (xoay chiều), thơng qua việc sử dụng một điện trở khuếch đại (Rfeedback). Vôn thế xoay chiều sau đó được chuyển đổi thành vôn thế 1 chiều, lọc nhiễu và khuếch đại, sau cùng chuyển đổi thành tín hiệu số hóa trước khi được hiển thị và lưu trữ trên máy tính.
Như vậy, detector đo độ dẫn không tiếp xúc ngoài ưu điểm là phân tích đa năng cịn có ưu điểm là khơng nhất thiết phải có sự tiếp xúc trực tiếp của các điện cực với dung dịch đo nhờ lợi dụng tính chất kết nối tụ điện với dung dịch bên trong mao quản hoặc ống phản ứng. Đây là một cách rất thông minh loại trừ ảnh hưởng của điện thế cao trong quá trình phân tách điện di đến hệ điện tử của detector và không làm nhiễm bẩn dung dịch phân tích[29].
2.2.2. Phương pháp xử lý mẫu
2.2.2.1. Xử lý mẫu thuốc
*Mẫu chứa Salbutamol dạng viên: Lấy 10 viên thuốc cân, nghiền thành bột và trộn đều. Cân chính xác 5,0mg Salbutamol dạng bột vào bình định mức 10,0ml, thêm 5,0ml nước đề-ion, tiến hành siêu âm khoảng 10 phút sau đó định mức tới vạch bằng nước. Chuyển hỗn hợp mẫu thu được sau khi rung siêu âm vào ống ly tâm và tiến hành ly tâm (8000 rpm) trong 10 phút. Dung dịch thu được được lọc qua màng 2 µm và được pha với tỉ lệ thích hợp trước khi tiến hành bơm mẫu vào thiết bị CE [22].
*Mẫu chứa Salbutamol dạng xi-rơ: mẫu xi–rơ được được pha lỗng với tỉ lệ thích hợp bằng nước đề-ion trước khi bơm trực tiếp vào thiết bị CE [16].
*Mẫu chứa Metoprolol: Lấy khoảng 5 viên thuốc Plendil Plus, cạo sạch phần bao đường của từng viên. Sau đó nghiền nhỏ viên và trộn đều, được mẫu thử. Cân chính xác 5,0mg mẫu thử trên cân phân tích (độ chính xác 0,1mg), chuyển mẫu vào bình định mức dung tích 10,0 ml, thêm 5,0ml MeOH và siêu âm khoảng 10 phút sau đó định mức tới vạch bằng nước đề-ion. Chuyển hỗn hợp mẫu thu được vào ống ly tâm và tiến hành ly tâm (8000 rpm) trong 10 phút. Dung dịch thu được được lọc qua màng 2 µm và được pha với tỉ lệ thích hợp trước khi tiến hành bơm mẫu vào thiết bị CE [22].
2.2.2.2. Xử lý mẫu thức ăn chăn nuôi
Mẫu thức ăn chăn nuôi được nghiền thành bột, trộn đều. Cân chính xác 2,0 gam bột từ mỗi mẫu và chuyển bình có dung tích 10,0 ml. Thêm 8,0ml MeOH và 2,0ml H2O và tiến hành rung siêu âm trong khoảng 2 giờ. Sau đó dung dịch mẫu được lọc qua màng lọc 0,2 µm hai lần trước khi bơm mẫu vào thiết bị CE [14, 35].