NUÔI CẤY
Bước khử trùng mẫu nuôi cấy là rất quan trọng để tạo ra được nguồn vật liệu vô trùng ban đầu. Khâu này được thực hiện thành công thì các bước tiếp theo mới có thể tiến hành được.Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật có chứa đường, vitamin, muối khoáng và các chất điều hòa sinh trưởng. Đó cũng là môi trường thích hợp cho các loại nấm, vi khuẩn phát triển. Do tốc độ sinh trưởng của nấm và vi khuẩn lớn hơn rất nhiều so với quá trình phân chia tế bào của thực vật. Nếu môi trường bị nhiễm một vài bào tử nấm hoặc vi khuẩn thì chỉ trong vòng 3 – 7 ngày toàn bộ môi trường sẽ bị nhiễm, mẫu cấy sẽ chết dần. Vì vậy, để đảm bảo nuôi cấy được thành công thì mẫu phải được vô trùng tuyệt đối.
Trong nuôi cấy mô của đa số cây trồng, khi đưa mẫu từ ngoài vào trong ống nghiệm, người ta thường phải khử trùng mẫu nuôi cấy. Các chất khử trùng thông dụng nhất là oxy già (H2O2), clorua thuỷ ngân (HgCl2), hypochloride calcium (Ca(OCl)2), hypochloride natrium (NaClO) và một số chất kháng sinh ...v.v. Trong đó, HgCl2 có tác dụng diệt các loại khuẩn tốt hơn, H2O2 diệt nấm tốt hơn (Đỗ Năng Vịnh 2002; 2005). Vì vậy, tùy mẫu và điều kiện nuôi cấy để sử dụng chất khử trùng cho phù hợp.
Trong thí nghiệm nghiên cứu về ảnh hưởng của chất khử trùng đến quá trình vào mẫu của cây lan hoàng thảo Vôi Đỏ, chúng tôi tiến hành trên các đối tượng là lá non, đoạn thân và chồi đỉnh được lấy từ cây mẹ trưởng thành được nhập về hoàn toàn sạch bệnh và được khử trùng với chất khử trùng là H2O2 và HgCl2 ở các nồng độ và thời gian khác nhau. Kết quả khử trùng mẫu được theo dõi sau 6 tuần nuôi cấy. Tỷ lệ mẫu sống, tỷ lệ chết là những chỉ tiêu được đánh giá trên môi trường nuôi cấy phục hồi: VW + 30g/l Sucrose + 5,5 g/l Agar + 10% ND + 10% g/l CX + 0,5 g/l AC, pH = 5,8.
4.1.1. Ảnh hưởng của nồng độ chất khử trùng đến hiệu quả khử trùng của mẫu lá non nuôi cấy