CHƢƠNG III : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.2. TỶ LỆ DƢƠNG TÍNH EV71 CHẨN ĐỐN THEO PHƢƠNG PHÁP SINH
3.2.1. Tỷ lệ dƣơng tính EV71 chẩn đốn theo phƣơng pháp RT-PCR
Đoạn gen đích có kích thƣớc 376bp trong vùng gen VP1 của EV71đã đƣợc nhân dịng thành cơng bằng kỹ thuật RT-PCR sử dụng cặp mồi MAS01 và MAS2A [34]. Chứng dƣơng là chủng chuẩn nuôi cấy từ đại học Gothenburg -Thụy Điển và chứng âm là nƣớc từ kit thƣơng mại Qiagen quantitect probe RT-PCR. Kết quả điện di sản phẩm sau phản ứng RT-PCR đƣợc thể hiện ởHình 3.5 sau:
Trong đó: 1,2: Mẫu bệnh phẩm 3: Mẫu chứng âm 4: Mẫu chứng dƣơng
5: Thang chuẩn DNA 100bp
Trên Hình 3.5kết quả điện di sản phẩm RT-PCR chẩn đoán EV71 cùng với thang chẩn 100bp trên gel agarose 1,5% cho thấy: mẫu chứng dƣơng ở vị trí số 4 xuất hiện một băng duy nhất có kích thƣớc 376 bp, mẫu chứng âm ở vị trí số 3 khơng xuất hiện băng nào. Mẫu bệnh phẩm ở vị trí số 2 xuất hiện một băng duy nhất có cùng kích thƣớc với chứng dƣơng nên mẫu số 2 đƣợc xem là mẫu dƣơng tính với EV71. Ngƣợc lại ở vị trí mẫu số 1 khơng xuất hiện bất kỳ băng nào nên đƣợc xem là mẫu âm tính với EV71.
Ứng dụng phƣơng pháp RT-PCR EV71 chúng tơi tiến hành chẩn đốn trên 86 bệnh nhân và 100 bệnh phẩm đã dƣơng tính với EV. Kết quả chúng tôi thu đƣợc nhƣ sau:
8bệnh nhândƣơng tính với EV71chiếm 9,3%và 78 bệnh nhân âm tính chiếm 90,7%.13 bệnh phẩmdƣơng tính với EV71chiếm 12,7% và 69 bệnh phẩm âm tính với EV71chiếm 87,3%. Trong đó, 1 bệnh nhân có cả mẫu phân, dịch tỵ hầu và dịch nội khí quản, 4 bệnh nhân có mẫu dịch họng và phân cùng dƣơng tính với EV71, 4 bệnh nhân chỉ có dịch họng và 1 bệnh nhân chỉ có phân dƣơng tính với EV71. Kết quả đƣợc minh họa bằng Bảng 3.3 và Hình 3.6
Bảng 3.3: Tỷ lệ dƣơng tính EV71 chẩn đốn bằng phƣơng pháp RT-PCR
RT-PCR EV71 Dƣơng tính Âm tính
Bệnh nhân 8 (9,3%) 78 (90,7%)
Hình 3.6: Tỷ lệ dƣơng tính EV71 chẩn đốn bằng phƣơng pháp RT-PCR Chúng tôi so sánh kết quả của mình với kết quả của tác giả Piyada Linsuwanon và cộng sự trên 1182 bệnh nhân có tỷ lệ dƣơng tính với EV71 là 9,1% [35]. Nhƣ vậy, kết quả của chúng tơi có tỷ lệ dƣơng tính với EV71tƣơng đƣơng với tác giả.
Kết quả nghiên cứu của tác giả Tăng Chí Thƣợng trên 419 bệnh nhân có tỷ lệ dƣơng tính EV71 là 38,9% [4] và nghiên cứu của tác giả Phan Van Tu và cộng sự có tỷ lệ EV71 dƣơng tính trong nghiên cứu 764 bệnh nhân là 42,1%[36]. Nhƣ vậy, tỷ lệ dƣơng tính EV71 trong nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn so với hai tác giả này .