- Độ chụm của thiết bị
3.4. Phân tích mẫu thực tế và đo đối chứng với phương pháp tiêu chuẩn HPLC
3.4.1.1. Mẫu thuốc xiro chứa Salbutamol
* Quy trình xử lý mẫu:
Lấy 15,0g Salbutamol dạng xi-rơ vào bình định mức 50,0ml. Thêm 30,0ml nước đề-ion và lắc cho dung dịch hòa tan hết, thêm nước đề-ion và lắc đều. Dung dịch thu được lọc qua màng lọc 0,2 µm và tiến hành chạy điện di theo các điều kiện phân tích tối ưu ở bảng 3.6.
Tiến hành phân tích hàm lượng Salbutamol có trong mẫu thuốc xi-rô bằng phương pháp thêm chuẩn Salbutamol ở các mức nồng độ khác nhau:
+ Mức 0: Không thêm chuẩn Salbutamol vào mẫu thử
+ Mức 1: Thêm 100µL dung dịch chuẩn Salbutamol 1000ppm vào 5,0 ml mẫu thử
+ Mức 2: Thêm 200µL dung dịch chuẩn Salbutamol 1000ppm vào 5,0 ml mẫu thử
+ Mức 3: Thêm 400µL dung dịch chuẩn Salbutamol 1000ppm vào 5,0 ml mẫu thử
Tiến hành phân tích điện di với các điều kiện như trong bảng 3.6, mỗi mẫu làm lặp lại 3 lần và lấy kết quả trung bình. Kết quả được xử lý bằng phần mềm Origin 6.0.
Giản đồ điện di thêm chuẩn Salbutamol vào mẫu thuốc dạng xi-rô thu được như trong hình 3.12 500 450 400 350 300 250 200
Thêi gian di chun (s) 20mV
Sal pÝc tá dược
Hình 3.12. Điện di đồ xác định Salbutamol dạng xi-ro sau khi thêm chuẩn Salbutamol ở các nồng độ khác nhau
Căn cứ vào diện tích pic thu được trên điện di đồ, dựa vào phương trình đường thêm chuẩn (hình 4.1-b ở phụ lục) sẽ tính được nồng độ Salbutamol có trong mẫu xi-rô. Kết quả thu được như trong bảng 3.19.
Bảng 3.19. Kết quả xác định nồng độ Salbutamol trong mẫu thuốc xi-rơ
Ngồi ra, để kiểm tra việc xác định đồng thời các chất phân tích trên nền mẫu thật (trong trường hợp thuốc sử dụng đồng thời các chất này và/hoặc bị lẫn tạp chất là các chất phân tích, nếu có), chúng tơi thêm chất chuẩn (SMR) của hai chất khác là Met và Rac vào nền mẫu xi-rô và xác định bằng phương pháp CE-C4D, kết quả thể hiện trong hình 3.13.
600 500 400 300 200 100
Thêi gian di chun (s) 50mV Xiro + 0ppm SMR Xiro+10ppm SMR píc tá dược Sal Sal Rac Met
Hình 3.13. Điện di đồ xác định đồng thời Sal, Met, Rac trong nền mẫu thuốc xi-rô
Như vậy, có thể thấy, hồn tồn có thể phân tích đồng thời cả 3 chất phân tích trên nền mẫu thuốc xi-rơ nếu trong thành phần thuốc có hàm lượng của hai chất cịn lại là Met và Rac.
CSal thêm chuẩn (ppm)
Mẫu thuốc xi-rơ
Spic trung bình (mV.s) Hàm lượng Sal trong 1g (mg) Hàm lượng Sal ghi trên nhãn trong 1g (mg) 20,0 44,9 0, 17 ± 0,33 0,20 40,0 59,8 80,0 81,9