Thuyết minh quy trình: Củ gừng (5 kg) sau khi thu về được rửa sạch, loại
bỏ củ hư, phơi dưới bóng râm đến khi khối lượng khơng đổi, thu được 1 kg gừng khô. Gừng khô Zingiber officinale (1 kg) được chiết với EtOH 90% ở 60
Phân đoạn 1,2
Phân đoạn 3 hàm lượng [6]- shogaol 18,86% (6 g) Phân đoạn 4,5,6,7 [6]-shogaol ≥ 95% (m = 10,5 mg) Cao EtOH (độ ẩm 17,3%) hàm lượng shogaol 0,8% (m = 170 g) Dịch chiết Chiết EtOH 90% (1:5) 3h, siêu âm, 60℃
Cô quay loại dung môi 60 oC Lọc bỏ bã
EtOH lạnh
Dịch chiết Sáp, tạp, chất
màu…
Chiết lỏng -lỏng hệ ether dầu hỏa - EtOAc (1:1) Lắc 15’, để yên 30’
Chiết 3 lần
CC ether dầu hỏa - EtOAc (50:1 → 1:1)
Xác định cấu trúc (NMR)
oC trong 3 giờ với hỗ trợ sóng siêu âm theo tỷ lệ nguyên liệu : dung mơi là 1:5. Sau thời gian trích ly, tiến hành lọc tách bã, cô quay chân không thu hồi dung môi thu được 170 g cao thô (độ ẩm 17,3%) đạt hiệu suất thu khối lượng cao thơ là 17%. Phân tích HPLC xác định làm lượng [6]-shogaol trong cao gừng thô EtOH là 0,8%.
Tiến hành nâng cao hàm lượng [6]-shogaol trong dịch chiết EtOH thô bằng phương pháp chiết lỏng – lỏng. Để tách sáp và tạp dùng EtOH lạnh, khi đó sáp và tạp sẽ đơng đặc lại rồi loại chúng ra khỏi hỗn hợp. Lúc này hỗn hợp chỉ còn lại tinh dầu, nhựa dầu và dung môi ở dạng sệt, thu hồi dung môi và tinh chế để sử dụng lại. Cho nước vào dịch chiết EtOH, chiết trên phễu chiết với hệ dung môi ether dầu hỏa - EtOAc (1:1), lắc 15 phút và để yên 30 phút, lọc lấy phần dịch trong màu vàng sậm. Chiết lặp lại 3 lần để chiết kiệt hợp chất tan trong pha hữu cơ. Phân tích HPLC xác định làm lượng [6]-shogaol trong cao ether dầu hỏa – EtOAc là 18,9%.
Để phân lập [6]-shogaol đạt độ tinh khiết từ 95% cho phân tích NMR, dịch chiết ether dầu hỏa – EtOAc (1:1) sau khi cô quay thu hồi dung môi được phân lập trên cột silica gel với hệ dung môi ether dầu hỏa - EtOAc (50:1; 30:1; 20:1; 15:1; 5:1; 2:1; 1:1) thu được 7 phân đoạn. Phân đoạn 3 (6 g) được tiến hành sắc ký cột sử dụng hệ dung môi ether dầu hỏa - ethyl acetate (10:1) thu được [6]-shogaol (10,5 mg).
b) Định tính và xác định cấu trúc [6]-shogaol
Kết quả định tính [6]-shogaol: chỉ số Rf của [6]-shogaol triển khai trên bản mỏng là 0,4; hệ dung môi khai triển ether dầu hỏa – EtOAc (1,5:1).
A B