Tên TL đậu quả (%) TL hạt phấn hữu dục (%) Năng suất thực thu (tấn/ha) Thu đông Xuân hè
T3 48,9 31,2 74,9 29,1
T8 49,9 33,2 35,9 28,6
T10 49,8 31,2 39,1 27,5
Montavi 38,9 33,0 80,0 31,4
4.3. XÁC ĐỊNH GEN KHÁNG BỆNH XOĂN VÀNG LÁ TY-1, TY-2, TY-3, TY-4 CỦA DÒNG, GIỐNG CÀ CHUA VỤ XUÂN HÈ 2018 TY-4 CỦA DÒNG, GIỐNG CÀ CHUA VỤ XUÂN HÈ 2018
4.3.1. Xác định dòng, giống cà chua mang gen Ty-1
Ty-1 là gen trội được sử dụng sớm nhất để tạo ra các giống kháng xoăn vàng lá trên thế giới (Ji et al., 2007b). Han et al. (2012) đã phát triển thành công chỉ thị đồng trội CAPS TG97 cho phép phân biệt được kiểu gen kháng đồng và dị hợp tử. Sản phẩm PCR với cặp mồi TG97F/R là một đoạn DNA dài 398 bp ở tất cả các mẫu giống. Sản phẩm PCR thu được với marker TG97sau khi ủ sản phẩm với TaqI, các cây có kiểu gen ty-1/ty-1 (đồng hợp tử lặn – không có gen kháng) xuất hiện 1 vạch băng 398 bp, các cây có kiểu gen Ty-1/Ty-1 (đồng hợp tử trội) có 2 vạch băng 303 bp và 95 bp, còn cây có cả 3 vạch băng 398, 303 và 95 bp thì cây đó chứa kiểu gen Ty-1/ty-1 (dị hợp tử). Qua kết quả phân tích đã phát hiện được 3 mẫu giống chứa gen Ty-1 là T3, T5 và T6. Vệt băng gen kháng Ty-1 được thể hiện ở hình 4.5.
Hình 4.5. Điện di phát hiện gen Ty-1, sản phẩm PCR được cắt bằng enzyme TaqI
Ghi chú: 1- T1, 2- T2, 3- T3, 4- T4, 5- T5, 6- T6, 7- T7, 8- T8, 9- T9, 10- T10, 11- T11, 12- Montavi, 13- Mongal, 14- Nun 2258, 15- Anna, 16- VT3 (đ/c1), 17- Savior (đ/c 2). Địa điểm: Bộ môn Sinh học phân tử và Công nghệ sinh học UD.
4.3.2. Xác định dòng, giống cà chua mang gen Ty-2
Gen Ty-2 được Hanson et al., (2006) xác định nằm trên nhánh dài nhiễm sắc thể 11, nằm giữa chỉ thị TG36 và TG26. Garcia et al., (2007) đã phát triển chỉ thị SCAR T0302 liên kết chặt với gen Ty-2, sử dụng cặp mồi T0302F/TY2R1, cho phép phát hiện được kiểu gen kháng đồng và dị hợp tử. Sản phẩm PCR sau điện di có một băng dài 600bp là những mẫu giống có chứa gen kháng Ty-2 đồng hợp tử, giống có một băng dài 450bp là không chứa gen Ty-2, còn giống nào có ba băng 450, 600 và 700 bp là những giống chứa gen Ty-2 dị hợp tử. Qua phân tích phát hiện được 3 mẫu giống chứa gen kháng Ty-2 là T1, T9, VT3 và một giống chứa chứa gen này dạng dị hợp tử là giống đối chứng Savior. (Hình 4.6)
Hình 4.6. Điện di phát hiện gen kháng Ty-2
Ghi chú: 1- T1, 2- T2, 3- T3, 4- T4, 5- T5, 6- T6, 7- T7, 8- T8, 9- T9, 10- T10, 11- T11, 12- Montavi, 13- Mongal, 14- Nun 2258, 15- Anna, 16- VT3 (đ/c1). Địa điểm: Bộ môn Sinh học phân tử và Công nghệ sinh học UD
4.3.3. Xác định dòng, giống cà chua mang gen Ty-3
Khi kết hợp các gen kháng Ty-1, Ty-2 với gen kháng Ty-3 sẽ giúp cây có khả năng kháng tốt hơn, kháng được nhiều chủng virus hơn, tính kháng bền vững hơn với các tác nhân gây bệnh.Gen Ty-3 là gen trội nằm trên nhiễm sắc thể số 6 (Ji et al., 2007; Ji and Scott, 2007). Theo Ji et al., (2007), gen Ty-3 định vị tại một vùng có chứa locus FER (25 cM, dòng vector BAC 56B23, AY678298). Cặp mồi P6-25 F/R được thiết kế để khuếch đại trình tự gần đầu 5' của dòng vector BAC 56B23, tạo ra sản phẩm là một băng 660bp đối với alen Ty-3b và một băng 630bp với alen Ty-3a, alen mẫn cảm ty-3 cho một băng 320bp. Các giống lai dị hợp tử cho sản phẩm là 2 băng 320bp (ty-3) và 660bp (Ty-3) hoặc 630bp (Ty-3a).
Khi sử dụng cặp mồi P6-25F/R để sàng lọc một số giống lai thương mại, Ji et al.,
(2007) đã thu được một băng PCR 660bp ở ba giống khác nhau. Qua phân tích phát hiện 4 mẫu giống chứa gen Ty-3 là T3, T4, T5, T10 và mẫu giống T8 chứa gen Ty-3 dạng dị hợp tử.
Hình 4.7. Điện di phát hiện gen kháng Ty-3
Ghi chú: 1- T1, 2- T2, 3- T3, 4- T4, 5- T5, 6- T6, 7- T7, 8- T8, 9- T9, 10- T10, 11- T11, 12- Montavi, 13- Mongal, 14- Nun 2258, 15- Anna, 16- VT3 (đ/c1), 17- Savior (đ/c 2). Địa điểm: Bộ môn Sinh học phân tử và Công nghệ sinh học UD.
4.3.4. Xác định dòng, giống cà chua mang gen Ty-4
Khi sử dụng cặp mồi C2-At4g17300, kết quả điện di sản phẩm PCR cho vạch băng dài 150 bp là những mẫu giống có chứa gen kháng, vạch băng 180 bp là những mẫu không chứa gen kháng. Qua phân tích phát hiện duy nhất một mẫu chứa gen là T9
Hình 4.8. Điện di phát hiện gen kháng Ty-4
Ghi chú: 1- T1, 2- T2, 3- T3, 4- T4, 5- T5, 6- T6, 7- T7, 8- T8, 9- T9, 10- T10, 11- T11, 12- Montavi, 13- Mongal, 14- Nun 2258, 15- Anna, 16- VT3 (đ/c1), 17- Savior (đ/c 2). Địa điểm: Bộ môn Sinh học phân tử và Công nghệ sinh học UD.
Như vậy qua phân tích đã phát hiện đc các mẫu giống chứa gen kháng bệnh xoăn vàng lá, có những giống chứa đồng thời hai gen