CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
3.2. Hoạt tính sinh học của các hợp chất
3.2.1. Hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase
Phương pháp thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase của các hợp chất tinh khiết được trình bày trong mục 2.3.3.1. Thử nghiệm được tiến hành tại Phịng thí nghiệm Hóa dược, khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh. Kết quả thử nghiệm thu được thể hiện ở (Bảng 3.30).
Bảng 3.30. Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase của các chất tinh khiết
Thứ tự chất NA.03 NA.04 NA.05 NA.06 NA.07 NA.08 NA.10 NA.11 NA.12 NA.13 NA.14 NA.15 NA.16 NA.18 NA.20 NA.21 NA.22 NA.23 NA.25
Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase của 19 hợp chất tinh khiết thu được thể hiện ở(Bảng 3.30) cho thấy: Giá trị IC50 của các hợp chất NA.03, NA.04, NA.05, NA.06, NA.07, NA.08, NA.10, NA.11, NA.16 và NA.23 lớn hơn 250 µM, và cao hơn so với đối chứng acarbose 214,5 µM, các hợp chất cịn lại đều thấp hơn. Trong đó, khả năng kháng enzyme α-
glucosidase theo thứ tự từ cao nhất đến thấp: NA.25, NA.18, NA.20, NA.22, NA.15, NA.12, NA.13, NA.21, NA.14 tương ứng 1,4; 31,6; 35,6; 36,9; 42,0; 62,8; 68,3; 86,6; 97,7 µM. Trong số các hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase, hợp chất có khả năng ức chế mạnh nhất là NA.25 cao gấp 153,2 lần so với đối chứng acarbose, kết quả này thấp hơn so với nghiên cứu về hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase của caffeic acid trong điều trị đái tháo đường type 2 với IC50 0,90 µM [114]. Các hợp chất NA.18, NA.20, NA.22, NA.15 cao gấp 5,1-6,8 lần; các hợp chất NA.12, NA.13, NA.21, NA.14 cao gấp 2,2-3.4 lần so với đối chứng acarbose. Trong đó, hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase của isoquercitrin có IC50
36,9 µM thấp hơn so với kết quả nghiên cứu [115] (24,0 µM).
Tiềm năng ức chế α-glucosidase của flavonoid đã được nghiên cứu và báo cáo rộng rãi, dựa vào mối quan hệ hoạt động của các nhóm thế trên cấu trúc của nhóm hợp chất này (Hình 3.31). Các nghiên cứu cho thấy, nhóm thế hydroxyl vào vị trí C-3, C-5 và C-4' làm tăng khả năng ức chế α-glucosidase, ngược lại nếu nhóm thế ở vị trí C-3, C-7 là nhóm methyl hoặc đường đều làm giảm tác dụng ức chế. Tất cả các bài báo đều cho rằng nhóm hydroxyl tự do ở C-4', có thể tạo ra các tương tác chính với enzyme, được coi là rất quan trọng. Đặc biệt các nghiên cứu đối với α-glucosidase của S. cerevisiae, cho thấy các nhóm hydroxyl ở vị trí C-3 và C-7, oxy carbonyl ở vị trí C-4 và các nhóm hydroxyl của vịng B là một trong những nhóm chính làm tăng cường liên kết thơng qua liên kết H [116, 117].
Hình 3.31. Ảnh hưởng của các nhóm thế flavonoid lên hoạt tính ức chế α-glucosidase
Từ các biện luận trên so với kết quả nghiên cứu hoạt tính ức chế α-glucosidase của các 8 hợp chất thuộc nhóm flavonol NA.18, NA.20, NA.22, NA.15, NA.12, NA.13, NA.21, NA.14 (Bảng 3.30) cho thấy chúng đều có nhóm hydroxyl ở vị trí C-5 và C-4' tự do, và TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com
nhóm oxy carbonyl ở vị trí C-4; các vị trí C-3, C-7 và C-3' gắn với các nhóm thế khác nhau như hydroxyl, methoxy, O-glycoside tạo ra sự khác nhau về mức độ ức chế α- glucosidase của các hợp chất này.
3.2.2. Hoạt tính gây độc tế bào
Phương pháp thử hoạt tính gây độc các dịng tế bào khối u MCF-7 và K562 của các chất tinh khiết NA.01 và NA.02 được trình bày trong mục 2.3.3.2. Thử nghiệm được tiến hành tại Phịng Thí nghiệm Sinh học Phân tử, Bộ môn Di truyền, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành. Kết quả thử nghiệm thu được như sau:
Bảng 3.31. Hoạt tính gây độc tế bào của hợp chất NA.01 và NA.02
Dòng tế bào K562
MCF-7
Kết quả thử nghiệm cho thấy cả hai hợp chất NA.01 và NA.02 đều có hoạt tính trung bình chống lại hai dịng tế bào ung thư này. Theo kết quả từ tài liệu [19, 22] các hợp chất nerviside A-H đều khơng có hoạt tính gây độc tế bào HepG2 kết hợp với kết quả thử hoạt tính của các loại cao chiết (Bảng 3.2), do đó khơng thử nghiệm hoạt tính gây độc trên dịng tế bào HepG2 này.
Nhận xét chung về hoạt tính sinh học, hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase được
xác định trên cao tổng, các cao phân đoạn và 19 hợp chất tinh khiết. Trong đó, 2 loại cao NA.C và NA.E được sử dụng để phân lập các hợp chất có IC50 tương ứng là 18,4; 35,4 (µg/mL). Các hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase thuộc nhóm flavonol và caffeic acid, trong đó, các flavonol có hoạt tính ức chế mạnh gấp 2,2-6,8 lần; cịn caffeic acid có hoạt tính mạnh nhất cao gấp 153,2 lần so với đối chứng acarbose. Hoạt tính gây độc tế bào của hợp chất nerviside I và nerviside J có hoạt tính ức chế trung bình trên hai dịng tế bào K562 và MCF-7.