2.
3.5.2 Kh違o sát nhi 羽v"8瓜 b 違o qu違n
Quá trình b違o qu違n ch院 ph育m -galactosidase c嘘 8鵜nh 8„pi" xck" vt”" t医t quan tr丑ng. Fq"8„."8吋 8ƒpj"ikƒ"u詠 鰻p"8鵜nh trong quá trình b違o qu違n, chúng tôi kh違o sát 荏 hai nhi羽t 8瓜 khác nhau là 4 0C và 25 0E0" -galactosidase c嘘 8鵜nh b荏i TSI-gel s胤 8逢嬰c b違o qu違n trong dung d鵜ej"8羽m phosphate pH 7.5.
38 Ho衣v" v pj" gp¦{og" 8逢嬰e" zƒe" 8鵜nh b茨ng cách s穎 d映pi" QPRI"n "e挨"ej医t sau nhi隠u ngày b違o qu違n khác nhau: 5, 10, 15, 20 ngày.
2.3.6 Thi院t k院 k悦 thu壱t lên men liên t映c s違n ph育m s英a nghèo lactose
Qui trình công ngh羽 8逢嬰c thi院t k院 d詠a trên s詠 k院t h嬰p gi英a các quá trình lên men t衣o s違n ph育m s英a nghèo lactose b茨ng ch院 ph育m enzyme c嘘 8鵜nh. Vtqpi" 8„." suá trình n‒p" ogp" 8逢嬰c th詠c hi羽n liên t映c v噂i s詠 th栄y phân 8逢運ng lactose có trong s英c" v逢挨k" nguyên li羽u b荏i -galactosidase c嘘8鵜nh.
- galactosidase c嘘 8鵜nh có th吋 8逢嬰e"8逢c"vt詠c ti院p vào s英c"8吋 n‒p"ogp."pj逢pi"u胤 逢w" vi羽v"j挨p"mjk"ej¿pi"8逢嬰c ch泳a 荏 các thi院t b鵜 ph違n 泳ng và s英a s胤 8k"swc"eƒe"thi院t b鵜 này vt逢噂c ho員c sau quá trình lên men 荏 m瓜t giá tr鵜rJ"mj»pi"8鰻i.
Fq" 8„." rj逢挨pi" ƒp" e栄a thi院t k院 k悦 thu壱t là thi院t k院 qui trình s違n xu医t s英a nghèo lactose mà quá trình lên men liên t映c qua m瓜t ho員c nhi隠u thi院t b鵜 ph違n 泳ng ch泳a -
galactosidase c嘘8鵜nh.
Bài toán thi院t k院:
‚ A隠 xu医t thi院t b鵜 ph違n 泳ng th栄y phân lactose: Backed bed reactor (PBR). ‚ Thi院t k院 qui trình lên men liên t映c t衣o s違n ph育m s英a nghèo lactose v噂i thi院t
b鵜 PBR.
2.4 Rj逢挨pi"rjƒr" rj¤p" v ej
2.4.1 Rj逢挨pi"rj逢挨pi" rjƒr" Nqyt{"zƒe"8鵜pj"j o"n逢嬰ng protein- enzyme
Nguyên t逸c:
Có th吋 v pj" j o" n逢嬰ng protein c栄a m磯u nghiên c泳u d詠a x q" 8逢運ng chu育n c栄a protein và d詠a vào ph違n 泳ng màu c栄a protein v噂i thu嘘c th穎 Hqnkp0"E逢運pi"8瓜 màu c栄a dung d鵜ch t益 l羽 thu壱n v噂i n欝pi"8瓜 protein.
Hóa ch医t
39 - Rtqvgkp"8逢嬰c hòa tan trong dung d鵜ch NaCl 0.9% v噂k"n逢嬰ng protein trong 1 ml có 10, 42." 52." 62." :2" i" rtqvgkp0" Fwpi" f鵜ch chu育p"vj逢運ng dùng tinh th吋 albumin huy院t thanh
bò (BSA Î bovine serum albumin).
- Dung d鵜ch A: Dung d鵜ch Na2CO3 2 % trong NaOH 0.1N. - Dung d鵜ch B1 và B2.
- B1: dung d鵜ch CuSO4 1 %.
- B2: dung d鵜ch mu嘘i Segnette 2 % (K Na tartrat).
- Dung d鵜ch C: h厩n h嬰p 0,5 ml dung d鵜ch B1, 0,5 ml dung d鵜ch B2 và 50 ml dung d鵜ch A (dung d鵜ch C chu育n b鵜 vt逢噂c khi dùng 30 phút).
- Dung d鵜ch D: dung d鵜ch Folin n欝pi"8瓜 1N.
Ti院n hành
D詠pi"8逢運ng chu育n protein
L医y 1ml dung d鵜ch protein chu育n theo các n欝pi" 8瓜 8«" dk院v" vt逢噂c cho vào 嘘ng nghi羽m, cho thêm 5 ml dung d鵜ch C. L逸e"8隠w."8吋 荏 nhi羽v"8瓜 trong 10 phút. Ti院p t映c cho thêm 0,5ml dung d鵜ch D, l逸c, 8吋 30 phút và 8q"vt‒p"oƒ{"uq"o w"荏 d逢噂c sóng 750 nm. A欝ng th運i làm 嘘ng ki吋m tra v噂i hóa ch医v"pj逢"嘘ng nghi羽m chu育p"pj逢pi"vjc{"fwpi"f鵜ch protein b茨pi" p逢噂c. D詠a vào m壱v"8瓜 quang, xây d詠pi" 8逢運ng chu育n protein
Zƒe"8鵜pj"j o"n逢嬰ng protein-enzyme
L医y 1ml dung d鵜ch protein nghiên c泳u cho vào 嘘ng nghi羽m, cho thêm 5 ml dung d鵜ch C. L逸e" 8隠w." 8吋 荏 nhi羽v"8瓜 trong 10 phút. Ti院p t映c cho thêm 0,5 ml dung d鵜ch D, l逸c, 8吋 30 phút và 8q"vt‒p"oƒ{"uq"o w"荏 d逢噂c sóng 750 po0"A欝ng th運i làm 嘘ng ki吋m tra v噂i hóa ch医v"pj逢"嘘ng nghi羽m chu育p"pj逢pi"vjc{"fwpi"f鵜ch protein b茨pi"p逢噂c. N欝ng 8瓜 protein nghiên c泳w"8逢嬰e"v pj"vjgq"n逢嬰ng protein 荏 8欝 th鵜 chu育n.
40
2.4.2 Rj逢挨pi"rjƒr" zƒe"8鵜pj"n逢嬰pi"8逢運ng kh穎 theo Miller
Nguyên t逸c
Rj逢挨pi" rjƒr" p {" f詠c" vt‒p" e挨" u荏 ph違n 泳ng t衣o màu gi英c" 8逢運ng kh穎 v噂i thu嘘c th穎 3,5- fkpkvtqucnku{nke" *FPU+0"E逢運pi"8瓜 màu c栄a h厩n h嬰p ph違n 泳ng t益 l羽 thu壱n v噂i n欝ng 8瓜8逢運ng kh穎.
D詠c" vjgq"8欝 th鵜 chu育n c栄a glucose tinh khi院t v噂i thu嘘c th穎 acid dinitrosalisylic s胤 v pj"8逢嬰e"j o"n逢嬰pi"8逢運ng kh穎 c栄a m磯u nghiên c泳u.
Hoá ch医t
Thu嘘c th穎 acid dinitrosalisylic (DNS): cân 1g DNS pha trong 20 ml dung d鵜ch NaOH 2N, thêm vào 50 on"p逢噂c c医t và 30 g mu嘘k"uqfkwo"rqvcuukwo"vctvtcvg0"Awp"pj姻 cho tan r欝k"8鵜nh m泳c t噂i 100 ml.
Dung d鵜ch glucose m磯u (1mg/ml): cân chính xác 100 mg D-glucose, hòa tan trong 100
ml n逢噂c c医t.
Cách ti院n hành
D詠pi"8逢運ng chu育n glucose
T瑛 dung d鵜ch glucose chu育n, pha các dung d鵜ch glucose chu育n có n欝pi"8瓜 t瑛 0 Î 1000 (mg/ml).
V胤 8逢運ng chu育n glucose v噂i tr映c tung là m壱v"8瓜 quang, tr映c hoành là n欝pi"8瓜 glucose.
Ti院n hành thí nghi羽m:
Ph違n 泳ng c栄a dung d鵜ej" 8逢運ng c亥n phân tích v噂i thu嘘c th穎 FPU"8逢嬰c ti院p"j pj"pj逢" trong ph亥n xây d詠pi" 8欝 th鵜 chu育n. N欝pi" 8瓜 8逢運ng kh穎 trong m磯w"8逢嬰e"zƒe"8鵜nh nh運 x q"8逢運ng chu育p" inwequg"8ã d詠ng.
2.4.3 Rj逢挨pi"rjƒr" zƒe"8鵜nh ho衣t tính enzyme c嘘8鵜nh
Chúng tôi s穎 d映pi" 8逢運ng chu育n n欝pi" 8瓜 ONP theo m壱v" 8瓜 quang làm e挨" u荏 xác 8鵜nh n欝pi"8瓜 ONP mM sinh ra khi enzyme th栄y phân ONPG.
41 J·pj"406"A逢運ng chu育n n欝pi"8瓜 ONP (mM) [12]
Cách ti院n hành:
Cân 1 g ch院 ph育m -galactosidase c嘘 8鵜nh cho vào 嘘ng nghi羽m. Cho thêm vào 嘘ng nghi羽m 2.80 ml sodium phosphate 0.02 mol/l, pH 7.5 l逸e"8隠w"vtqpi"42"rj¿v0"Ucw"8„"ejq" vào 0.2 ml ONPG 10 mM, ph違n 泳pi"vtqpi"32"rj¿v0"Ago"8q"o壱v"8瓜 quang 荏 d逢噂c sóng 420 nm [12].
M瓜v" 8挨p"x鵜 enzyme c嘘 8鵜pj"W"8逢嬰c bi吋u di宇p"pj逢"n逢嬰ng enzyme chuy吋p"j„c"8逢嬰c 1 µmol ONPG trong 1 phút (µmol ONP.ph-1.g-1).
Piq k"tc."8吋 so sánh ho衣t tính enzyme t詠 do và enzyme c嘘 8鵜nh. Chúng tôi s穎 d映ng 8挨p"x鵜 ho衣t tính riêng (U/ mg+"n o"e挨"u荏 8ƒpj"ikƒ0
2.4.4 Rj逢挨pi"rjƒr" v衣o thiolsulfinate- agarose
42
D逢噂c 1: T衣o pha r逸n thiol- agarose
Hòa 15g b瓜t agarose trong 15 ml NaOH 1M; Cho vào c育n th壱n 2.5 ml
epichlorhoydrin, khu医{"8隠u; 曳 swc"8‒o"荏 nhi羽v"8瓜 phòng (22- 25 0C ) l逸c liên t映c. Sau 8„." ehuy吋n qua m瓜t ph宇u l丑c th栄y tinh và r穎a s衣ch b茨pi" p逢噂c c医t, thao tác nhanh chóng.
D逢噂c ti院p theo cho vào h羽 gel 0.5 M dung d鵜ej"8羽m sodium phosphate, pH 6.5 và 8鵜nh m泳c lên 15 ml v噂i dung d鵜ej"8羽m trên. Ti院p t映c cho vào 15 ml sodium thiosulfate 2M và 栄 swc" 8‒o"荏 nhi羽v"8瓜 phòng (22- 250C ), l逸e"8隠u. Th運i gian t嘘i thi吋u là 6 gi運. Ucw" 8„" n衣i r穎a b茨pi" p逢噂c c医v0" N逢w" j羽 ign" vt‒p" vtqpi" p逢噂c c医t 荏 4 0E" 8院n khi c亥n s穎 d映ng.
D逢噂c quan tr丑pi" 8吋 hình thành thiol- agarose: l医y 15 g h羽 gel trên hòa vào 15 ml
dung d鵜ej" 8羽m sodium bicarbonate 0.2 M, pH 8.5; Hòa tan 3g DTT trong 15 ml
ethylene diamine tetraacetic 1mO"*GFVC+."ucw"8„"ejq"x q"j羽 gel trên; 曳 h鰻n h嬰p trên trong su嘘t 1 gi運 荏 nhi羽v"8瓜 phòng (22- 25 0C) có l逸e"8隠u.
Cu嘘i cùng, chuy吋n h厩n h嬰p trên vào ph宇u l丑c th栄y tinh và r穎a v噂i các dung d鵜ch sau theo th泳 t詠: dung d鵜ej" 8羽o" uqfkwo" dkectdqpcvg" 204" O." rJ" :07=" p逢噂c c医t; dung d鵜ch acetic acid 0.1 M 8吋 lo衣i b臼 DTT.
Nh英pi"d逢噂c th詠c hi羽n trên s胤 vjw"8逢嬰c d磯n xu医t thiol- agarose có ch泳a t瑛 400- 600 µmol nhóm liên k院t thiol trên 1 gram gel khô [11].
D逢噂c 2: Disulfide-agarose (S2-Gel)
Cho 15 gram thiol-agarose vào 30 ml dung d鵜ej"8羽m sodium phosphate 0.1M, pH 902" x " ucw" 8„" ejq"thêm 1ml dung d鵜ch potassium ferricyanide K3Fe(CN)6 0.1 M. L逸c 8隠w"ejq"8院n khi ph亥p" rj¤p" p逢噂e"o w"x pi" 8逢嬰c kéo dài ít nh医t 30 phút.
Ucw" 8„" t穎a gel qua m瓜t ph吋u l丑c th栄y tinh b茨ng dung d鵜ej" 8羽o." PcEn" 3O." 8羽m sodium acetate 0.2 M, pH 5.0. Lúc này có th吋 gi違 8鵜nh r茨ng các liên k院t disulfide S-S t瑛 S2- gel là 50 % t瑛 thiol trong thiol-agarose.
43
D逢噂c 3: Thiolsulfinate-agarose (TSI-Gel)
Cho 15 gram S2-gel trong 100 ml dung d鵜ej" 8羽m sodium acetate 0.2M, pH 5.0. Yêu c亥w" 8員t ra 荏 8¤{" n " rj違i b鰻 sung 67 mg magnesium monoperoxyphthalate (MMPP). H厩n h嬰r"8逢嬰c 栄荏 nhi羽v"8瓜 phòng (22- 25 0C) và l逸e"8隠u trong su嘘t 2 gi運.
Ucw" mjk" 8逢嬰c 栄 荏 nhi羽v" 8瓜 phòng, h厩n h嬰r" 8逢嬰c r穎a b茨ng dung d鵜ej" 8羽m sodium acetate 0.2M, pH 5.0 và 0.1 M acid acetic.
Ucw" mjk" 8逢嬰c r穎a, h厩n h嬰r" 8逢嬰e" n逢w" 荏 4 0C trong dung d鵜ej" 8羽m sodium acetate 0.2M, pH 5.0.
2.4.5 Rj逢挨pi"rjƒr" z穎 lý s嘘 li羽u
Các k院t qu違 th詠c nghi羽o"vtqpi"8隠 v k"8逢嬰c x穎 lý v噂i ph亥n m隠m Exel, SPSS. Các thí nghi羽o"8隠w"8逢嬰c l員p l衣i t瑛 4"8院n 3 l亥p0"Zƒe"8鵜pj"R">"2027"e„"#"pij c" vj嘘ng kê
44
EJ姶愛PI"50"M蔭T QU謂 VÀ BÀN LU一N
3.1 Kh違o sát ti隠n 8隠 tài
3.1.1 A鵜pj"n逢嬰ng protein-enzyme
A吋 8鵜pj" n逢嬰ng protein-enzyme có trong m磯u, chúng tôi ti院n hành xây d詠pi"8逢運ng chu育n protein d詠a vào n欝pi" 8瓜 albumin. K院t qu違 8逢運ng chu育p"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 8欝 th鵜 3.1.
A欝 th鵜503"A逢運ng chu育n n欝pi"8瓜 albumin (mg/ml)
D詠a vào 8欝 th鵜 503." ej¿pi" v»k" vjw" 8逢嬰e" rj逢挨pi" vt·pj" vw{院n tính gi英a n欝pi" 8瓜 protein (mg/ml) và m壱v"8瓜 quang (OD): y = 2.715x + 0.0577 v噂i R2= 0.9961.
T瑛 8逢運ng chu育p" vjw" 8逢嬰c, chúng tôi ti院n hành thí nghi羽o" 8吋 8鵜pj" n逢嬰ng n欝pi"8瓜 protein-enzyme (mg/ml) có trong m磯u. M磯u ch泳c" -icncevqukfcug"8逢嬰c pha loãng 100 l亥n, k院t qu違 n欝pi"8瓜 protein-enzyme (mg/ml) vjw"8逢嬰e"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 b違ng 3.1.
y = 2.715x + 0.0577 R² = 0.9961 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 I c" vt 鵜"Q F "*"972"p o + P欝pi"8瓜"albumin (mg/ml) o壱v"8瓜"swcpi Nkpgct" *o壱v"8瓜"swcpi+
45 B違ng 3.1 N欝pi"8瓜 protein-enzyme M院v"sw違 OD0 ODLactase ÄQF I c"vt鵜"QF 0.896 1.234 0.338 P欝pi"8瓜"rtqvgkp-enzyme (mg/ml) 0.103 P欝pi"8瓜"rtqvgkp-gp¦{og"dcp"8亥w" (mg/ml) 10.324
V噂i giá tr鵜 ÄQF là 0.338, ej¿pi" v»k" v pj" 8逢嬰c n欝pi" 8瓜 protein-enzyme có trong
m磯u là 10.324 mg/ml.
Vｆy, qua các thí nghiうm khＶq"uƒv"dcp"8Ｚw."ej¿pi"v»k"vjw"8⇔ぢc nげpi"8じ protein- enzyme trong mｄu là 10.324 mg/ml.
3.1.2 Zƒe" 8鵜nh ho衣t tính, ho衣t tính riêng và các y院u t嘘 違pj" j逢荏ng lên 糎-
galactosidase t詠 do
N " vj逢噂e" 8q" 8吋 8ƒpj" ikƒ" jq衣t tính enzyme c嘘 8鵜nh, chúng tôi ti院n hành kh違o sát ho衣t tính, ho衣t tính riêng c栄a enzyme t詠 do.
3.1.2.1 Zƒe"8鵜nh ho衣t tính, ho衣t tính riêng c栄a 糎-galactosidase t詠 do
A吋 zƒe" 8鵜nh ho衣t tính (U/ml), ho衣t tính riêng (U/mg) c栄a enzyme, chúng tôi pha loãng enzyme 10 l亥n và cho ph違n 泳ng v噂i ONPG 10 mM 荏 8k隠u ki羽n pH = 7.5, nhi羽t 8瓜 50 0C th運i gian ph違n 泳ng trong 1 phút qua 3 l亥n l員p l衣i, k院t qu違 8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 b違ng 3.2. B違ng 3.2 Ho衣t tính, ho衣t tính riêng c栄c" -galactosidase I c"vt鵜 O磯w"vt逸pi O磯w"Gp¦{og O壱v"8瓜"swcpi" C 1.520 2.178 Jq衣v"v pj"gp¦{og" *W1on) 57.22 Jq衣v"v pj"tk‒pi"*W1oi) 5.54
46 D詠a vào b違ng 3.2, ta th医y giá tr鵜 ho衣t tính c栄a enzyme là 57.22 W1on0" X噂k" ikƒ" vt鵜" n欝pi" 8瓜 protein- enzyme trong m磯w" n " 320546" oi1on." ej¿pi" v»k" v pj" 8逢嬰c ho衣t tính riêng c栄a enzyme là 5.54 U/mg. Theo pijk‒p"e泳w"e栄c"pj„o"vƒe"ik違"Ock"Vjcpj"Vtw{隠p" *4234+" mjk" e嘘" 8鵜pj" -galactosidase trên ph泳c CMC- alginate, nhóm tác gi違 công b嘘 jq衣v" v pj" tk‒pi" e栄c" -galactosidase là 4.27 U/mg [3]. Ho衣t tính enzyme khác nhau vì enzyme có ngu欝n g嘘c khác nhau và ch院8瓜 b違o qu違n 違pj" j逢荏pi" 8院n ho衣t tính.
Vｆy mｄw" -icncevqukfcug"8⇔ぢc dùng trong nghiên cとu cてa chúng tôi có hoＴt tính và
hoＴt tính riêng lＺp"n⇔ぢt là 57.22 U/ml, 5.54 U/mg.
3.1.2.2 Zƒe"8鵜nh pH t嘘k"逢w (pHopt) c栄c" -galactosidase t詠 do
Giá tr鵜 pH c栄c"o»k"vt逢運pi"vj逢運ng 違pj"j逢荏pi"8院n m泳e"8瓜 kqp"j„c"e挨"ej医t, enzyme x "8員c bi羽t 違pj"j逢荏pi"8院p"8瓜 b隠n c栄a enzyme. Chính vì th院 pH có 違pj"j逢荏ng r医t m衣nh 8院n ph違n 泳ng c栄c" gp¦{og0" Fq" 8„." ej¿pi" v»k" vk院n hành các thí nghi羽o" 8吋 kh違o sát kho違ng pH ho衣v" 8瓜ng 鰻p" 8鵜nh c栄c" gp¦{og." swc" 8„" zƒe" 8鵜nh giá tr鵜 pH t嘘k"逢w"*rJotp). K院t qu違 8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 b違ng 3.3. B違ng 3.3 謂pj" j逢荏ng c栄a pH lên ho衣t tính c栄a -galactosidase t詠 do I c"vt鵜"RJ Jq衣v"v pj" -icncevqukfcug""v詠"fq" (U/ml) % Jq衣v"v pj 5.5 31.13 ± 0.02 54.24 6.0 35.65 ± 0.03 62.12 6.5 51.57 ± 0.03 89.85 7.0 52.30 ± 0.03 91.13 7.5 57.39 ± 0.02 100.00 8.0 41.48 ± 0.03 72.27
Các giá tr鵜 trong b違ng bi吋u th鵜 giá tr鵜vtwpi"d·pj"ł"8瓜 l羽ch chu育n c栄a 3 m磯w"8瓜c l壱p
D詠a vào b違ng 3.3, ta có th吋 th医y ho衣v" v pj" -icncevqukfcug" v<pi" f亥n trong kho違ng pH t瑛 607" 8院p" 907" x " 8衣t ho衣t tính cao nh医t 57.39 U/ml t衣i pH 7.5. Ho衣t tính b逸v"8亥u gi違m t衣i pH 8.0.
47 Xem ho衣v"v pj" -galactosidase t衣i pH cho giá tr鵜 cao nh医t là 100%, ph亥p"vt<o"jq衣t v pj" -galactosidase t衣i các giá tr鵜 pH còn l衣k"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏8欝 th鵜 3.2.
A欝 th鵜 3.2 謂pj" j逢荏ng c栄a pH lên ho衣v"v pj" -galactosidase t詠 do
D詠c"x q"8欝 th鵜, ta th医y ho衣t tính enzyme 鰻p"8鵜nh trong kho違ng pH t瑛 6.5- 8.0. Ho衣t tính enzyme cao nh医t 荏 pH 7.5 và b逸v"8亥u gi違m 荏 rJ":02"pj逢pi"x磯n trên 70% ho衣t tính. Theo nghiên c泳u c栄a Caroline Mair (2010) v噂k"e挨"ej医v"n "QPRI." -galactosidase ho衣t 8瓜ng 鰻p" 8鵜nh 荏 pH t瑛 5.5- :02."vtqpi"8„"rJotp là 7.0 [15]. T瑛 8„"ejq"vj医{"gp¦{og" - galactosidase c栄c" 8隠 tài có kho違ng pH ho衣v" 8瓜ng t瑛 6.5- 8.0 v逢挨pi" 8嘘i phù h嬰p v噂i nghiên c泳u trên.
Vｆy, -galactosidase cてc"8ｚ tài có khoＶng pH hoＴv"8じng tな 6.5- :02."vtqpi"8„"pH
hoＴv"8じng tぐk"⇔w"n "9070
3.1.2.3 Zƒe"8鵜nh nhi羽v"8瓜 t嘘k"逢w"*Vopt) c栄c" -galactosidase t詠 do
Nhi羽v" 8瓜 có 違pj" j逢荏ng r医t l噂p" 8院n ph違n 泳ng enzyme. T嘘e" 8瓜 ph違n 泳ng enzyme không ph違k" n¿e" p q" e pi" v益 l羽 thu壱n v噂i nhi羽v" 8瓜 ph違n 泳ng. T嘘e"8瓜 ph違n 泳ng ch雨 v<pi" 8院n m瓜t gi噂i h衣n nhi羽v"8瓜 nh医v"8鵜pj0"X逢嬰t quá nhi羽v"8瓜 8„."v嘘e"8瓜 ph違n 泳ng enzyme s胤 gi違o" 8院n m泳c tri羽t tiêu. Fq"8„."ucw"mjk"zƒe"8鵜pj"8逢嬰c kho違ng pH ho衣v"8瓜ng và pHotp
54.24 62.12 89.85 91.13 100.00 72.27 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 '"J q衣v "v pj pH Х"Kﾗ緯 " ｹﾐｴ
48 c栄c" -galactosidase, chúng tôi ti院p t映c ti院n hành kh違o sát nhi羽v"8瓜 ho衣v"8瓜ng và nhi羽t 8瓜 t嘘k"逢w"*Vopt). K院t qu違 8逢嬰c trình bày trên b違ng 3.4.
B違ng 3.4 謂pj" j逢荏ng c栄a nhi羽v"8瓜 lên ho衣v"v pj" -galactosidase t詠 do Pjk羽v"8瓜"*0 C) Jq衣v"v pj"ncevcug"v詠"fq" (U/ml) '"Jq衣v"v pj 30 41.87 ± 0.01 72.38 40 57.85 ± 0.01 100.00 45 51.61 ± 0.02 89.21 50 51.24 ± 0.02 88.57 55 32.54 ± 0.02 56.25 60 10.79 ± 0.12 18.65
Các giá tr鵜 trong b違ng bi吋u th鵜 giá tr鵜vtwpi"d·pj"ł"8瓜 l羽ch chu育n c栄a 3 m磯w"8瓜c l壱p
T瑛 b違ng 3.4 cho th医y v噂i pH0tp= 7.5, -galactosidase ho衣v"8瓜ng trong kho違ng nhi羽t 8瓜 t瑛 40- 50 0C0"Vtqpi"8„ ho衣t tính cao nh医t t衣i 40 0C v噂i giá tr鵜 là 790:7"W1on0"Jq衣v" v pj"d逸v 8亥w"ik違o"mjk"p¤pi" pjk羽v"8瓜"v瑛"75- 60 0C.
P院w"zgo"jq衣v"v pj" -galactosidase v詠"fq"v衣k"62 0E"n "322'."vj·"rj亥p"vt<o"jq衣v"v pj enzyme v衣k"eƒe"ikƒ"vt鵜"pjk羽v"8瓜"e”p"n衣k"8逢嬰e"vj吋"jk羽p"荏"8欝"vj鵜"505.
F詠c"x q"8欝"vj鵜"505."vc"vj医{"jq衣v"v pj"gp¦{og"n噂p"j挨p":2"'"vtqpi"mjq違pi"62- 50 0C, mjk" p¤pi" pjk羽v" n‒p" 72"0E"vj·"jq衣v"v pj"e”p"::079"'0"Vk院r"v映e"v<pi"pjk羽v"8瓜"n‒p"82"0
C, jq衣v" v pj" ik違o" e”p" 3:087" '0" " M院v" sw違" p {" v逢挨pi" 8嘘k" rj́" j嬰r" x噂k" pijk‒p" e泳w" e栄c" Ectqnkpg"Ockt"*4232+"mjk"pjk羽v"8瓜"v嘘k"逢w"n "67"0E"x "mjq違pi"pjk羽v"8瓜"jq衣v"8瓜pi"鰻p"8鵜pj" là 40- 50 0E" ]37̲0" Vjgq" pijk‒p" e泳w" e栄c" pj„o" vƒe" ik違" Ock" Vjcpj" Vtw{隠p" *4234+" vj·" pjk羽v"8瓜 jq衣v"8瓜pi"e栄c" -galactosidase có ngu欝n g嘘c t瑛 B. licheniformis t瑛 40- 50 0C, jq衣v"v pj"ik違o"o衣pj"e”p":03"'"荏"82"0
49 A欝 th鵜 3.3 謂pj" j逢荏ng c栄a nhi羽v"8瓜 lên ho衣t tính -galactosidase t詠 do
Xｆ{" -galactosidase tば do trong nghiên cとu có hoＴt tính và hoＴt tính riêng lＺp"n⇔ぢt
là 79044" W1on"x "7076"W1oi0"Pjkうv"8じ"jqＴv"8じpi"eてc" -galactosidase là 40- 50 0C,
vtqpi"8„"pjkうv"8じ"jqＴv"8じpi"vぐk"⇔w"n "62"0E0"MjqＶpi"rJ"jqＴv"8じpi"eてc" -galactosidase
là 6.5- 8.2."vtqpi"8„"rJ"vぐk"⇔w"n "9070
3.2 C嘘8鵜nh 糎-galactosidase vào ch医t mang TSI-gel
A吋 gp¦{og"8逢嬰c c嘘 8鵜nh vào ch医t mang m瓜t cách hi羽u qu違, chúng tôi ti院n hành thí nghi羽m kh違o sát n欝pi" 8瓜 phù h嬰p gi英a ch医t mang và enzyme. Trong thí nghi羽m này, giá tr鵜 c栄a các y院u t嘘8吋 c嘘8鵜pj" -icncevqukfcug"pj逢"ucw<
‚ Th吋 tích enzyme: 1.0 ml.
‚ N欝pi"8瓜cictqug"vjc{"8鰻i: 0.50 %, 1.00 %, 1.50 %, 2.00 %
‚ N欝pi"8瓜 TSI-gel vjc{"8鰻i: 0.50 %, 1.00 %, 1.50 %, 2.00 %, 2.50 %, 3.00 % ‚ T益 l羽 enzyme: ch医t mang là 1:9 (v/v).
D詠a vào hi羽u su医t c嘘 8鵜nh, chúng tôi l詠a ch丑p" 8逢嬰c n欝pi" 8瓜 agarose và TSI-gel phù h嬰p dùng cho c嘘8鵜nh enzyme. K院t qu違 8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 b違ng 3.5. 72.38 100.00 89.21 88.57 56.25 18.65 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 25 30 35 40 45 50 55 60 65 '" J q衣 v"v pj Pjk羽v"8瓜"*"0 C) Х"Kﾗ緯 " ｹﾐｴ
50 B違ng 3.5 Hi羽u su医t c嘘8鵜nh v噂i các n欝pi"8瓜 khác nhau c栄a agarose và TSI-gel
%Agarose (W/v) Jk羽w"uw医v"e嘘"8鵜pj (%) 0.50 23.06 ± 0.31 1.00 61.47 ± 0.21 1.50 42.92 ± 0.41 2.00 A„pi"t逸p"vt逢噂e"mjk"d鰻"uwpi"gp¦{og %TSI-gel (W/v) Jk羽w"uw医v"e嘘"8鵜pj"*'+ 0.50 36.38 ± 0.31 1.00 44.04 ± 0.31 1.50 68.12 ± 0.43 2.00 78.24 ± 0.21 2.50 54.21 ± 0.31 3.00 A„pi"t逸p"vt逢噂e"mjk"d鰻"uwpi"gp¦{og Các giá tr鵜 trong b違ng bi吋u th鵜 giá tr鵜vtwpi"d·pj"ł"8瓜 l羽ch chu育n c栄a 3 m磯w"8瓜c l壱p