(ngày tuổi của khối cầu được thể hiện ở góc trái ảnh). Bar=200µm
Q trình tăng trưởng của khối spheroid diễn ra trong khoảng 28-30 ngày. Trong đó, từ ngày thứ 15-19, khối spheroid đạt thể tích cực đại. Từ ngày thứ 21 trở đi, kích thước khối bắt đầu giảm dần (Hình 15). Trong khoảng thời gian từ ngày thứ 3 đến ngày thứ 7, sự tăng trưởng kích thước khối spheroid diễn ra mạnh nhất với tốc độ tăng thể tích so với thời điểm trước (các thời điểm theo dõi cách nhau 48h) lên tới trên 240%. Trong giai đoạn tiếp theo từ ngày 7-21, thì quá trình tăng trưởng diễn ra chậm hơn nhưng tương đối ổn định, sự tăng trưởng duy trì ở mức 20±0,08%. Qua ngày 21, tăng trưởng bắt đầu có giá trị âm hay nói cách khác là thể tích khối spheroid bắt đầu suy giảm.
Hình thái cấu trúc khối spheroid cũng thay đổi rõ nét. Spheroid dòng MCF-7 ở những ngày đầu khá nhỏ, các tế bào liên kết thành một khối rất chắc chắn. Chúng có tốc độ tăng trưởng khá nhanh ở những ngày đầu (đặc biệt là từ ngày thứ 2 đến ngày thứ 5). Trong giai đoạn này, khối chỉ gồm các tế bào sống có khả năng tăng sinh mạnh mẽ, liên kết chặt chẽ, vành ngồi r nét. Sau đó là giai đoạn tăng trưởng ổn định (từ ngày 7-21), có sự phân vùng tế bào theo ba lớp rõ ràng. Ở giai đoạn này các spheroid cũng bắt đầu
hình thành các lõi hoại tử. Do ánh sáng khơng thể xuyên qua được khối nhân kết đặc của lõi hoại tử nên khi nhìn qua kính hiển vi quang học thơng thường thì sẽ thấy vùng lõi hoại tử này có màu đen. Cuối giai đoạn này, có hiện tượng các tế bào vùng lõi bị đẩy ra khỏi khối spheroid. Giai đoạn cuối (từ sau ngày 22), sự tách ra khỏi khối của các tế bào diễn ra mạnh mẽ hơn và cuối cùng dẫn đến sự vỡ khối (Hình 17).
3.2.2.2.Động học phát triển lõi hoại tử
Sự phân chia thành các lớp tế bào đóng vai trị hết sức quan trọng trong nghiên cứu điều trị ung thư. Các thuốc ức chế tăng sinh sẽ liên quan nhiều đến vịng ngồi của khối u. Sự kháng thuốc lại liên quan nhiều đến lớp trung gian. Vùng lõi hoại tử là vùng mà thiếu sự cung cấp oxy và máu nuôi dưỡng. Do vậy các tế bào thuộc ranh giới vùng lõi và vùng trung gian thường có khả năng di căn mạnh mẽ. Vùng lõi còn tiết ra các chất kích thích sự tăng sinh mạch máu cho khối u. Do đó những nghiên cứu về vùng lõi hoại tử rất đáng được quan tâm. Hơn nữa, đối với việc thử chế phẩm, thông thường thời điểm để thử thuốc là khi chưa hoặc bắt đầu xuất hiện lõi hoại tử vì như vậy mới có thể đánh giá chính xác hiệu lực của chất. Với những nhận định trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu động học lõi hoại tử của dòng tế bào MCF-7.
Lõi hoại tử với đa số là các tế bào chết do tình trạng thiếu dinh dưỡng và oxy ở phần trung tâm của khối spheroid . Chúng tôi nhận thấy vùng lõi hoại tử màu đen bắt đầu xuất hiện từ ngày thứ 6-8. Ban đầu chỉ là một vùng đậm hơn ở vùng giữa khối spheroid. Sau đó kích thước lõi hoại tử cũng tăng dần theo kích thước của spheroid. Đến ngày thứ 21-22 vùng l i đạt kích thước lớn nhất. Hình ảnh về spheroid cũng cho thấy đường viền của spheroid đã bị mờ đi trông thấy, hơn nữa đã bắt đầu thấy những tế bào nhỏ xung quanh khối spheroid. Đây là những biểu hiện của spheroid bước vào giai đoạn thoái lui sinh khối, spheroid bắt đầu yếu đi, sinh trưởng chậm, sau giai đoạn này sẽ có sự biến động mạnh cả về thể tích, hình dạng, đường kính,… Những ngày cuối của đợt thí nghiệm
đám đen mờ lan sang vùng trung gian. Đây có thể là những hạt nhân tương lai của vùng hoại tử mới. Điều này cũng đi cùng với sự suy giảm về thể tích khối spheroid. Sự xuất hiện của lõi hoại tử và kích thước của vùng này thể hiện đặc điểm sinh trưởng rất phù hợp với những biến động về thể tích, đường kính, sinh trưởng của spheroid.
Hình 16 biểu diễn hai đường đồ thị có sự tương đồng cao thể hiện mức độ tuyến tính cao giữa sự biến đổi kích thước chung của khối spheroid và kích thướccủa lõi hoại tử hay cũng có thể nói là sự phụ thuộc chặt chẽ giữa hai giá trị này.Với hệ số tương quan là R2 = 0,989 (hệ số này càng gần 1 thì mức độ phụ thuộc càng sâu sắc, hệ số lớn hơn 0.7 được coi là có phụ thuộc), ta xây dựng được phương trình đường hồi quy tuyến tính. Phương trình này cho phép dự đốn tình trạng, thể tích lõi hoại tử khi đã xác định được thể tích khối spheroid và ngược lại. Điều này cho phép giảm bớt thao tác trong nghiêm cứu mà vẫn thu được lượng thông tin và số liệu cần thiết.