IV. SỰ PHÂT TRIỂN CỦA VI KHUẨN
1.Đếm trực tiếp dưới kính hiển
*Sử dụng buồng đếm hồng cầu (Neubauer, Thomas) để đếm tế băo vi khuẩn.
Nguyín tắc chung: Đếm số lượng tế băo vi khuẩn có trong một đơn vị thể tích của
phòng đếm, từ đó suy ra số lượng tế băo có trong 1ml dung dịch, nhđn với độ pha loêng để biết số tế băo có trong dung dịch ban đầu.
Buồng đếm Neubauer: Lă một phiến kính đặc biệt, trín bề mặt chia thănh câc ô vuông nhỏ, cạnh ô vuông nhỏ lă 1/20mm, khoảng câch giữa phiến kính vă lâ kính 0,1 mm.
Ta nhỏ lín buồng để đếm một giọt huyền phù chứa vi khuẩn muốn đếm, đậy lâ kính lại khi đó ta có thể tích mỗi ô nhỏ lă: 1/10 x 1/20 x 1/20mm3=1/4000mm3= cm3.
Gọi độ pha loêng của dung dịch vi khuẩn cần đếm lă K, trung bình số vi khuẩn trín mỗi ô nhỏ lă A (ta đếm văi ô lớn, sau đó lấy trung bình số vi khuẩn trín mỗi ô nhỏ), khi đó số vi khuẩn có trong 1ml dung dịch lă N:
N=A x 4 x 106 x (số tế băo/1ml)
Phương phâp năy cho kết quả nhanh, tuy nhiín không thể phđn biệt được tế băo vi khuẩn sống vă tế băo vi khuẩn chết. Hơn nữa tế băo vi khuẩn rất bĩ nín việc đếm dưới kính
hiển vi lă không dễ dăng. (Phương phâp năy chủ yếu âp dụng cho những tế băo không cần nhuộm mău).
Đếm vi khuẩn đê nhuộm: Nhỏ một thể tích nhất định của huyền phù muốn đếm lín một diện tích nhất định trín phiến kính, cố định vă nhuộm mău, thường lă với xanh mtylen hoặc với mău phù hợp với vi khuẩn ấy. Sau đó, đếm số lượng tế băo trín một đơn vị diện tích.
*Đếm trực tiếp theo Breed
Lấy một phiến kính sạch đặt lín tờ giấy kẻ ô vuông, thông thường ô vuông có cạnh 1cm (diện tích mỗi ô lă S=1cm2). Dùng micropipet hút 0,01ml mẫu rồi quệt kín diện tích một ô (0,01ml/1cm2, nếu quệt bị lem ra ngoăi ô phải lăm lại). Lặp lại với 4-5 ô câch rời nhau, cố định vết bôi, nhuộm mău tiíu bản (Gram, Newman-Lampert cải tiến), sau đó đếm số lượng vi khuẩn có trín một diện tích vi trường, lặp lại khoảng văi chục lần ở câc vi trường khâc nhau. Tính trung bình số lượng vi khuẩn có trong một vi trường hiển vi.
Câch tính: tính diện tích vi trường, dùng thước đo vật kính, thước năy có chiều dăi 1mm, được chia 100 phần mỗi khoảng câch tương ứng 0,01 hay 10µm. Đặt thước đo lín băn kính, điều chỉnh khoảng câch để nhìn thấy câc vạch trín thước đo. Đo đường kính của vi trường hiển vi, tính diện tích vi trường theo công thức s = π.r2.
Số lượng tế băo có trong 1ml lă : =x A x x
K lă độ pha loêng, A trung bình số vi khuẩn có trong một vi trường, S lă diện tích dung dịch dăn mỏng (1cm2) svt diện tích vi trường.