CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Phương pháp chiết xuất
Phương pháp ngâm chiết: Ngâm ngập ngun liệu trong dung mơi ở nhiệt độ phịng, dịch chiết được lọc qua giấy lọc và cô quay chân không dưới áp suất thấp thu hồi cao chiết tổng.
Phương pháp chiết lỏng-lỏng: Sử dụng bình lóng để điều chế các loại cao chiết phân đoạn từ cao chiết tổng.
2.2.2. Phương pháp phân lập
Sắc ký cột (CC): Sắc ký cột được tiến hành với chất hấp phụ là silica gel pha thường có cỡ hạt là 0,040-0,063 mm; pha đảo RP-18 và sử dụng chất nhồi cột là nhựa trao đổi ion hạt Diaion HP-20 và Sephadex LH-20.
Sắc ký lớp mỏng (TLC): Sắc ký lớp mỏng thực hiện trên bản silica gel tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254, RP-18 F254s. Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại Mineralight® Lamp ở hai bước sóng 254 và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong EtOH phun đều lên bản mỏng, sấy khơ rồi hơ nóng trên bếp điện từ đến khi hiện màu.
2.2.3. Phương pháp xác định cấu trúc
Khối phổ (MS): Phổ khối lượng phun mù điện tử phân giải cao một lần (HR-ESI- MS) được đo trên máy Bruker MicroTOF-QII spectrometer và máy Shimadzu IT-TOF tại Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TP. HCM.
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân được đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR (sử dụng TMS làm chất nội chuẩn) tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
Phương pháp xác suất phân bố (DP4+): Phân tích các cấu trạng của hợp chất được thực hiện bằng phần mềm Tinker v8.6.1 và phần mềm Gaussian 16, tính tốn độ dịch
chuyển của NMR được thực hiện bằng phương pháp GIAO. Phương pháp DP4+ được tiến hành tại Trường Đại học Chulalongkorn, Thái Lan và tại Trường Đại học Quy Nhơn.
2.2.4. Phương pháp thử hoạt tính sinh học
2.2.4.1. Phương pháp thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase
Phương pháp sử dụng enzyme α-glucosidase thu từ loài S. cerevisiae (G0660- 750UN, Sigma, Đức), chất nền p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (Sigma, Đức), đối chứng dương acarbose (Sigma, Đức). Đo mật độ quang trên máy Shimadzu UV1800 (Shimadzu, Nhật) tại Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh.
2.2.4.2. Phương pháp thử hoạt tính gây độc tế bào (phương pháp MTT)
Phương pháp sử dụng đối chứng dương doxorubicin 10 mg/5mL (Ebewe, Áo), dòng tế bào khối u MCF-7, HepG2 và dòng K562. Đo độ hấp thu trên máy quang phổ quét Sunrise (Sunrise, Đức) của Phịng Thí nghiệm Sinh học Phân tử, Bộ môn Di truyền, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh và Trường Đại học Nguyễn Tất Thành.