CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5. PHƯƠNG PHÁP CHIẾT TÁCH, NÂNG HÀM LƯỢNG, ĐỊNH LƯỢNG
2.6.3. Thẩm định quy trình phân tích apigenin từ cần tây
▪ Khảo sát tính tương thích hệ thống
Cách tiến hành:
- Cân bằng cột sắc kí bằng pha động trong 30 phút. - Tiến hành sắc kí mẫu chuẩn 10,0 ppm, 6 lần liên tiếp
- Khảo sát thơng số: Diện tích peak, số đĩa lý thuyết N, hệ số bất đối xứng T.
Cách tiến hành:
Chuẩn bị 3 mẫu dung dịch:
- Mẫu trắng: Chuẩn bị 10 mL dung môi MeOH. Lọc qua màng lọc 0,22 μm. - Mẫu thử 10 ppm.
- Mẫu chuẩn 10 ppm.
Sắc kí lần lượt 3 mẫu đã chuẩn bị tại cùng điều kiện sắc kí.
▪ Độ lặp lại
Cách tiến hành :
- Chuẩn bị mẫu thử nồng độ 10 ppm.
- Tiến hành định lượng mẫu 6 lần với điều kiện sắc ký đã được chọn. Kết quả đánh giá dựa trên độ lệch chuẩn tương đối % RSD của nồng độ.
▪ Khảo sát khoảng tuyến tính
Cách tiến hành: từ dung dịch chuẩn gốc S0 10 ppm, pha tiếp mẫu dung dịch
chuẩn ở các nồng độ từ 1 ppm đến 10 ppm:
Bảng 2.4. Dung dịch chuẩn khảo sát tính tuyến tính của apigenin
Dung dịch chuẩn Nồng độ apigenin (µg/mL) Cách pha S0 (mL) Thể tích cần định mức (mL) 1 1 1 10 2 2 2 3 4 4 4 6 6 5 8 8
Lọc 6 mẫu qua màng lọc 0,22 μm. Tiến hành sắc ký 6 mẫu dung dịch chuẩn và lập đường biểu diễn tương quan giữa diện tích và nồng độ chuẩn để xác định phương trình hồi quy.
▪ Giới hạn phát hiện – Giới hạn định lượng
LOD có thể được xác định dựa vào độ dốc của đường chuẩn và độ lệch chuẩn của tín hiệu theo cơng thức:
a SD
LOD
= 3,3
Tính giá trị LOQ theo cơng thức sau:
3.3
LOQ= LOD
Trong đó:
- SD: Độ lệch chuẩn của tín hiệu - a: độ dốc của đường chuẩn
▪ Độ đúng
Cách tiến hành:
- Cân chính xác 0,5 mg mẫu apigenin hịa tan trong MeOH, định mức trong bình định mức 100 mL thu được dung dịch mẫu thơ (dung dịch A) có nồng độ lý thuyết 5 ppm.
- Cân chính xác lần lượt mẫu chuẩn 0,4 mg, 0,5 mg, 0,6 mg hịa tan trong bình định mức 10 mL bằng MeOH. Hút 1 mL lần lượt các dung dịch chuẩn có nồng độ 40 ppm, 50 ppm và 60 ppm, pha lỗng trong bình định mức 10 mL bằng dung dịch A, được các dung dịch với nồng độ của mẫu chuẩn thay đổi 80 %, 100 % và 120 % so với mẫu thử.
- Tiến hành phân tích ở mỗi nồng độ trên 3 lần liên tiếp tại cùng điều kiện sắc ký. Tính hàm lượng của mẫu thử thêm chuẩn ở từng nồng độ, % độ phục hồi (R%) ở từng nồng độ thêm vào, độ lệch chuẩn tương đối (% RSD). 2.7. PHƯƠNG PHÁP CHIẾT TÁCH, NÂNG HÀM LƯỢNG, ĐỊNH LƯỢNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG FUCOIDAN TRONG RONG NÂU