Mẫu Thời gian lưu (tR) Diện tích peak (mAU) Mẫu trắng Mẫu chuẩn 9,509 796013,2 9,548 799473,8 Mẫu thử 9,440 533451,3 9,430 535528,4 Trung bình 9,482 666116,675 Độ lệch chuẩn 0,056 151998,497
Hình 3.26. Độ đặc hiệu mẫu trắng (a); apigenin chuẩn (b); mẫu thử 10 ppm (c).
a) b)
Kết quả: Phân tích mẫu chuẩn apigenin, mẫu trắng và mẫu thử trong
cùng điều kiện sắc ký. Tại vị trí xuất hiện peak của chất cần phân tích trên SKĐ mẫu chuẩn, xuất hiện peak tương ứng trên sắc ký đồ mẫu thử, đồng thời không xuất hiện peak tương ứng trên mẫu trắng. Peak của apigenin trên mẫu thử là cân đối, sắc nét, độ rộng chân peak nhỏ. Như vậy, phương pháp đảm bảo độ đặc hiệu.
▪ Độ lặp lại
Tiến hành 6 thí nghiệm riêng biệt cho 6 mẫu thử apigenin vào hệ thống HPLC ở nồng độ 100%.
Bảng 3.23. Độ lặp lại của quy trình thẩm định apigenin bằng HPLC
Mẫu Diện tích peak (mAU) Nồng độ (ppm)
1 425042,1 2,566 2 424701,4 2,564 3 425148,3 2,567 4 430598,5 2,602 5 408745,7 2,463 6 417526,4 2,519 Trung bình 421960,4 2,547 SD 0,045 RSD (%) 1,75
Kết luận: Độ lặp lại có thể chấp nhận được với RSD = 1,75% (< 2%). Kết quả khảo sát cho thấy dao động giữa các kết quả thử nghiệm có độ lặp lại cao. Phương pháp phân tích ổn định, ít bị ảnh hưởng bởi sai số hệ thống và sai số ngẫu nhiên. Do đó, quy trình có thế áp dụng để phân tích mẫu kiểm nghiệm.
▪ Khoảng tuyến tính
Chuẩn bị dãy chuẩn có nồng độ 1 ppm, 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm. Tiến hành phân tích trên hệ thống HPLC. Kết quả được trình bày ở Bảng
3.24 để vẽ đồ thị đường chuẩn (Hình 3.25).