- Xét nghiệm miễn dịch bằng phương pháp ELISA gián tiếp làm tại Trung tâm Dị ứng - MDLS bệnh viện Bạch Mai, với dàn máy ELISA của hãng BIORAD của Đức.
- Phương pháp ELISA gián tiếp (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) ELISA gián tiếp là một phương pháp được sử dụng rất phổ biến để phát hiện các kháng thể tự miễn.
Trong phương pháp này các kháng nguyên chuẩn được gắn lên các giếng của bộ kit. Mỗi bộ kít gồm 96 giếng (Hình 2.1). Kháng nguyên gắn kết rất chặt chẽ với các tấm nhựa trong ELISA vì nhựa là phản ứng tự nhiên hoặc đã được kích hoạt bởi bức xạ do đó không bị tách rời với kít.
Hình 2.1: Một bộ kít gồm 96 giếng được sử dụng trong kỹ thuật ELISA
(ảnh minh họa)
Phương pháp ELISA gián tiếp gồm 3 pha khác nhau (Hình 2.1)
Pha 1: mẫu chứng và mẫu bệnh phẩm pha loãng được nhỏ vào các
giếng của phiến nhựa. Các kháng thể có mặt bất kì sẽ kết hợp với các kháng nguyên cố định. Sau 1 thời gian ủ nhất định phiến nhựa được rửa sạch với dung dịch đệm để loại bỏ các thành phần không phản ứng của huyết thanh.
Pha 2: Hỗn hợp của kháng kháng thể người IgG-IgG, kháng kháng thể
người IgM-IgG và kháng kháng thể người IgA-IgG kết hợp với horseradish peroxidase (HRP) được nhỏ vào các giếng để phát hiện các tự kháng thể gắn kết với các kháng nguyên cố định. Sau 1 thời gian ủ nhất định enzyme cộng hợp thừa sẽ được rửa bằng dung dịch đệm.
Pha 3: Một dung dịch cơ chất màu chứa chất nền (TMB) sẽ được đưa
vào các giếng. Trong quá trình ủ màu sắc của dung dịch sẽ thay đổi. Bổ sung chất dừng phản ứng để kết thúc phản ứng sẽ làm thay đổi màu sắc các giếng. Mức độ của màu tỷ lệ trực tiếp với nồng độ của kháng thể IgG/IgM/IgA có mặt trong những mẫu bệnh phẩm ban đầu. Đọc mật độ quang học của những giếng trong bản nhựa bằng máy đọc ở bước sóng 450nm là yêu cầu bắt buộc.
Phương pháp ELISA có nhiều ưu điểm đặc biệt nó có thể thực hiện hàng chục nghìn mẫu thử mỗi ngày vì bộ kít chứa 96 giếng. Hơn nữa mỗi giếng không chỉ gắn một loại kháng nguyên mà có thể gắn nhiều kháng nguyên nên không gây cản trở các kháng thể khác nhau trong huyết thanh người bệnh.
Hình 2.2: Nguyên lý phương pháp ELISA (hình ảnh minh họa)
Kết quả ANA: Sử du ̣ng kit của hãng BIORAD Âm tính: < 1.0
Nghi ngờ : 1.0 - 1.2 Dương tính: > 1.2
Kết quả Anti-DsDNA: Sử dụng Kit của hãng BIORAD Âm tính: < 60
Nghi ngờ : = 60 Dương tính: > 60
Kết quả Anti-Scl-70: Sử dụng Kit của hãng BIORAD Âm tính: < 15
Nghi ngờ : 15 -25 Dương tính: > 25
Kết quả Anti-RNP70: Sử dụng Kit của hãng BIORAD Âm tính: < 25
Nghi ngờ : = 25 Dương tính: > 25
Kết quả Anti-Jo-1: Sử dụng Kit của hãng BIORAD Âm tính: < 15
Nghi ngờ : 15 -25 Dương tính: > 25