Sơ đồ quy trình nhân nhanh in vitro giống lan hoàng thảo Vôi đỏ
Tái sinh cây từ protocorm và tạo cây hoàn chỉnh
Môi trường ra rễ: VW + 0,6mg/l NAA+ 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính +
5,5g agar, pH = 5,8
Để bình cây ở hành lang 3 ngày sau đó mang ra ngoài nhà lưới mở nắp bình 3 ngày rồi trồng trên giá thể vỏ thông
Ra ngôi
Mẫu đoạn thân mang mắt ngủ
Mẫu in vitro
Tạo protocorm
Nhân nhanh protocorm
Khử trùng mẫu bằng H2O2 15% trong 5 phút và HgCl2 0,1% trong 10 phút
Môi trường VW + 2mg/l 6-BA + 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính + 5,5g agar, pH = 5,8
Môi trường VW + 2mg/l 6-BA + 0,2 mg/l kinetin + 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính + 5,5g
agar, pH = 5,8
Môi trường tái sinh: VW + 0,5mg/l 6-BA + 0,2 mg/l kinetin + 0,2 mg/l GA3 + 30g/l đường + 10% chuối xanh +
PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
5.1. KẾT LUẬN
1.Sử dụng đoạn thân bánh tẻ làm vật liệu khởi đầu để tạo mẫu vô trùng cho hiệu quả tốt nhất về tỉ lệ mẫu sống và tỉ lệ mẫu phát sinh hình thái.
Sử dụng kết hợp giữa 2 chất khử trùng là H2O2 15% trong 5 phút và HgCl2
0,1% trong 10 phút mang lại hiệu quả khử trùng cao nhất.
2.Môi trường VW + 2mg/l 6-BA + 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính + 5,5g agar, pH = 5,8 là môi trường thích hợp để tạo protocorm.
Môi trường VW + 2mg/l 6-BA + 0,2 mg/l kinetin + 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính + 5,5g agar, pH = 5,8 là môi trường thích hợp để nhân nhanh protocorm.
3.Môi trường VW + 0,5mg/l 6-BA + 0,2 mg/l kinetin + 0,2 mg/l GA3 + 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính + 5,5g agar, pH = 5,8 là môi trường thích hợp để tái sinh cây.
Môi trường VW + 0,6mg/l NAA+ 30g/l đường + 10% chuối xanh + 10% nước dừa + 0,5g/l than hoạt tính + 5,5g agar, pH = 5,8 là môi trường thích hợp để cây con ra rễ tốt nhất.
4.Trước khi ra ngôi để bình cây ở hành lang 3 ngày sau đó mang ra ngoài nhà lưới mở nắp bình 3 ngày cho tỷ lệ sống cao (82,52%). Chiều cao cây 5-6 cm là thích hợp nhất để đưa cây ra vườn ươm.
5.Vỏ thông là giá thể tốt nhất sử dụng để ra ngôi cây con ngoài vườn ươm. Cho thời gian ra rễ nhanh (7 ngày), kích thước cây to đạt chiều dài 7,62cm và đường kính 0,51cm sau 6 tháng trồng.
5.2. KIẾN NGHỊ
Kết quả nghiên cứu của đề tài có thể được ứng dụng triển khai vào nhân nhanh giống lan hoàng thảo Vôi đỏ in vitro để cung cấp cây giống đáp ứng nhu cầu tiêu dùng trong nước.
Mặc dù đề tài đã thu được một số kết quả nhất định trong nhân nhanh cây hoàng thảo Vôi đỏ tuy nhiên cần tiến hành thêm một số thí nghiệm cũng như chỉ tiêu theo dõi về ảnh hưởng của các khoáng chất vi lượng, các chất điều tiết sinh trưởng đến sự phát sinh hình thái mẫu, sự tái tạo và sinh trưởng của cây để hoàn thiện quy trình nhân nhanh in vitro giống lan này.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt:
1. Dương Công Kiên (2002). Nuôi cấy mô thực vật. Nhà xuất bản Đại học quốc gia TP. Hồ Chí Minh.
2. Đỗ Năng Vịnh (2002). Công nghệ sinh học cây trồng ứng dụng. NXB Nông nghiệp – Hà nội.
3. Đỗ Năng Vịnh. (2005). Công nghệ tế bào thực vật và ứng dụng. Nxb Nông nghiệp. Hà Nội.
4. Nguyễn Công Nghiệp (2000). Trồng hoa lan. Nhà xuất bản Trẻ. Tp. Hồ Chí Minh. 5. Nguyễn Nghĩa Thìn (1997). Cẩm nang nghiên cứu đa dạng sinh vật - Manual on
research of biodiversity. Nhà xuất bản Nông nghiệp.
6. Nguyễn Quang Thạch. Hoàng Thị Nga (2005). Nghiên cứu ứng dụng phương pháp nuôi cấy lát mỏng trong nhân nhanh các giống Vanda. Cattleya và Phalaenopsis. Tạp chí Nông nghiệp và Công nghiệp Thực phẩm. số 12. tr: 550- 552.
7. Nguyễn Tiến Bân ( chủ biên) (2005). Danh lục các loài thực vật Việt Nam. tập 3. Nhà xuất bản Nông nghiệp. Hà Nội.
8. Nguyễn Thiện Tịch và cộng sự (2006). Kỹ thuật nuôi trồng hoa lan. NXB Nông nghiệp . Thành phố Hồ Chí Minh.
9. Nguyễn Thị Sơn. Từ Bích Thủy (2014). Nhân giống in vitro la dendrobium
officinale kimura et migo. Tạp chí khoa học và phát triển. tập 12. số 8- 2014 10. Phạm Hoàng Hộ (1993). Cây cỏ miền nam Việt Nam quyển 2.3. Bộ Giáo dục.
Hà Nội.
11. Trần Duy Quý (2005). Sổ tay người Hà Nội chơi Lan. NXB Nông nghiệp.
12. Trần Hợp (1990. 2000). Phong lan Việt Nam. Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật. Hà Nội.
13. Trần Văn Minh (1999). Giáo trình Công nghệ sinh học thực vật. viện sinh học nhiệt đới. Tạp chí phát triển KH & CN. tập 9. số 9 - 2006.
14. Việt Chương (2002). Kỹ thuật và kinh doanh phong lan. 15. Vũ văn Vụ (1997). Sinh lý thực vật. NXB Giáo dục, Hà Nội.
Tiếng nước ngoài:
of Oncidium “Gower Ramsey” and subsequent plant regeneration. Plant cell Rep. 17:251-255.
17. Jaime A. Teixeira da Silva*. 2013: “Orchids: Advances in Tissue Culture. Genetics. Phytochemistry and Transgenic Biotechnology”.
18. Leonid V.Averaging (2003) Update checklist of the orchids of Viet Nam. Viet Nam National University Publising House. Ha Noi.
19. Morel GM (1960) Producing virus-free cymbidiums. American Orchid Society Bulletin 29. pp. 495-497.
20. Morel GM (1964) Tissue culture – a new means of clonal propagation of 21. orchids. American Orchid Society Bulletin 33. 473-478
22. Murashige T. and F. Skoog (1962).Arevired medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. plant physiology. 15: 473 - 497.
23. So-Young Park. Hosakatte N. Murthy. and Kee-Yoeup Paek (2001). “Rapid production of Phalaenopsis from Floral Stalk-derived leaves”. In Vitro Cell. Dev. Biol-Plant. 38. pp. 168-172.
24. Vacin. E. F. and F. W. Went (1949). “Some pH change in nutrient solutions”. Bot. Gaz. 110. pp. 605 - 613.
Tài liệu internet:
25. http://orchidspecies.com/
26. Bùi Xuân Đáng (2005). tìm hiểu về hoa lan.
http://www.hoalanVietnam.org/author/post/1/1/bui-xuan-dang. 27. Hoa lan Việt Nam. 18/12/2006 http://www:rauhoaquavietnam.vn/
28. Phát huy tiềm năng xuất khẩu phong lan ở Việt Nam. 04/07/2009. http://lantaynguyen.Wordpress.com/2009/07/04/phat-huy-tiêm-nằng-xuât-khâu- phong-lan-cua-Viêt-Nạm.
29. Tháng 09/08. kim ngạch xuất khẩu phong lan tăng mạnh. 07/11/2008. http://rauhoaquavietnam.vn/default.aspk?tabID=5&ID=11&LangID=1&NewsID= 4504.
PHỤ LỤC
Bảng thành phần các môi trường nuôi cấy
Thành phần MT 1/2MS(mg/l) WV (mg/l) WV1(mg/l) WV2 (mg/l) KNO3 950.0 525.0 1050.0 1050.0 NH4NO3 802.5 802.5 1605 1605 (NH4)2SO4 500.0 500.0 500.0 KH2PO4 85.0 250.0 250.0 250.0 MgSO4.7H2O 185.0 250.0 250.0 250.0 CaCL2.2H2O 220.0 Ca3(PO4)2 200.0 200.0 200.0 Na2EDTA 18.65 37.26 37.26 37.26 FeSO4. 7H2O 13.9 CoCL2. 6H2O 0.0125 CuSO4.5H2O 0.0125 H3BO3 3.1 KI 0.415 MnSO4.4H2O 11.15 7.5 7.5 7.5 Na2MoO2.2H2O 0.125 ZnSO4.7H2O 4.3 Ferric tartrate 28.0 28.0 28.0 Thiamin 0.05 0.05 Nicotinic axit 0.25 0.25 Pyridoxin 0.25 0.25 Myo Inositol 50.0 50.0 Glicin 1.0 1.0 Đường sacroza 30.0 30.0 30.0 30.0
Kết quả xử lý số liệu
BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B44 13/ 4/17 20:46
--- :PAGE 1
Bang 4.5. anh huong cua cac loai moi truong toi kha nang tao protocorm VARIATE V003 HSN
LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 3 5.60250 1.86750 ****** 0.000 2 * RESIDUAL 8 .240077E-02 .300097E-03
--- * TOTAL (CORRECTED) 11 5.60490 .509536
--- TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B44 13/ 4/17 20:46
--- :PAGE 2
Bang 4.5. anh huong cua cac loai moi truong toi kha nang tao protocorm MEANS FOR EFFECT CT$
--- -- CT$ NOS HSN 1 3 2.90000 2 3 1.30000 3 3 1.60000 4 3 1.60000 SE(N= 3) 0.100016E-01 5%LSD 8DF 0.326142E-01 --- -
ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B44 13/ 4/17 20:46
--- :PAGE 3
Bang 4.5. anh huong cua cac loai moi truong toi kha nang tao protocorm
F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - 1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 12) --- SD/MEAN | | NO. BASED ON BASED ON % | | OBS. TOTAL SS RESID SS | |
HSN 12 1.7250 0.71382 0.17323E-01 1.0 0.0000
ALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B47 13/ 4/17 21: 4
--- :PAGE 1 bang 4.7. anh huong cua 6-BA toi kha nang nhan protocorm VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 5 6.53460 1.30692 ****** 0.000 2 * RESIDUAL 12 .120108E-02 .100090E-03
--- * TOTAL (CORRECTED) 17 6.53580 .384459
TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B47 13/ 4/17 21: 4
--- :PAGE 2 bang 4.7. anh huong cua 6-BA toi kha nang nhan protocorm MEANS FOR EFFECT CT$
--- - CT$ NOS HSN 1 3 1.32000 2 3 2.10000 3 3 3.30000 4 3 2.57000 5 3 2.30000 6 3 2.19000 SE(N= 3) 0.577610E-02 5%LSD 12DF 0.512981E-01 --- --
ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B47 13/ 4/17 21: 4
--- :PAGE 3 bang 4.7. anh huong cua 6-BA toi kha nang nhan protocorm
F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - 1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) --- SD/MEAN | | NO. BASED ON BASED ON % | | OBS. TOTAL SS RESID SS | |
HSN 18 2.3500 0.42005 0.10004E-01 0.4 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE B49 13/ 4/17 21:14
--- :PAGE 1 bang 4.9. anh huong cua 6-BA toi kha nang tai sinh va nhan choi tu protocorm
VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 1 CT$ 5 8.48769 1.69754 ****** 0.000 2 * RESIDUAL 12 .266681E-02 .222234E-03
---