5. Bố cục luận văn
3.1.3.Tổng hợp Fe3O4 –SiO2 –NH2
Tiến hành hoạt hoá bề mặt các hạt nano Fe3O4 – SiO2 để tạo nhóm amin bậc I bằng (3-aminopropyl) triethoxysilane (APTES). Quy trình điều chế được trình bày ở mục 2.1.3 và phản ứng được minh họa ở hình 3.5.
Hình 3.5. Quy trình điều chế hạt Fe3O4 – SiO2 – NH2
Phân tán 300 mg Fe3O4 – SiO2 trong 40 ml ethanol bằng rung siêu âm trong 30 phút. Thêm nhanh 1 ml (3-aminopropyl) triethoxysilane (APTES) vào hỗn hợp trên và khuấy cơ trong 6 giờ ở nhiệt độ 400C trong môi trường khí Ar. Sau đó, hỗn hợp dung dịch được làm nguội đến nhiệt độ phòng. Các hạt Fe3O4 – SiO2 – NH2
được tách bằng nam châm và rửa 5 lần bằng ethanol. Sau đó sấy ở 600C trong 2 giờ thu được các hạt nano Fe3O4 – SiO2 – NH2 như hình 3.6.
Hình 3.6. Các hạt nano Fe3O4 – SiO2 – NH2 sau khi sấy khô
3.1.4. Cố định enzyme glucose oxidase lên Fe3O4 – SiO2 – NH2
Để tổng hợp các hạt nano Fe3O4 – SiO2 – GOD từ tính, tiến hành phương pháp tạo liên kết chéo, sử dụng glutaraldehyde làm cầu nối. Quy trình cố định enzyme GOD lên bề mặt vật liệu theo quy trình ở mục 2.1.3 và phản ứng được minh họa ở hình 3.7.
Phân tán 30 mg Fe3O4 – SiO2 – NH2 trong 6 ml dung dịch đệm phosphate (0,01M; pH=7,4) bằng cách rung siêu âm trong 10 phút; thêm 0,3 ml dung dịch glutaraldehyde (GA) 25% vào hỗn hợp và khuấy trong 6 giờ, các hạt nano được tách bằng nam châm và rửa với dung dịch đệm sau đó là nhiều lần với nước cất thu được các hạt Fe3O4 – SiO2 – NH2 – GA.
Lấy 7 ml enzyme glucose oxidase (0,5 mg/ml đệm phosphate pH=7,4) cho vào mẫu Fe3O4 – SiO2 – NH2 – GA đã chuẩn bị ở trên. Hỗn hợp các hạt nano-GOD được ủ ở nhiệt độ phòng 5 giờ thỉnh thoảng rung nhẹ. Dùng nam châm để tách các hạt nano gắn kết GOD (nano/GOD) ra khỏi hỗn hợp sau phản ứng. Các hạt nano Fe3O4 – SiO2 – GOD được rửa 3 lần với nước cất sau đó bảo quản ở 40C để làm các phân tích tiếp theo.
Dung dịch GOD sau khi gắn kết với các hạt nano được dùng để định lượng GOD còn thừa.