Nguyên tắc: Nuôi cấy một lượng mẫu nhất định hoặc mẫu đã pha loãng trên môi trường thạch dinh dưỡng ở nhiệt độ 30 ± 10 C trong điều kiện yếm khí trong khoảng thời gian từ 48 – 72h sau đó đếm số khuẩn lạc mọc trên đó từ đó có thể đếm được số tế bào sống có trong mẫu phân tích (chú ý chọn độ pha loãng thích hợp sao cho số khuẩn lạc trên mỗi đĩa petri trong khoảng 30 – 300).
Phương pháp tiến hành
- Chuẩn bị môi trường nuôi cấy : môi trường xác định vi sinh vật tổng số là môi trường TGA(Tripton – Glucose – Agar)
Môi trường nuôi cấy(TGA: Tripton – Glucose – Agar)
STT Thành phần Khối lượng 1 Pepton 5 g 2 Glucose 4 g 3 Cao nấm men 2,5g 4 Agar 15g 5 Nước cất 1 lít Khử trùng 20 phút nhiệt độ 1210C
- Pha loãng mẫu: nghiền nhỏ đậu phụ bằng cối chày sứ, trộn đều, cân 1 gam mẫu, pha loãng tới nồng độ 10-2, 10-3(thao tác không quá 30 phút)
- Cấy mẫu: lấy 100μl mẫu đã pha loãng cấy trên đĩa petri có môi trường TGA, mỗi nồng độ pha loãng cấy 3 đĩa, sau đó nuôi trong tủ ấm ở 370C sau 48 đến 72 giờ, đếm tất cả khuẩn lạc xuất hiện trên đĩa thạch(số lượng khuẩn lạc trong mỗi đĩa từ 30 -300 khuẩn lạc). Số lượng vi sinh vật trung bình trong 1g mẫu được tính theo công thức.
N khuẩn lạc/g hay ml = V f n n C 1 2 1 ) (
Trong đó ∑C: tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa n1:số đĩa đếm ở nồng độ pha loãng thứ nhất
n2: số đĩa đếm ở nồng độ pha loãng thứ 2 f1. Hệ số pha loãng ở đĩa đếm thứ nhất V thể tích mẫu cấy vào mỗi đĩa petri
Chú ý: Nếu ngay ở đĩa cấy mẫu nguyên chất(lỏng) hoặc dung dịch huyền phù gốc mà có số lượng khuẩn lạc ít hơn 30 khuẩn lạc thì vẫn lấy kết quả đó.