STT Tên giống Cơ quan chọn tạo và cung
cấp giống Chú thích
1 T1 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
2 T2 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
3 T3 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
4 T4 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
5 T5 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
6 T6 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
7 T7 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
8 T8 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
9 T9 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
10 T10 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
12 T11 Công ty Phú Nông (nhập nội) Giống lai
13 Montavi Công ty Seminis (nhập nội) Giống lai
14 Mongal Công ty Thành Nông (nhập nội) Giống lai
15 Nun 2258 Công ty Cánh Đồng Xanh (nhập nội) Giống lai
16 Anna Công ty Seminis (nhập nội) Giống lai
Đ/c 1 VT3 Viện cây lương thực Cây thực phẩm Giống thuần
Đ/c 2 Savior Công ty Sygenta (nhập nội) Giống lai
3.2. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 3.2.1. Thời gian 3.2.1. Thời gian
Từ tháng 9 năm 2017 đến tháng 6 năm 2018
3.2.2. Địa điểm
Tại Viện Cây lương thực và Cây thực phẩm địa chỉ: Liên Hồng- Gia Lộc- Hải Dương và Bộ môn Sinh học phân tử và Công nghệ sinh học ứng dụng- Khoa Công nghệ sinh học- Học viện Nông nghiệp Việt Nam.
3.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
1. Khảo sát đặc điểm nông sinh học, năng suất và chất lượng của dòng, giống cà chua vụ Thu đông 2017 và Xuân hè 2018;
2. Đánh giá khả năng chịu nóng của dòng, giống cà chua;
3. Xác định khả năng chứa gen kháng bệnh xoăn vàng lá Ty-1, Ty-2, Ty-3 và Ty-4 của dòng, giống cà chua thí nghiệm;
4. Đánh giá khả năng kháng bệnh xoăn vàng lá bằng lây nhiễm nhân tạo.
3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.1. Khảo sát đặc điểm nông sinh học, năng suất và chất lượng trong vụ Thu đông 2017 và Xuân hè 2018 Thu đông 2017 và Xuân hè 2018
- Thời vụ trồng: Vụ Thu đông (Thí nghiệm 1): Gieo hạt 5/10 trồng 31/10 Vụ Xuân hè (Thí nghiệm 2): Gieo hạt 6/3 trồng 26/3
- Gieo cây con: Gieo vào bầu thành phần giá thể gồm 50% đất phù sa + 35% (xơ dừa, trấu hun) + 15% (mùn mục). Giá thể được xử lý sạch bệnh và chuẩn bị trước khi sử dụng 5-10 ngày. Khi cây cao được 8-10 cm, có 4-5 lá thật, thân cứng, mập, không bị sâu, bệnh hại thì đem trồng.
- Chuẩn bị đất và trồng cây
+ Đất trồng: Đất được chọn là đất trồng giàu mùn, tơi xốp, dễ thoát nước, độ pH 5,5-7.
Luống trồng rộng 1,5 m, cao 25cm, mặt luống rộng 110cm, rãnh luống rộng 30cm.
+ Khoảng cách trồng: Cây x cây 45 cm, hàng x hàng 75 cm. Diện tích ô thí nghiệm 10m2, trồng 32 cây.
- Phân bón
* Lượng phân và cách bón: (lượng phân tính cho 1 ha)
STT Loại phân Tổng số phân Bón lót Lần 1 Bón thúc Lần 2 Lần 3
1 Phân hữu cơ (tấn) 10 10
2 Đạm urê (kg) 350 80 170 100
3 Lân supe (kg) 750 600 150
4 Kali sunfat (kg) 300 60 170 70
+ Bón lót: Đánh rạch và bón phân hữu cơ, lân, vôi bột vào hốc (rạch), đảo đều với đất và lấp đất trước khi trồng 2 - 3 ngày.
+ Bón thúc lần 1: Sau trồng 10 - 15 ngày, kết hợp với vun đợt 1 + Bón thúc lần 2 : Sau trồng 30 - 35 ngày, kết hợp với vun cao đợt 2 + Bón thúc lần 3 : Sau khi thu quả lần đầu.
- Kỹ thuật chăm sóc
Luôn giữ ẩm cho cây, nhất là ở giai đoạn đầu và giai đoạn ra hoa kết quả tưới rãnh để giữ ẩm. Sau khi trồng khoảng 25-30 ngày làm giàn chữ A để chống đổ cho cây
Sơ đồ bố trí thí nghiệm vụ Thu đông 2017
Dải bảo vệ Dải bảo vệ Dải bảo vệ 6 11 5 1 13 7 4 ĐC2 3 14 10 12 15 2 8 9 ĐC1 10 5 8 3 ĐC1 9 11 13 4 14 12 2 1 7 6 15 ĐC2 4 2 10 3 1 12 9 8 13 14 ĐC2 5 ĐC1 11 6 7 15 Dải bảo vệ
Sơ đồ bố trí thí nghiệm vụ Xuân hè 2018
Dải bảo vệ Dải bảo vệ Dải bảo vệ 11 10 5 2 3 6 1 ĐC1 15 7 14 4 9 8 13 12 ĐC2 4 2 8 1 6 ĐC2 13 10 15 12 5 11 ĐC1 3 14 9 7 8 4 2 ĐC1 12 10 3 6 5 9 ĐC2 15 11 13 14 1 7 Dải bảo vệ 3.4.2. Các chỉ tiêu theo dõi
* Các giai đoạn sinh trưởng của cây cà chua trên đồng ruộng
- Thời gian từ gieo đến mọc (ngày): Tính từ lúc gieo cây cho đến khi có 50% số cây mọc
- Thời gian từ mọc đến ra lá thật (ngày): 50% số cây ra lá thật
- Thời gian từ trồng đến ra hoa đầu (ngày): 50% số cây ra hoa đầu tiên - Thời gian từ trồng đến đậu quả đầu (ngày): 50% số cây đậu quả đầu - Thời gian từ trồng đến thu quả lứa đầu (ngày)
- Tổng thời gian sinh trưởng (ngày): Được tính bằng số ngày từ khi mọc đến ngày kết thúc thu hoạch.
* Một số đặc điểm về hình thái
- Màu sắc thân - Màu sắc lá
- Hình dạng phiến lá
- Dạng hình chùm hoa: đơn giản (chỉ có một trục chính, hoa mọc so le trên trục), trung gian (hoa ra 2 nhánh chính) và phức tạp (chùm hoa chia thành nhiều nhánh).
- Hình dạng và màu sắc quả
* Một số chỉ tiêu sinh trưởng và cấu trúc cây
- Dạng hình sinh trưởng:
+ Dạng hình sinh trưởng hữu hạn: Khi cây phát triển đến độ cao khoảng 65 cm, chùm hoa thứ nhất thường xuất hiện. Khi trên thân chính có 7-8 lá thật cứ 1-2 lá có chùm hoa kế tiếp, cho đến khi có 3-4 chùm thì đỉnh sinh trưởng có chùm hoa cuối cùng, cây ngừng sinh trưởng chiều cao.
+ Dạng hình sinh trưởng bán hữu hạn: Cây có độ cao 65-120 cm, khi trên thân chính có 7-8 lá thật thì xuất hiện chùm hoa thứ nhất, sau đó cứ cách 1-2 lá thì có chùm hoa tiếp theo cho đến khi thân chính có tới 7-8 chùm hoa thì chiều cao ngừng sinh trưởng.
+ Dạng hình sinh trưởng vô hạn: cây cao trên 120 cm, khoảng cách giữa các lóng dài, vị trí chùm hoa thứ nhất cao, khi trên thân chính có 9- 10 lá thật thì xuất hiện chùm hoa thứ nhất. Sau đó cứ cách 2-3 lá có chùm hoa tiếp theo sau đó cứ tiếp tục như vậy cho đến khi cây già hoặc không đủ các yếu tố nước, dinh dưỡng…thì cây ngừng sinh trưởng.
- Chiều cao từ gốc đến chùm hoa thứ nhất (cm).
- Chiều cao cuối cùng trên thân chính (cm): đo từ cổ rễ đến đỉnh sinh trưởng thân chính
- Số chùm hoa trên thân chính và thân phụ - Số hoa trung bình/chùm
- Tổng số hoa/cây
* Năng suất và các yếu tố cấu thành năng suất
- Tổng số quả/cây (quả): đếm số chùm quả 5 cây/ô - Tổng số quả thương phẩm, phi thương phẩm/cây
- Số chùm quả/cây (chùm quả): đếm số chùm quả 5 cây/ô - Khối lượng quả (g): cân 10 quả lấy đại diện / ô
- Tỉ lệ đậu quả (%) = (số quả đậu/số hoa) x 100.
Theo dõi trên 3 chùm hoa đầu của cây (từ dưới lên), tính tỉ lệ đậu quả trên từng chùm và tỷ lệ đậu quả trung bình.
- Năng suất cá thể: Số quả/cây x khối lượng trung bình quả (kg/cây) - Năng suất lý thuyết (tấn/ha) = Số quả trung bình/cây x Khối lượng trung bình quả x mật độ trồng/ha
Tổng khối lượng quả thu hoạch (kg/ô)
- Năng suất thực thu = x 1000 Tổng diện tích ô (m2)
* Một số chỉ tiêu về hình thái quả và độ chắc quả
- Dạng quả: được tính theo công thức tính chỉ số hình dạng: I = H/D Trong đó, H: chiều cao quả
D: đường kính quả
Theo tiêu chuẩn ngành 10TCN 219: 2006 của Bộ Nông Nghiệp và Phát triển Nông thôn chia thành:
Nếu I < 0,6 dạng quả dẹt
Nếu 0,6 ≤ I < 0,9 dạng quả tròn dẹt Nếu 0,9 ≤ I ≤ 1,1 dạng quả tròn Nếu 1,1 < I ≤ 1,3 dạng quả tròn dài Nếu I > 1,3 dạng quả tròn dài - Màu sắc quả khi chín hoàn toàn
- Độ dày thịt quả (mm): Đo bằng thước panme
- Số ngăn hạt/quả: cắt ngang quả và đếm số ngăn hạt/quả.
- Hàm lượng chất khô hòa tan (°Brix): đo bằng khúc xạ kế cầm tay. - Hàm lượng vitamin C (mg/100g): phương pháp sắc ký lỏng cao áp - Hàm lượng đường tổng số (%): phương pháp chuẩn độ oxy hóa khử với ferrycyanure
- Xác định độ chua (%): phương pháp hiệu chỉnh nồng độ dung dịch NaOH 0,1N
* Mức độ nhiễm sâu, bệnh trên đồng ruộng
Đối tượng gây hại:
+ Sâu hại: Sâu xanh, sâu đục quả, sâu khoang, sâu vẽ bùa + Bệnh hại: Bệnh sương mai, bệnh đốm nâu.
Đánh giá theo thang điểm từ 0-5 của Trung tâm Rau thế giới - Bệnh sương mai, bệnh đốm nâu được đánh giá:
Điểm 0: Không bị bệnh; Điểm 1: < 10% diện tích bị bệnh; Điểm 2: 10- 24% diện tích bị bệnh; Điểm 3: 25- 49% diện tích bị bệnh; Điểm 4: 50- 74 % diện tích bị bệnh; Điểm 5: >75% diện tích bị bệnh;
3.4.3. Đánh giá khả năng chịu nóng của dòng, giống cà chua
Các giống cà chua được trồng trong vụ Xuân hè muộn gieo hạt ngày 6/3/2018 là vụ có điều kiện nhiệt độ cao, sau đó tiến hành đánh giá khả năng chịu nóng thông qua 2 chỉ tiêu:
- Tỉ lệ đậu quả: tiến hành đánh giá tỉ lệ đậu quả trên 3 chùm hoa đầu tiên, theo dõi tổng số hoa và tổng số quả hình thành trên 3 chùm hoa đầu tiên
- Độ hữu dục của hạt phấn: tiến hành nhuộm hạt phấn được thu từ những hoa mới chớm nở bằng dung dịch KI 1% và đếm tỉ lệ hạt phấn trên hiển vi trường. Mỗi giống tiến hành đánh giá 3 cây, mỗi cây 3 hoa mới nở. Hạt phấn bất dục là hạt phấn không bắt màu hoặc bắt màu nhạt, bị méo mó.
3.4.4. Xác định gen kháng virus xoăn vàng lá Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 bằng chỉ thị phân tử chỉ thị phân tử
a/. Tách chiết DNA:
DNA tổng số được tách từ lá cà chua theo CTAB cụ thể như sau:
- Thu 1g lá non của mỗi dòng giống , nghiền mẫu lá bằng cối chày sứ trong nitơ lỏng.
- Chuyển bột lá đã nghiền sang ống eppendorf loại 2 ml, bổ sung 800 µl đệm chiết (100 mM Tris - HCl (pH 8), 1.5 M NaCl, 50 mM EDTA (pH 8), 4% (w/v) CTAB và bổ xung 2 % β-mercaptoethanol ngay trước khi dùng), trộn đều hỗn hợp rồi ủ ở 650 C trong 1 giờ, cứ 10 phút lắc nhẹ 1 lần.
- Giữ mẫu ở nhiệt độ phòng trong 5 phút, thêm 800 µl hỗn hợp chloroform-isoamyl alcohol (24:1) và lắc nhẹ.
- Ly tâm tốc độ 13.000 rpm trong 15 phút, chuyển lớp dung dịch trên sang ống eppendorf 1.5 ml mới.
- Lặp lại bước 3 và 4.
- Thêm 800 µl isopropanol để kết tủa DNA, trộn hỗn hợp bằng cách lắc nhẹ và ủ 30 phút ở -20 0C.
- Ly tâm tốc độ 13 000 vòng trong 15 phút. Đổ dung dịch lỏng đi, rửa DNA ba lần bằng 500 µl dung dịch ethanol 70%.
- DNA được làm khô, sau đó hòa tan trong đệm TE (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8).
b/. Xác định các gen kháng virus xoăn vàng lá sử dụng cặp mồi của các chỉ thị theo các công bố sau: