Sản phẩm DNA tinh sạch được đọc trình tự bằng các cặp mồi đã nêu ở bảng 2.2. Trong quá trình này, bên cạnh việc giải trình tự các vùng exon, để chắc chắn không có đột biến xảy ra tại những vùng không mã hóa thông tin, những vùng biên bao quanh các exon cũng đã được đọc trình tự. Kết quả giải trình tự gen được đưa lên phần mềm tin học BioEdit. Trên phần mềm này, trình tự gen CYP11B1 của người bệnh được so sánh với trình tự gen CYP11B1 chuẩn trên ngân hàng gen người.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Hình 3.5. Phân tích di truyền đột biến ở bệnh nhân 01. A, Vị trí các đột biến ở bệnh nhân trên gen CYP11B1. B, Sơ đồ phả hệ di truyền bệnh từ bố mẹ. Ia, Ib: bố và mẹ; hình vuông: nam giới, hình tròn: nữ giới. II: con. C, Kết quả trình tự trình tự gen.
Kết quả phân tích trình tự phát hiện 2 đột biến dị hợp tử trên exon 3 ở gen
CYP11B1 của người bệnh (Hình 3.5). Một đột biến xảy ra tại vị trí 441 trên cDNA
CYP11B1, A bị thay thế thành T, làm biến đổi bộ ba mã hóa GAA thành GAT. Sự thay thế nucleotide trên cDNA dẫn đến sự thay thế acid amin trên chuỗi protein ở vị trí codon 147, Lutamic bị thay thế thành Aspartic. Đột biến thứ 2 phát hiện trên exon này là đột biến tại vị trí c.456, C bị thay thế bởi G, làm biến đổi bộ ba mã hóa acid amin AAC thành AAC. Sự biến đổi của bộ ba mã hóa này cũng dẫn đến sự thay đổi của acid amin trên chuối protein, Asparagine bị thay thế bởi Lysine.