hiệu
PCR là một trong những kỹ thuật phổ biến nhất hiện nay được sử dụng trong nghiờn cứu và đó được ứng dụng rộng rói trong chẩn đoỏn. Tuy nhiờn khi phải chẩn đoỏn nhiều tỏc nhõn thỡ cựng một lỳc phải thực hiện nhiều phản ứng PCR với cỏc cặp mồi đặc hiệu, do đú dẫn đến chi phớ cho một xột nghiệm cao. Để tăng cường hiệu quả chẩn đoỏn và vượt qua những thiếu sút của PCR, Chamberlin và cộng sự CS là những người đầu tiờn mụ tả và phỏt triển kỹ thuật multiplex - PCR vào năm 1988, tiếp đến là Ballabio và cộng sự CS (1990) cũng phỏt triển kỹ thuật này cho việc xỏc định nhiều căn nguyờn gõy
bệnh cựng một lỳc. Trong kỹ thuật multiplex - PCR, nhiều gen đớch được khuyếch đại cựng một lỳc bằng nhiều cặp mồi trong cựng một phản ứng. Kỹ thuật multiplex - PCR tiết kiệm thời gian, cụng sức và đúng vai trũ rất quan trọng trong chẩn đoỏn phõn tử bao gồm phõn tớch đột biến gen, tớnh đa hỡnh DNA, phõn tớch định lượng, phõn tớch đột biếntớnh và phỏt hiện RNA. Trong lĩnh vực bệnh truyền nhiễm kỹ thuật này rất cú giỏ trị cao trong chẩn đoỏn xỏc định virus, vi khuẩn, nấm và ký sinh trựng. Ngoài ra kỹ thuật này cũn được sử dụng trong phõn tớch cỏc sinh vật chuyển gen, phõn tớch microsatelite và xỏc định kiểu gen. Naito và cộng sựCS (2001) đó phỏt triển kỹ thuật multiplex - PCR xỏc định 6 kiểu gen từ A - F của HBV nhưng lại chia thành 2 hỗn hợp phản ứng là hỗn hợp A cho cỏc kiểu gen A, B và C; hỗn hợp B cho cỏc kiểu gen D, E và F [441]. Kirschberg và cộng sựCS (2003) đó ứng dụng kỹ thuật này cho phộp phõn biệt 6 kiểu gen từ A - F nhưng chỉ thực hiện trong cựng một phản ứng với độ nhạy là từ 103 - 105 copies/ml [7268]. Năm 2006, Jinsong Chen và cộng sựCS [47] đó phỏt triển thờm kỹ thuật này cho phộp xỏc định được cả cỏc dưới kiểu gen B1, B2 và C1, C2. Ở nước ta cỏc tỏc giả như Đụng Thị Hoài An, Trần Xuõn Chươngmột số tỏc giả cũng đó ứng dụng kỹ thuật này xỏc định kiểu gen HBV ở cỏc nhúm bệnh nhõn khỏc nhau [5].
Phương phỏp multiplex - PCR và PCR với cỏc cặp mồi đặc hiệu cú ưu điểm là tiết kiệm thời gian, chi phớ thấp và dễ thực hiện. Cho đến nay cũng đó cú một số thụng bỏo phương phỏp này cú thể phỏt hiện được sự đồng bội nhiễm của nhiều kiểu gen khỏc nhau. Tuy nhiờn với multiplex - PCR việc tối ưu húa phản ứng cũng mất nhiều cụng đoạn, độ nhạy khụng cao chỉ đạt 83% so với đọc trỡnh tự gen (Ren Zhang và CS, 2007) [74] và khi HBV đột biến thỡ phương phỏp này khụng thể xỏc định được.